کامبیز نجفی، ناهید حقنظری، کامبیز داوری، فاطمه کشاورزی،
سال ۱۵، شماره ۶ - ( آذر - دی ۱۴۰۰ )
چکیده
زمینه و اهداف: مطالعه حاضر با هدف بررسی شرایط بهینه برای استخراج و خالص سازی آنزیم پنی سیلیناز انجام شد. منبع آنزیم، با
کتری ۶۳۴۶Bacillus licheniformis بدست آمده سازمان پژوهش های علمی- صنعتی ایران بود.
مواد و روش کار: باکتری B. licheniformisدر محیطی حاوی نمک های معدنی، ترکیبات نیتروژن دار و منابع کربنی کشت داده شد. بعد از برداشت و آماده سازی سوسپانسیون باکتری، تخریب دیواره سلولی باکتری به روش تلفیقی از لیزوزیم و اولتراسونیکاسیون ضعیف جهت تهیه عصاره خام سلولی، صورت گرفت. سپس با روش کروماتوگرافی و الکتروفورز مقدار آنزیم تعیین شد. علاوه بر این، بهترین دمای رشد و بهترین زمان انکوباسیون بر اساس میزان جذب نمونهها در طول موج ۲۴۰ نانومتر، میزان فعالیت آنزیمی ، بهینهسازی شدت هوادهی، بهینه سازی زمان تولید آنزیم و pH بهینه مشخص شد.
یافته ها: در هر لیتر کشت حدود ۸ گرم سلول بازیابی شد. pH بهینه ۶/۵ تعیین گردید. ارزیابی پایداری حرارتی آنزیم در زمانهای مختلف نشان داد که، آنزیم برای بیش از ۱ ساعت در دمای ۲۰ تا ۴۵ درجه سانتیگراد پایدار است، در حالی که در ۶۰ درجه سانتیگراد در ۱۰ دقیقه غیرفعال میشود. همچنین بهترین زمان انکوباسیون برای باکتری ۹ ساعت در دمای ۳۰ درجه سانتی گراد است. همچنین از لحاظ شدت هوادهی بالاترین میزان تولید آنزیم در ارلن های ۲۵۰ میلی لیتری با حجم ۵۰ میلی لیتر محیط کشت، در دورRPM ۲۰۰، به دست آمد. میزان تولید آنزیم در این شرایط به unit/ml ۲۳۹۴ رسید، هوا دهی بیشتر باعث اثر مهار کنندگی اکسیژن و کاهش فعالیت آنزیم تولید شده، گردید.
نتیجهگیری: باکتری B. licheniformis میکروارگانیسم مناسبی برای استخراج آنریم پنی سیلیناز است.