سال 10، شماره 2 - ( خرداد - تیر 1395 )                   جلد 10 شماره 2 صفحات 32-23 | برگشت به فهرست نسخه ها

XML English Abstract Print


Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:

Nassaji Z, Saeedinia A, Zeinoddini M, Deldar A A. Designing and Construction of the Suicide Vector pDS132-ΔkanR to Delete Kanamycin Resistance Sequence in Mutant Strain of Brucella melitensis Rev1 Mutant Strain in order to Generate a Candidate Vaccine Strain. Iran J Med Microbiol 2016; 10 (2) :23-32
URL: http://ijmm.ir/article-1-411-fa.html
نساجی زهرا، سعیدی نیا علیرضا، زین الدینی مهدی، دلدار علی اصغر. طراحی و ساخت وکتور خودکشی pDS132-ΔkanR به منظور حذف ژن مقاومت به آنتی-بیوتیک کانامایسین در بروسلا ملی‌تنسیس سویه Rev1 جهش‌یافته برای تولید سویه کاندید واکسن. مجله میکروب شناسی پزشکی ایران. 1395; 10 (2) :23-32

URL: http://ijmm.ir/article-1-411-fa.html


1- گروه مهندسی ژنتیک، پژوهشکده علوم و فناوری زیستی، دانشگاه مالک اشتر، تهران، ایران
2- گروه مهندسی ژنتیک، پژوهشکده علوم و فناوری زیستی، دانشگاه مالک اشتر، تهران، ایران ، a.saeedinia@modares.ac.ir
چکیده:   (12882 مشاهده)

زمینه و اهداف: بروسلوز از مهم‌ترین بیماری‌های مشترک انسان و دام محسوب می‌گردد. بهترین راه مقابله با بروسلوز انجام واکسیناسیون مناسب می­باشد. واکسن­های موجود از قبیل واکسن Rev1 با معایبی چون سقط جنین در حیوانات باردار همراه است لذا تهیه واکسن مناسب برای درمان بروسلوز ضروری می­ باشد. هدف از انجام این مطالعه، طراحی و ساخت وکتور خودکشی pDS132-ΔkanR به منظور حذف ژن مقاومت به آنتی­بیوتیک کانامایسین در بروسلا ملی­تنسیس سویه Rev1 جهش­یافته برای تولید سویه کاندید واکسن بود.

مواد و روش کار: در این مطالعه برای حذف ترادف هدف، تصمیم به استفاده از پلاسمید pDS132 به عنوان وکتور خودکشی گرفته شد. بمنظور ساخت کاست حذف، پس از طراحی و سنتز جداگانه قطعات دارای همولوژی با ترادف­های هدف، این قطعات جهت ساخت قطعه واحد، با استفاده از آنزیم­های محدودگر مناسب در وکتور pBluescriptSK(-) کلون شد. سپس به منظور ساخت وکتور خودکشی، قطعه کاست حذف با استفاده از آنزیم­ های محدودگر مناسب از وکتور فوق جدا و در وکتور pDS132 ساب کلون شد.

یافته‌ها: وکتور خودکشی pDS132-ΔkanR با در برداشتن 590 جفت باز از توالی بالادست و 421 جفت باز از توالی پایین­دست ترادف هدف می­تواند به عنوان یک ناقل خودکشی اختصاصی در ایجاد تداخل در ژن kanR در ژنوم باکتریبروسلا ملی­تنسیس سویه Rev1 جهش ­یافته موجب حذف مقاومتآنتی­ بیوتیکی در آن بشود.

نتیجه‌گیری: استفاده از سیستم خودکشی مورد نظر با استفاده از وکتور pDS132-ΔkanR، ایجاد جهش هدفمند را تسهیل و در مقایسه با سایر روش­ های خودکشی وابسته به مارکر مثبت و نیز روش‌های ابتدایی مانند پاساژ متوالی، روش موثرتری می­باشد.

متن کامل [PDF 1275 kb]   (4513 دریافت)    
نوع مطالعه: مقاله پژوهشی | موضوع مقاله: بیوتکنولوژی میکروبی
دریافت: 1393/11/27 | پذیرش: 1394/10/5 | انتشار الکترونیک: 1395/5/3

فهرست منابع
1. López-Goñi I, O'Callaghan D. Brucella: Molecular Microbiology and Genomics: Horizon Scientific Press; 2012. [Article]
2. Seleem MN, Boyle SM, Sriranganathan N. Brucella: a pathogen without classic virulence genes. Vet microbiol. 2008;129(1):1-14. [PubMed]
3. Diaz R, Jones LM, Leong D, Wilson J. Surface antigens of smooth brucellae. J Bacteriol. 1968;96(4):893-901. [PubMed]
4. N Xavier M, A Paixao T, B den Hartigh A, M Tsolis R, L Santos R. Pathogenesis of Brucella spp. Open Vet J. 2010;4(1)
5. Schurig GG, Sriranganathan N, Corbel MJ. Brucellosis vaccines: past, present and future. Vet Microbiol. 2002;90(1):479-96. [PubMed]
6. Ragan VE. The animal and plant health inspection service (APHIS) brucellosis eradication program in the United States. Vet Microbiol. 2002;90(1):11-8. [PubMed]
7. Corbel MJ. Brucellosis: an overviewEmerg. Infect. Dis. 1997;3(2):213. [PubMed]
8. Young EJ. An overview of human brucellosis. Clin Infect Dis. 1995;21(2):283-9 [PubMed]
9. Saeedinia AR, Zeinoddini M, Soleimani M, Sadeghizadeh M. A new method for simultaneous gene deletion and down-regulation in Brucella melitensis Rev. 1. Microbiol Res. 2015;170:114-23 [PubMed]
10. Reyrat J-M, Pelicic V, Gicquel B, Rappuoli R. Counterselectable markers: untapped tools for bacterial genetics and pathogenesis. Infect Immun. 1998;66(9):4011-7. [PubMed]
11. Court DL, Sawitzke JA, Thomason LC. Genetic Engineering Using Homologous Recombination 1. Ann Rev gene. 2002;36(1):361-88. [PubMed]
12. Philippe N, Alcaraz J-P, Coursange E, Geiselmann J, Schneider D. Improvement of pCVD442, a suicide plasmid for gene allele exchange in bacteria. Plasmid. 2004;51(3):246-55. [PubMed]
13. Bej AK, Perlin MH, Atlas RM. Model suicide vector for containment of genetically engineered microorganisms. Appl Environ Microbiol . 1988;54(10):2472-7.
14. Ortiz-Martín I, Macho AP, Lambersten L, Ramos C, Beuzón CR. Suicide vectors for antibiotic marker exchange and rapid generation of multiple knockout mutants by allelic exchange in Gram-negative bacteria. J Microbiol Methods. 2006;67(3):395-407. [PubMed]
15. Zhang Y, Buchholz F, Muyrers JP, Stewart AF. A new logic for DNA engineering using recombination in Escherichia coli. Nature genetics. 1998;20(2):123-8. [PubMed]
16. Selbitschka W, Niemann S, Pühler A. Construction of gene replacement vectors for Gram− bacteria using a genetically modified sacRB gene as a positive selection marker. Appl Environ Microbiol. 1993;38(5):615-8. [Article]
17. Miller VL, Mekalanos JJ. A novel suicide vector and its use in construction of insertion mutations: osmoregulation of outer membrane proteins and virulence determinants in Vibrio cholerae requires toxR. ‎J Bacteriol. 1988;170 (6): 2575-83. [PubMed]
18. Cornet F, Mortier I, Patte J, Louarn J-M. Plasmid pSC101 harbors a recombination site, psi, which is able to resolve plasmid multimers and to substitute for the analogous chromosomal Escherichia coli site dif. J Bacteriol. 1994;176(11):3188. [PubMed]
19. Link AJ, Phillips D, Church GM. Methods for generating precise deletions and insertions in the genome of wild-type Escherichia coli: application to open reading frame characterization. J Bacteriol. 1997;179(20):6228-37. [PubMed]
20. Donnenberg MS, Kaper JB. Construction of an eae deletion mutant of enteropathogenic Escherichia coli by using a positive-selection suicide vector. Infect Immun. 1991;59(12):4310-7. [PubMed]
21. Halling SM, Detilleux P, Tatum F, Judge B, Mayfield J. Deletion of the BCSP31 gene of Brucella abortus by replacement. Infect Immun. 1991;59(11):3863-8. [PubMed]
22. Nakashima N, Miyazaki K. Bacterial cellular engineering by genome editing and gene silencing. Int J Mol Sci. 2014;15(2):2773-93. [PubMed]
23. Hosseini M, Saadati M, Nayeri Fasaei B, Ahmadydanesh H, Mirzaei M, Baghery K, et al. Construction of pDS132::∆ icsA for targeted deletion of a region of icsA gene in order to generate a live attenuated Shigella vaccine. Arak Medical University Journal. 2012;15(2):35-47. [Article]

ارسال نظر درباره این مقاله : نام کاربری یا پست الکترونیک شما:
CAPTCHA

ارسال پیام به نویسنده مسئول


بازنشر اطلاعات
Creative Commons License این مقاله تحت شرایط Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License قابل بازنشر است.

کلیه حقوق این وب سایت متعلق به مجله میکروب شناسی پزشکی ایران می باشد.

طراحی و برنامه نویسی : یکتاوب افزار شرق   ناشر: موسسه فرنام

© 2024 CC BY-NC 4.0 | Iranian Journal of Medical Microbiology

Designed & Developed by : Yektaweb Publishr: Farname Inc.