سال 15، شماره 6 - ( آذر - دی 1400 )                   جلد 15 شماره 6 صفحات 691-684 | برگشت به فهرست نسخه ها


XML English Abstract Print


Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:

Najafi K, Haghnazari N, Davari K, Keshavarzi F. Optimal Conditions for Extraction and Purification of Penicillinase Enzyme. Iran J Med Microbiol. 2021; 15 (6) :684-691
URL: http://ijmm.ir/article-1-1474-fa.html
نجفی کامبیز، حقنظری ناهید، داوری کامبیز، کشاورزی فاطمه. شرایط بهینه در استخراج و خالص سازی آنزیم پنی سیلیناز. مجله میکروب شناسی پزشکی ایران. 1400; 15 (6) :691-684

URL: http://ijmm.ir/article-1-1474-fa.html


1- دانشجوی دکترا بیوشیمی، گروه زیست شناسی، واحد سنندج، دانشگاه آزاد اسلامی، سنندج، ایران
2- استادیار بیوشیمی، گروه زیست شناسی، واحد سنندج، دانشگاه آزاد اسلامی، سنندج، ایران
3- استادیار میکروبیولوژی، گروه زیست شناسی، واحد سنندج، دانشگاه آزاد اسلامی، سنندج، ایران
4- دانشیار ژنتیک، گروه زیست شناسی، واحد سنندج، دانشگاه آزاد اسلامی، سنندج، ایران ، f.keshavarzi@iausdj.ac.ir
چکیده:   (834 مشاهده)

زمینه و اهداف:  مطالعه حاضر با هدف بررسی شرایط بهینه برای استخراج و خالص سازی آنزیم پنی سیلیناز انجام شد. منبع آنزیم، با
کتری ۶۳۴۶Bacillus licheniformis  بدست آمده سازمان پژوهش­ های علمی­- صنعتی ایران بود.
مواد و روش کار:  باکتری  B. licheniformisدر محیطی حاوی نمک های معدنی، ترکیبات نیتروژن دار و منابع کربنی کشت داده شد. بعد از برداشت و آماده سازی سوسپانسیون باکتری، تخریب دیواره سلولی باکتری به روش تلفیقی از لیزوزیم و اولتراسونیکاسیون ضعیف جهت تهیه عصاره خام سلولی، صورت گرفت. سپس با روش کروماتوگرافی و الکتروفورز مقدار آنزیم تعیین شد. علاوه بر این، بهترین دمای رشد و بهترین زمان انکوباسیون بر اساس میزان جذب نمونه‌ها در طول موج ۲۴۰ نانومتر، میزان فعالیت آنزیمی ، بهینه‌سازی شدت هوادهی، بهینه سازی زمان تولید آنزیم و pH بهینه مشخص شد.
یافته ها:  در هر لیتر کشت حدود ۸ گرم سلول بازیابی شد. pH بهینه ۶/۵ تعیین گردید. ارزیابی پایداری حرارتی آنزیم در زمان‌های مختلف نشان داد که، آنزیم برای بیش از ۱ ساعت در دمای ۲۰ تا ۴۵ درجه سانتی‌گراد پایدار است، در حالی که در ۶۰ درجه سانتی‌گراد در ۱۰ دقیقه غیرفعال می‌شود. همچنین بهترین زمان انکوباسیون برای باکتری ۹ ساعت در دمای ۳۰ درجه سانتی گراد است. همچنین از لحاظ شدت هوا­دهی بالاترین میزان تولید آنزیم در ارلن­ های ۲۵۰ میلی­ لیتری با حجم ۵۰ میلی­ لیتر محیط کشت، در دورRPM ۲۰۰، به دست آمد. میزان تولید آنزیم در این شرایط به unit/ml ۲۳۹۴ رسید، هوا دهی بیشتر باعث اثر مهار کنندگی اکسیژن و کاهش فعالیت آنزیم تولید شده، گردید.
نتیجه‌گیری:  باکتری B. licheniformis میکروارگانیسم مناسبی برای استخراج آنریم پنی سیلیناز است.

متن کامل [PDF 498 kb]   (219 دریافت)    
نوع مطالعه: مقاله پژوهشی | موضوع مقاله: میکروب شناسی صنعتی
دریافت: 1400/6/14 | پذیرش: 1400/8/16 | انتشار الکترونیک: 1400/9/17

فهرست منابع
1. Stratton CW. The role of β-lactamases. Antimicrobics and Infectious Diseases. Newsletter 1996; 15(3): 17-28. [DOI:10.1016/1069-417X(96)83895-7]
2. Bush KA. Characterization of beta-lactamases. Antimicrob Agent Chemother. 1989;33(3):259-63. [DOI:10.1128/AAC.33.3.259] [PMID] [PMCID]
3. Citri N. Penicillinase and Other β-Lactamases. The enzyme. 1971; 4(3):23-46. [DOI:10.1016/S1874-6047(08)60362-5]
4. Joshi UM, Shah HP, Sunk olli G.M. Penicillinase as amarker in enzyme-linked immuosorbent assay for a steroid hormone.Steroid. Biochem. 1978;19(1):419-421. [DOI:10.1016/0022-4731(83)90197-8]
5. Livermore DM. Lactamases in Laboratory and Clinical Resistance. Clin Micribiol Rev. 1995; 8(4):557-584. [DOI:10.1128/CMR.8.4.557] [PMID]
6. Pollock MR. The measurement of the liberation of penicillinase from Bacillus subtilis. J Gen Microbiol. 1961;26(2):239-253. [DOI:10.1099/00221287-26-2-239] [PMID]
7. Pollock MR. The mechanism of liberation of penicillinase from Bacillus subtilis. J Gen Microbiol. 1961;26(2):267-276. [DOI:10.1099/00221287-26-2-267] [PMID]
8. Pollock MR. The differential effect of actinomycin D on the biosynthesis of enzymesin Bacillus subtilis and Bacillus cereus. Biochim. Biophys Acta. 1963; 76(3):80-93. [DOI:10.1016/0926-6550(63)90009-4]
9. Priest FG. Extracellular enzyme synthesis in the genus Bacillus. Bacteriol Rev. 1977; 41(3): 711-753. [DOI:10.1128/br.41.3.711-753.1977] [PMID] [PMCID]
10. Pollock MR. Purification and properties of penicillinases from two strains of Bacillus licheniformis: a chemical, physicochemical, and physiological comparison. Biochem. 1965; 94(3):666- 675. [DOI:10.1042/bj0940666] [PMID] [PMCID]
11. Smit PW, Tal PC, Davis B D. Bacillus licheniformis penicilhinase: cleavage and attachment of lipid during cotranslational secretion. Proc. Natl Acad Sci. 1981; 78(6):3501-3505. [DOI:10.1073/pnas.78.6.3501] [PMID] [PMCID]
12. Simons K, Sarvas M, Garoff H, Helenius A. Membran-band and secreted Forms of Penicillinase from Bacillus Licheniformis". J Mol Biol. 1978; 12(6); 673-690. [DOI:10.1016/0022-2836(78)90015-3]
13. Yamamoto S, Lampen JO. Membrane Penicillinase of Bacillus Licheniformis a Phospholipoprotein. J. Biol. Chem . 1974; 250(8):3212-3213. [DOI:10.1016/S0021-9258(19)41613-X]
14. Yamamoto S, Lampen O. The Hydrophobic Membrane Penicillinase of Bacillus Licheniformis 749/ C.J. Bacteriol Chem. 1976; 251(13): 4102- 4110. [DOI:10.1016/S0021-9258(17)33361-6]
15. Wiseman A. Handbook of enzyme. Biotechnology. 1985; 2 Ed. [DOI:10.1016/S0003-2670(00)86504-6]
16. Moews PC, et al. " Beta-Lactamases of Bacillus Licheniformis 749/C at 2A Resolution". Protein. Structure Functional and Genetics. 1990; 7(2): 156-171. [DOI:10.2210/pdb2blm/pdb] [PMID]
17. Lamotte-Brosseur J. Pka calculations for Class A beta-Lactamases: Influence of substrate binding Pka Sci. 1999; 8(2):404-409. [DOI:10.1110/ps.8.2.404] [PMID] [PMCID]
18. Thatcher DR. Lactamases (Bacillus Licheniformis). Methids Enzymol. 1975; 43:653-664. [DOI:10.1016/0076-6879(75)43130-5]
19. Davies JW, Collins JF. The induction of Bacillus Licheniformis Penicillinase by Vanadat, Moybdate and Tungstate anions. Biochim Biophys Acta. 1970; 217(2):552-554. [DOI:10.1016/0005-2787(70)90557-5]
20. Elv H, Angel S. Protein purification Methods.John Wiley (U. S. A) New York. 1989; 1th ed:47-97.
21. Abraham EP. Penicillinase. Methods. Enzymology J. 1952; 2: 120-124. [DOI:10.1016/S0076-6879(55)02177-0]
22. Castillo MC, Islas Ml, Nader OM.Purification and Characterization of B -Lactamases from Nisseria gonorrhoeae from Clinical Samples. Microbiologia. 2001; 43(2):70-75.
23. Lawung R. purification and characterization of B -Lactamases from Haemophilus ducreyi in E. coli. Protein Expr Purif. 2001; 23(1):151-158. [DOI:10.1006/prep.2001.1485] [PMID]
24. Ben-Mahrez. Purification and Biochemical properties of beta- Lactamases from E. coli. J Toxicol Toxin Rev. 1999; 18(3):221-228. [DOI:10.3109/15569549909162643]
25. Matangne A. The diversity of the Catalytic properties of class A -Lactamases. Biochem J. 1990; 265(1): 131-146. [DOI:10.1042/bj2650131] [PMID] [PMCID]

ارسال نظر درباره این مقاله : نام کاربری یا پست الکترونیک شما:
CAPTCHA

ارسال پیام به نویسنده مسئول


بازنشر اطلاعات
Creative Commons License این مقاله تحت شرایط Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License قابل بازنشر است.

کلیه حقوق این وب سایت متعلق به مجله میکروب شناسی پزشکی ایران می باشد.

طراحی و برنامه نویسی : یکتاوب افزار شرق   ناشر: موسسه فرنام

© 2022 CC BY-NC 4.0 | Iranian Journal of Medical Microbiology

Designed & Developed by : Yektaweb Publishr: Farname Inc.