سال 10، شماره 5 - ( آذر - دی 1395 )
جلد 10 شماره 5 صفحات 19-11 |
برگشت به فهرست نسخه ها
Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
Ahmadpour A, Fatahi E, Jafar A, Imani Fooladi A A, Tabar Molahassan A. Detection of Shigella dysenteriae STX1 gene from Mazandaran province clinical samples by PCR-ELISA method . Iran J Med Microbiol 2016; 10 (5) :11-19
URL: http://ijmm.ir/article-1-469-fa.html
URL: http://ijmm.ir/article-1-469-fa.html
احمدپور عسکری، فتاحی اسماعیل، امانی جعفر، ایمانی فولادی عباسعلی، تبار ملاحسن عقیل. تشخیص ژن Stx1 درشیگلا دیسانتریه جدا شده از نمونه های بالینی در استان مازندران با استفاده ازتکنیک PCR-ELISA. مجله میکروب شناسی پزشکی ایران. 1395; 10 (5) :11-19
1- گروه زیست شناسی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد آیت ا... آملی، آمل، ایران
2- مرکز تحقیقات میکروبیولوژی کاربردی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه ا... (عج)، تهران، ایران ،jafar.amani@gmail.com
3- مرکز تحقیقات میکروبیولوژی کاربردی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه ا... (عج)، تهران، ایران
4- گروه ایمونولوژی، دانشکده پزشکی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد بابل، بابل، ایران
2- مرکز تحقیقات میکروبیولوژی کاربردی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه ا... (عج)، تهران، ایران ،
3- مرکز تحقیقات میکروبیولوژی کاربردی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه ا... (عج)، تهران، ایران
4- گروه ایمونولوژی، دانشکده پزشکی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد بابل، بابل، ایران
چکیده: (9143 مشاهده)
هدف: در میان باکتریهای خانواده آنتروباکتریاسه، شیگلا دیسانتریه بدلیل تولید توکسین پروتئینی تحت عنوان شیگاتوکسین با داشتن فعالیت سیتوتوکسینی و نوروتوکسینی موجب بیماریهایی اسهال، گاستروانتریت و اختلال ا نعقاد داخل عروقی می شود که امروزه به عنوان مهمترین چالش برای سلامتی انسانها مطرح می باشند. هر چند روشهای کلاسیک ومتداول میکروبیولوژی برای تشخیص حساس واختصاصی می باشند اما محدودیت های خاص خود را دارند. لذا این مطالعه بمنظور رفع محدودیت ها و شناسایی توکسین Stx1 در کمترین زمان و میزان در شیگلا دیسا نتریه با حساسیت و اختصاصیت بالا بوسیله تکنیکPCR-ELISA انجام شد.
مواد وروش ها: توالی Stx1 (bp490) بعنوان ژن هدف با استفاده از DIG-dUTP نشاندار تکثیر و سپس محصول نشاندار شده کف میکروپلیت الایزا کوت شده و در نهایت با استفاده از آنتی بادی ضد دیگوکسی ژنین کانژوگه شناسایی انجام شد. همچنین حساسیت و اختصاصیت این تکنیک با نمونه های بالینی مورد بررسی قرار گرفت.
یافته ها : حساسیت تشخیص باکتری در نمونه بررسی شده با استفاده از DNA ژنومی pg 56/1 برای شیگلا دیسانتریه تعیین ودر بررسی اختصاصیت این تکنیک بغیر از شیگلا دیسانتریه دیگر گونه های خانواده انتروباکتریاسه جذب قابل قبولی نداشتند . الیزا مربوط بهDNA ژنومی تا رقت 156/0 پیکوگرم ازجذب معنی داری داشت. از 70 نمونه بالینی مورد بررسی 3 نمونه حاوی ژن stx1 با این تکنیک شناسایی شد.
نتیجه گیری: کارایی تکنیک PCR-ELISA نشان داد علاوه بر سادگی، سریع بودن و برخورداری از حساسیت واختصاصیت بالا جایگزینی مناسب برای روش کشت و PCR می باشد و براحتی قابلیت کاربردی شدن در هر آزمایشگاه طبی را دارد.
نوع مطالعه: مقاله پژوهشی |
موضوع مقاله:
باکتری شناسی پزشکی
دریافت: 1394/6/11 | پذیرش: 1395/7/28 | انتشار الکترونیک: 1395/10/26
دریافت: 1394/6/11 | پذیرش: 1395/7/28 | انتشار الکترونیک: 1395/10/26
فهرست منابع
1. Kim SH, Lee SR, Kim KS, Ko A, Kim E, Kim YH, Chang KT. Shiga toxin A subunit mutant of Escherichia coli O157:H7 releases outer membrane vesicles containing the B-pentameric complex. FEMS Immunol Med Microbiol 2010;58(3):412-20. [PubMed]
2. Cherla RP1, Lee SY, Tesh VL. Shiga toxins and apoptosis. FEMS Microbiol Lett 2003; 228(2):159-66. [PubMed]
3. Lingwood CA1. Shiga toxin receptor glycolipid binding. Pathology and utility. Methods Mol Med 2003;73:165-86. [PubMed]
4. Odumosu O, Nicholas D, Yano H, Langridge W. AB toxins: a paradigm switch from deadly to desirable. Toxins 2010; 2(7):1612-45. [PubMed]
5. Huang A, Friesen J, Brunton JL. Characterization of a bacteriophage that carries the genes for production of Shiga-like toxin 1 in Escherichia coli. J Bacteriol 1987;169(9):4308-12. [PubMed]
6. Waren BR, Parsh ME, Schneider KR. Shigella as foodborne pathogen and current methods for detection in food. Crit Rev Food Sci Nutr 2006; 46(7):551-67. [PubMed]
7. Green MS, Block C, Cohen D, Slater PE. Our decades of shigellosis in Israel: epidemiology of a growing public health problem. Rev Infect Dis 1991;13(2):248-53.
8. Sandvig K. Shiga toxins. Toxicon 2001;39(11):1629-35. [PubMed]
9. Siegler RL. Postdiarrheal Shiga toxin-mediated hemolytic uremic syndrome. JAMA 2003; 290(10):1379-81. [PubMed]
10. O'Loughlin EV, Robins-Browne RM. Effect of Shiga toxin and Shiga-like toxins on eukaryotic cells. Microbes Infect 2001;3(6):493-507. [PubMed]
11. Teel LD, Steinberg BR, Aronson NE, O'Brien AD. Shiga toxin-producing Escherichia coli-associated kidney failure in a 40-year-old patient and late diagnosis by novel bacteriologic and toxin detection methods. J Clin Microbiol 2003;41(7):3438-40. [PubMed]
12. Crowther JR. ELISA. Theory and practice. Methods Mol Biol. 1995;42:1-218. [PubMed]
13. Hesaraki M, Saadati S, Honari H, Olad G, Ranjbar R, Heiat M, Tat M. Induction of immune response against IpaD N-terminal region of Shigella dysenteriae in Guinea pigs. G3M 2011, 9(1): 2261-2266. [in persion] [Article]
14. Pina DG, Johannes L. Cholera and Shiga toxin B-subunits: thermodynamic and structural considerations for function and biomedical applications.Toxicon 2005;45(4):389-93. [PubMed]
15. MoezArdalan K, Zali MR, Dallal MM, Hemami MR, Salmanzadeh-Ahrabi S. Prevalence and pattern of antimicrobial resistance of Shigella species among patients with acute diarrhoea in Karaj, Tehran, Iran. Tehran, Iran. J Health Popul Nutr 2003;21(2):96-102. [in persion] [PubMed]
16. Feng P, Sandlin RC, Park CH, Wilson RA, Nishibuchi M. Identification of a rough strain of Escherichia coli O157:H7 that produces no detectable O157 antigen. J Clin Microbiol 1998; 36(8): 2339-41. [PubMed]
17. Beutin L, Zimmermann S, Gleier K. Rapid detection and isolation of shiga-like toxin (verocytotoxin)-producing Escherichia coli by direct testing of individual enterohemolytic colonies from washed sheep blood agar plates in the VTEC-RPLA assay. J Clin Microbiol 1996; 34(11): 2812–2814. [PubMed]
18. Son I, Binet R, Maounounen-Laasri A, Lin A, Hammack TS, Kase JA. Detection of five Shiga toxin-producing Escherichia coli genes with multiplex PCR. Food Microbiol 2014;40:31-40. [PubMed]
19. Margot H, Cernela N, Iversen C, Zweifel C, Stephan R. Evaluation of seven different commercially available real-time PCR assays for detection of shiga toxin 1 and 2 gene subtypes and 2 gene subtypes. J Food Prot 2013;76(5):871-3. [PubMed]
20. Beutin L, Zimmermann S, Gleier K. Rapid detection and isolation of shiga-like toxin (verocytotoxin)-producing Escherichia coli by direct testing of individual enterohemolytic colonies from washed sheep blood agar plates in the VTEC-RPLA assay. J Clin Microbiol 1996;34(11):2812-4. [PubMed]
21. Fach P, Perelle S, Dilasser F, Grout J. Comparison between a PCR-ELISA test and the vero cell assay for detecting Shiga toxin-producing Escherichia coli in dairy products and characterization of virulence traits of the isolated strains.J Appl Microbiol 2001;90(5):809-18. [PubMed]
22. Daly P, Collier T, Doyle S.PCR-ELISA detection of Escherichia coli in milk. Lett Appl Microbiol 2002;34(3):222-6. [PubMed]
23. Morata P, Queipo-Ortuño MI, Reguera JM, García-Ordoñez MA, Cárdenas A, Colmenero JD. Development and evaluation of a PCR-enzyme-linked immunosorbent assay for diagnosis of human brucellosis. J Clin Microbiol 2003;41(1):144-8. [PubMed]
24. Mousavi SL, Nazarian S, Amani J, Rahgerdi AK. Rapid screening of toxigenic vibrio cholerae O1 strains from south Iran by PCR-ELISA. Iran Biomed J 2008;12(1):15-21. [in persion] [PubMed]
25. Mousavi SL, Salimiyan J, Karimi Rahgerdi A, Amani J, Nazarian S, Ardestani H. A rapid and specific PCR–ELISA for detecting Salmonella typhi. Iranian J Clin Infect Dis 2006;1(3): 113-119. [in persion] [Article]
26. Elmi A, Forouzandeh M, Bojary MR. Diagnosis of Helicobacter pylori infection in stool specimen by PCR-ELISA of ureC gene. MJMS 2011;13(4):67-76. [in persion] [Article]
27. Esfandiari P, Amani J, Imani Fooladi AA, Forghanifard MM, Mirhossaini SA. Detection of heat-labile toxin in enterotoxigenic Escherichia coli using PCR-ELISA technique. J Gorgan Uni Med Sci 2015; 17(3):114-12. [in persion] [Article]
ارسال پیام به نویسنده مسئول
| بازنشر اطلاعات | |
 |
این مقاله تحت شرایط Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License قابل بازنشر است. |
