Iranian Journal of Medical Microbiology

fa شناسایی حالت زنده اما غیرقابل‌کشت باکتری اشریشیا کلی (Escherichia coli O157:H7) با استفاده از وارونویسی واکنش زنجیره‌ای پلیمراز (RT-PCR) Detection of Viable But Non-Culturable State of Escherichia coli O157:H7 Using Reverse Transcription PCR میکروب شناسی مواد غذایی Food Microbiology مقاله پژوهشی Original Research Article <div style="text-align: justify;">زمینه و هدف: باکتری‌های متعددی همانند اشریشیا کلی تحت شرایط نامساعد می‌توانند وارد حالت زنده اما غیرقابل کشت (VBNC) شوند که با روش‌های تشخیص بر پایه کشت باکتری قادر به شناسایی نیستند. در تحقیق حاضر، وارونویسی واکنش زنجیره‌ای پلیمراز (RT-PCR) برای تشخیص باکتری Escherichia coli O۱۵۷:H۷ در حالت VBNC بررسی شد. مواد و روش‌کار: باکتری E. coli O۱۵۷:H۷ به تیمارهای آب‌مقطر و آب‌نمک ۳۰درصد تلقیح و در دمای اتاق نگهداری شد. کشت‌پذیری باکتری‌ها روی محیط کشت مک کانکی آگار تعیین شد. RT-PCR ژن ۱۶S rRNA شامل استخراج و تخلیص RNA، تیمار DNase I برای حذف آلودگی DNA و سپس سنتز cDNA و الکتروفورز محصول PCR نمونه‌های cDNA برای تشخیص زنده‌مانی باکتری E. coli O۱۵۷:H۷ تحت تیمارهای مورد مطالعه به کار رفت و با نتایج RT-PCR ژن ۱۶S rRNA در باکتری‌های کشته‌شده به‌وسیلۀ حرارت مقایسه شد. یافته‌ها: کشت‌پذیری باکتری‌ها در تیمار آب‌مقطر طی مدت مطالعه حفظ شد؛ اما تیمار آب‌نمک ۳۰ درصد باعث کشت‌ناپذیری باکتری در روز چهارم مطالعه شد. نتایج RT-PCR ژن ۱۶S rRNA بیانگر حفظ بیان این ژن در باکتری‌های کشت‌پذیر و غیرقابل‌کشت طی مدت مطالعه بود، در حالی که در باکتری‌های کشته‌شده به‌وسیلۀ حرارت بیان این ژن منفی بود که نشان‌دهندۀ کارایی RT-PCR ژن ۱۶S rRNA در تشخیص باکتری‌های زنده از غیرزنده بود. نتیجه‌گیری: باکتری E. coli O۱۵۷:H۷ تحت استرس شوری ۳۰ درصد وارد حالت VBNC شد که می‌تواند باعث مخاطراتی جدی برای سلامت انسان شود. وارونویسی واکنش زنجیره‌ای پلیمراز (RT-PCR) می‌تواند برای تشخیص باکتری‌های VBNC به کار رود.  </div> <div style="text-align: justify;">Background and Aims: Many bacteria including Escherichia coli may enter into a viable but non-culturable (VBNC) state under unfavorable stresses, which are unable to be detected by culture-based methods. In this study, the use of Reverse Transcription PCR (RT-PCR) for detection of VBNC state of E. coli O157:H7 was investigated. Materials and Methods:  Escherichia. coli O157:H7 was inoculated in distilled water and 30 percent salt water at room temperature. The cultivability of bacteria was determined using routine culture and colony counting on MacConkey agar. The RT-PCR of 16S rRNA gene involved direct extraction and purification of RNA, DNase I treatment for removing DNA contamination, cDNA synthesis and electrophoresis of PCR products of cDNA was used to detect viable E. coli O157:H7 under studied treatments and was compared with the results of RT-PCR of 16S rRNA gene of heat- killed bacteria. Results: The cultivability of bacteria was maintained during the study period in distilled water; however, the use of 30percent NaCl caused the bacteria to be non-cultivable on day 4. The RT-PCR of 16S rRNA showed the positive expression of this gene in cultivable and non-cultivable bacteria during the study period, whereas heat-killed bacteria were negative for this gene, which indicated the efficacy of RT-PCR of 16S rRNA in differentiation of alive from dead bacteria. Conclusions: Escherichia coli O157:H7 entered into the VBNC under 30 percent NaCl which can be associated with serious human health problems. RT-PCR can be used to detect bacteria in the VBNC state.    </div> اشریشیا کلی, زنده‌مانی باکتری, وارونویسی واکنش زنجیره‌ای پلیمراز Escherichia coli O157:H7, Bacteria viability, Reverse Transcriptase PCR 390 398 http://ijmm.ir/browse.php?a_code=A-10-1152-1&slc_lang=fa&sid=1 Mohammad Khezri محمد خضری mkhezri64@gmail.com 100319475328460012910 100319475328460012910 No Department of Seafood Science, Faculty of Marine Sciences, Tarbiat Modares University, Noor, Iran گروه فرآوری محصولات شیلاتی، دانشکدۀ علوم دریایی، دانشگاه تربیت مدرس، نور، ایران Masoud Rezaei مسعود رضائی rezai_ma@modares.ac.ir 100319475328460012911 100319475328460012911 Yes Department of Seafood Science, Faculty of Marine Sciences, Tarbiat Modares University, Noor, Iran گروه فرآوری محصولات شیلاتی، دانشکدۀ علوم دریایی، دانشگاه تربیت مدرس، نور، ایران Ashraf Mohabbati Mobarez اشرف محبتی مبارز mmmobarez@modares.ac.ir 100319475328460012912 100319475328460012912 No Department of Medical Bacteriology, Faculty of Medical, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran گروه باکتری‌شناسی پزشکی، دانشکدۀ پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران mehdi zolfaghari مهدی ذوالفقاری zogfaghari.mz@gmail.com 100319475328460012913 100319475328460012913 No Department of Seafood Processing, Faculty of Fisheries and Environmental Sciences, Agricultur and Natural Resource University of Gorgan, Gorgan, Iran گروه فرآوری محصولات شیلاتی، دانشکدۀ شیلات و محیط زیست، دانشگاه علوم کشاورزی و منابع طبیعی، گرگان، ایران