fa جداسازی و شناسایی آلودگی مایکوپلاسما پنومونیه از کشت های سلولی با استفاده از روش کشت و PCR میکروب شناسی مولکولی Molecular Microbiology مقاله پژوهشی Original Research Article <div style="text-align: justify;"><strong>زمینه و اهدف:</strong> <em>مایکوپلاسما پنومونیه</em> یکی از گونه های اصلی مایکوپلاسماهای آلوده کننده کشت های سلولی &nbsp;محسوب می شوند. با توجه به اثرات نامطلوبی که آلودگی های مایکوپلاسمایی می توانند بر روی کشت های سلولی داشته باشند، شناسایی سریع این آلودگی ها حائز اهمیت می باشد.<br> <strong>مواد</strong> <strong>و</strong> <strong>روش</strong> <strong>کار</strong><strong><span dir="LTR">:</span></strong> در این مطالعه جداسازی و شناسایی <em>مایکوپلاسما پنومونیه</em> از ۸۲ نمونه ی کشت سلولی ارسال شده به آزمایشگاه رفرانس مایکوپلاسما با استفاده از روش کشت و<span dir="LTR">PCR </span>&nbsp;انجام شد. بدین منظور از پرایمرهای <span dir="LTR">M۱F</span> و <span dir="LTR">M۳R</span> که قابلیت شناسائی جنس مایکوپلاسماها را از ژن <span dir="LTR">۱۶S rRNA</span> دارد، استفاده گردید. سپس برای راه اندازی واکنش <span dir="LTR">PCR</span> جهت ردیابی <em>مایکوپلاسما پنومونیه</em>، از ژن <span dir="LTR">P۱ Adhsein </span>&nbsp;و پرایمرهای اختصاصی<span dir="LTR"> MPF </span>&nbsp;و <span dir="LTR">MPR</span> استفاده شد.<br> <strong>یافته ها:</strong> از مجموع تعداد ۸۲&nbsp; نمونه جمع آوری شده، در کشت تعداد (۸/۳۷٪)۳۱ نمونه با تشکیل پرگنه اختصاصی، مایکوپلاسما مثبت تشخیص داده شده و (۲/۶۲٪)۵۱ نمونه نیز منفی بودند.<br> همچنین از مجموع تعداد مذکور، &nbsp;(۵۳/۵۸%) ۴۸ نمونه از نظر آزمون <span dir="LTR">PCR</span> جنس مایکوپلاسما مثبت بوده و تعداد (۴۷/۴۱%)۳۴ نمونه نیز منفی گزارش شد. نهایتاً از ۸۲ نمونه ی جمع آوری شده در این مطالعه، هیچ نمونه ای از نظر آزمون <span dir="LTR">PCR</span> گونه<em> مایکوپلاسما پنومونیه </em>مثبت گزارش نگردید.<br> <strong>نتیجه گیری:</strong> با توجه به نتایج بدست آمده در این مطالعه، <em>مایکوپلاسما پنومونیه</em> عامل آلوده کننده کشت های سلولی در ایران محسوب نمی شود. همچنین آزمون <span dir="LTR">PCR</span> با توجه به سرعت و دقت بالای آن، می تواند آزمونی مناسب و مقرون به صرفه تر جهت ردیابی مایکوپلاسماهای آلوده کننده کشت سلولی باشد.</div> <div style="text-align: justify;"><strong>Background</strong>: <em>Mycoplasma pneumoniae</em> is one of the major species of mycoplasmas which could contaminate cell cultures. Identification of<br> <em>M. pneuminae</em> is significant because Mycoplasmas could contaminate and have unsuitable effect on the cell cultures. Rapid detection of these contaminations is so important and it could be significant role in preventing and controlling of contamination in cell cultures. The aim of this study is isolation and detection of<br> <em>M .pneumoniae</em> by culture and PCR. 82 cell cultures collected and cultured in PPLO broth media supplemented for <em>M. pnemoniae</em> isolation.<br> <strong>Methods</strong>: The bacteria DNAs were extracted by phenol/chloroform method and the PCR assay amplifying the conserved region of 16S rRNA gene was applied for the detection of Mycoplasma genus in 163bp fragment and <em>M. pnemoniae</em> in 543bp fragment by using of MPF and MPR primers which obtained from P1 adhesin gen.<br> <strong>Results</strong>: Of the 82 samples 48(58.5%) yielded one of the potentially pathogenic Mycoplasmas evaluated for using Mycoplasma genus PCR as diagnostic method, and from 48 samples which were positive in genus of Mycoplasma, <em>M. pneumoniae</em> did not detect&nbsp; from those sample by using those primers and there is not any <em>M. pnemoniae </em>detected in this study<span dir="RTL">.</span><br> <strong>Conclusion</strong>: Also results of this study indicate that PCR could be an alternative method instead of the culture because according to the results of this study, PCR has high accuracy and speed for detecting <em>M. pneumoniae</em>.<span dir="RTL"></span></div> مایکوپلاسما پنومونیه, کشت سلول, PCR, کشت اختصاصی مایکوپلاسما Mycoplasma pneumonia, cell culture, PCR, Mycoplasma specific culture. 153 163 http://ijmm.ir/browse.php?a_code=A-10-1169-1&slc_lang=fa&sid=1 Salimeh Ahangaran سلیمه آهنگران salroze@yahoo.com 100319475328460013983 100319475328460013983 No Mycoplasma Reference laboratory, Razi Vaccine and Serum Research Institute, Karaj, Iran آزمایشگاه رفرانس مایکوپلاسما، موسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی، کرج، ایران Seyed Ali Pourbakhsh سید علی پوربخش poursaba@gmail.com 100319475328460013984 100319475328460013984 Yes Mycoplasma Reference laboratory, Razi Vaccine and Serum Research Institute, Karaj, Iran آزمایشگاه رفرانس مایکوپلاسما، موسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی، کرج، ایران Alireza Abtin علیرضا آبتین dvm_alirezaabtin@yahoo.com 100319475328460013985 100319475328460013985 No Department of Microbiology, Islamic Azad University, Science and Research Branch, Tehran, Iran گروه میکروبیولوژی دانشگاه آزاد اسلامی واحد علوم تحقیقات، تهران، ایران Esmaeil Asli اسماعیل اصلی easli62@yahoo.com 100319475328460013986 100319475328460013986 No Mycoplasma Reference laboratory, Razi Vaccine and Serum Research Institute, Karaj, Iran آزمایشگاه رفرانس مایکوپلاسما، موسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی، کرج، ایران