fa تشخیص بهینه و دقیق بروسلا در سرم با استفاده از روش Double PCR میکروب شناسی مولکولی Molecular Microbiology مقاله پژوهشی Original Research Article <div align="right" style="direction: rtl"> <b>زمینه و اهداف:</b><i> بروسلاها</i> باکتری های گرم منفی درون سلولی هستند کـه قادر بـه ایجاد عفونت در بسیاری از گونه های حیوانی و انسان می باشند. علائم کلینیکی بروسلوز در انسان بسیار متنوع بوده و اغلب غیر اختصاصی است، لذا تشخیص این بیماری نیازمند تایید سریع و دقیق می باشد. از آنجا که استفاده از سرم بجای خون از مزایای متعددی در روش های تکثیر اسیدهای نوکلئیک برخوردار است، مطالعه حاضر به طراحی یک واکنش PCR بهینه سازی شده به منظور تشخیص آزمایشگاهی سریع و اختصاصی بروسلوز در نمونه های سرم انسانی می پردازد. <br><b>روش بررسی: </b>نمونهDNA از 100 میکرولیتر نمونه سرم30 فرد مبتلا به بیماری حاد بروسلوز، با استفاده از روش سریع کیت تهیه گردید. واکنش زنجیره ای پلیمراز با کمک پرایمر های اختصاصی انجام شد. سپس واکنش دوم PCR جهت تکثیر مجدد محصولات واکنش نخست طراحی شد. <br><b>یافته ها:</b> یک قطعه 223 جفت بازی ثابت، از ژن مسوول سنتز یک پروتئین ایمونوژنیک غشایی(BCSP31) با وزن ملکولی 31 کیلو دالتون از باکتری <i>بروسلا آبورتوس</i> که ویژه جنس بروسلا می باشد و در تمام واریته های بیولوژیک آن موجود ا ست در کلیه نمونه های سرمی با موفقیت تکثیر شد. <br><b>نتیجه گیری:</b> تکثیر مجدد محصولات واکنش اول PCR بمنظور تایید و تکثیر بیشتر قطعات بدست آمده، منجر به پیدایش الگوی باندینگ قوی تر و با حساسیت و ویژگی بالاتری می گردد، که از آن می توان بعنوان یک روش مفید در تشخیص آزمایشگاهی بروسلوز استفاده نمود. </div> <b>Background and Objectives:</b> <i>Brucellae</i> are gram-negative intracellular pathogens which cause zoonotic disease in humans. Clinical manifestations of brucellosis in human are variable and often are non-specific, and the diagnosis requires fast and accurate confirmation. Since the use of serum instead of whole-blood samples offers several advantages for nucleic acid amplification methods, in this study we developed an improved PCR assay for the rapid and specific laboratory diagnosis of human brucellosis directly from serum specimens.<br><b>Material and Methods:</b> DNA was extracted from 100 µL of serum from 30 patients with acute serologic brucellosis. The PCR reaction was carried out with Specific primers. Second PCR reaction for reamplification of the first reaction products was designed. <br> <b>Results:</b> a 223 bp conserved region on the sequence encoding the 31-KDa immunogenic outer membrane protein which is specific to the genus <i>Brucella</i>(BCSP31) and present in all its biovars was amplified in all serum samples. <br> <b>Conclusion:</b> For confirmation and efficient amplification of the specific target, reamplification of the first PCR products had a sharper banding patterns with high sensitivity and specificity that might be considered as a new useful method for diagnosis of human brucellosis in serum specimens. بروسلا، بروسلوزیس، PCR, BCSP31 Brucella, Brucellosis, PCR, BCSP31 47 51 http://ijmm.ir/browse.php?a_code=A-10-1-70&slc_lang=fa&sid=1 Hosein Hedayati محمدحسین هدایتی mhheda@yahoo.com 1003194753284600418 1003194753284600418 Yes Department of Quality Control, Research and Production Complex of Karaj, Pasteur Institute of Iran بخش کنترل کیفی، مجتمع تولیدی تحقیقاتی کرج، انستیتو پاستور ایران Aida Adli Moghaddam آیدا عدلی مقدم 1003194753284600419 1003194753284600419 No Department of Bacterial Vaccine and Antigen Production, Research and Production Complex of Karaj, Pasteur Institute of Iran ﺑﺨـﺶ واﮐـﺴﻦ. ﻫـﺎی ﺑﺎﮐﺘﺮﯾـﺎﯾﯽ و. ﺗﻬﯿﻪ آﻧﺘﯽ. ژن اﻧﺴﺘﯿﺘﻮ ﭘﺎﺳﺘﻮر اﯾﺮان Dariush Norouzian داریوش نوروزیان 1003194753284600420 1003194753284600420 No Department of Bacterial Vaccine and Antigen Production, Research and Production Complex of Karaj, Pasteur Institute of Iran ﺑﺨـﺶ واﮐـﺴﻦ. ﻫـﺎی ﺑﺎﮐﺘﺮﯾـﺎﯾﯽ و. ﺗﻬﯿﻪ آﻧﺘﯽ. ژن اﻧﺴﺘﯿﺘﻮ ﭘﺎﺳﺘﻮر اﯾﺮان Bahman Tabaraie بهمن تبرایی 1003194753284600421 1003194753284600421 No Department of Bacterial Vaccine and Antigen Production, Research and Production Complex of Karaj, Pasteur Institute of Iran ﺑﺨـﺶ واﮐـﺴﻦ. ﻫـﺎی ﺑﺎﮐﺘﺮﯾـﺎﯾﯽ و. ﺗﻬﯿﻪ آﻧﺘﯽ. ژن اﻧﺴﺘﯿﺘﻮ ﭘﺎﺳﺘﻮر اﯾﺮان Hojat Ahmadi حجت احمدی 1003194753284600422 1003194753284600422 No Department of Bacterial Vaccine and Antigen Production, Research and Production Complex of Karaj, Pasteur Institute of Iran ﺑﺨـﺶ واﮐـﺴﻦ. ﻫـﺎی ﺑﺎﮐﺘﺮﯾـﺎﯾﯽ و. ﺗﻬﯿﻪ آﻧﺘﯽ. ژن اﻧﺴﺘﯿﺘﻮ ﭘﺎﺳﺘﻮر اﯾﺮان Seyed Davar Siadat سیدداور سیادت 1003194753284600423 1003194753284600423 No Department of Bacterial Vaccine and Antigen Production, Research and Production Complex of Karaj, Pasteur Institute of Iran ﺑﺨـﺶ واﮐـﺴﻦ. ﻫـﺎی ﺑﺎﮐﺘﺮﯾـﺎﯾﯽ و. ﺗﻬﯿﻪ آﻧﺘﯽ. ژن اﻧﺴﺘﯿﺘﻮ ﭘﺎﺳﺘﻮر اﯾﺮان