سال 4، شماره 3 - ( پاییز 1389 )
جلد 4 شماره 3 صفحات 13-7 |
برگشت به فهرست نسخه ها
Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
Farnad M, Khanahmad Shahreza H, Tabaraee B, Yazdan pana B, Movassagh H, Rostami M, et al . Design and construction of an expression plasmid containing mycobacterial ESAT-6, CFP-10 fusion protein cassette. Iran J Med Microbiol 2010; 4 (3) :7-13
URL: http://ijmm.ir/article-1-30-fa.html
URL: http://ijmm.ir/article-1-30-fa.html
فرناد مرصع، خان احمد شهررضا حسین، تبرائی بهمن، یزدان پناه بهادر، موثق حسام، رستمی منوچهر، و همکاران. و همکاران.. طراحی و ساخت پلاسمید حاوی کاست بیانی فیوژن پروتئین CFP-10، ESAT-6 مایکوباکتریوم توبرکولوزیس. مجله میکروب شناسی پزشکی ایران. 1389; 4 (3) :7-13
مرصع فرناد1 
، حسین خان احمد شهررضا2 ، بهمن تبرائی2 ، بهادر یزدان پناه2 ، حسام موثق2 ، منوچهر رستمی2 ، طیبه سهرابی2 ، رسول موخواه2 ، جواد زره ساز3 ، رحیم پیر حاجتی مهابادی3
، حسین خان احمد شهررضا2 ، بهمن تبرائی2 ، بهادر یزدان پناه2 ، حسام موثق2 ، منوچهر رستمی2 ، طیبه سهرابی2 ، رسول موخواه2 ، جواد زره ساز3 ، رحیم پیر حاجتی مهابادی3
1- دانشگاه آزاد اسلامی، واحد زنجان
2- مجتمع تولیدی تحقیقاتی انستیتو پاستور ایران
3- دانشگاه تربیت مدرس، دانشکده پزشکی، گروه باکتری شناسی
2- مجتمع تولیدی تحقیقاتی انستیتو پاستور ایران
3- دانشگاه تربیت مدرس، دانشکده پزشکی، گروه باکتری شناسی
چکیده: (19441 مشاهده)
زمینه و اهداف: در قرن گذشته تنها روش تشخیص عفونت نهفته مایکوباکتریوم توبرکولوزیس آزمایش پوستی توبرکولین بود. این آزمایش در بیماران آلوده با دیگر مایکوباکتریوم ها و در افراد واکسینه با BCG نتایج مثبت کاذب دارد. لذا، لزوم روش های تشخیصی کارآمد، سریع و دقیق مطرح می شود. دو آنتی ژن CFP-10و ESAT-6 در تمام مایکوباکتریوم های پاتوژن وجود دارد ولی در سویه های مولد واکسن BCGو مایکوباکتریوم های فرصت طلب از جمله مایکوباکتریوم آویوم وجود ندارد. هدف این مطالعه ساخت سازه بیانی فیوژن پروتئین متشکل از دو ژن اختصاصی رمز کننده CFP-10و ESAT-6 بود. این فیوژن پروتیین در آزمایش اختصاصی تشخیص عفونت فعال و نهفته مایکو باکتریوم توبر کولوزیس به‌کار برده می‌شود.
روش بررسی: DNA مایکوباکتریوم توبرکولوزیس(H37Rv )استخراج و تعیین غلظت گردید. برای تکثیر قطعات ESAT-6 ، CFP-10 و قطعه شامل ESAT-6 و CFP-10 پرایمر طراحی گردید و PCR و Overlap PCR انجام شد. محصول PCR حاصل از فیوژن ESAT-6 و CFP-10 در پلاسمید pTZ57T/A کلون شد. سپس پلاسمید pQE-60 وpT-ESAT-CFP با دو آنزیم BamHI و NcoI هضم شد. محصول هضم آنزیمی روی ژل آگارز، الکتروفورز شد. باندهای DNA حاوی ESAT-CFP و pQE-60 خطی شده از ژل آگارز استخراج گردید. قطعه ESAT-CFP در pQE-60 کلون مجدد شد. کلون‌های به‌دست آمده با PCR، هضم آنزیمی وتعیین توالی ارزیابی گردید. پلاسمید نهایی pQ-ESAT-CFP نامیده شد.
یافته ها: محصولات PCR، پلاسمید pT-ESAT-CFP و پلاسمید نهایی با هضم آنزیمی و تعیین توالی تایید شدند.
نتیجه گیری : با بیان سازه ژنی pQ-ESAT-CFP و تخلیص فیوژن پروتئین حاصل می‌توان از آن برای ساخت کیت تشخیصی مایکوباکتریوم توبرکولوزیس، جایگزین آزمایش توبرکولین، استفاده کرد.
روش بررسی: DNA مایکوباکتریوم توبرکولوزیس(H37Rv )استخراج و تعیین غلظت گردید. برای تکثیر قطعات ESAT-6 ، CFP-10 و قطعه شامل ESAT-6 و CFP-10 پرایمر طراحی گردید و PCR و Overlap PCR انجام شد. محصول PCR حاصل از فیوژن ESAT-6 و CFP-10 در پلاسمید pTZ57T/A کلون شد. سپس پلاسمید pQE-60 وpT-ESAT-CFP با دو آنزیم BamHI و NcoI هضم شد. محصول هضم آنزیمی روی ژل آگارز، الکتروفورز شد. باندهای DNA حاوی ESAT-CFP و pQE-60 خطی شده از ژل آگارز استخراج گردید. قطعه ESAT-CFP در pQE-60 کلون مجدد شد. کلون‌های به‌دست آمده با PCR، هضم آنزیمی وتعیین توالی ارزیابی گردید. پلاسمید نهایی pQ-ESAT-CFP نامیده شد.
یافته ها: محصولات PCR، پلاسمید pT-ESAT-CFP و پلاسمید نهایی با هضم آنزیمی و تعیین توالی تایید شدند.
نتیجه گیری : با بیان سازه ژنی pQ-ESAT-CFP و تخلیص فیوژن پروتئین حاصل می‌توان از آن برای ساخت کیت تشخیصی مایکوباکتریوم توبرکولوزیس، جایگزین آزمایش توبرکولین، استفاده کرد.
نوع مطالعه: مقاله پژوهشی |
موضوع مقاله:
باکتری شناسی پزشکی
دریافت: 1392/8/5 | پذیرش: 1392/8/19 | انتشار الکترونیک: 1392/8/19
دریافت: 1392/8/5 | پذیرش: 1392/8/19 | انتشار الکترونیک: 1392/8/19
| بازنشر اطلاعات | |
 |
این مقاله تحت شرایط Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License قابل بازنشر است. |
