Iranian Journal of Medical Microbiology

fa بررسی بیان پایدار فاکتور بیماری‌زای شیگلا سونئی، IpaB، در میزبان پروکاریوتی در شرایط بیان همزمان با عامل چپرونی IpgC The Study of the Stable Expression of IpaB, the Virulence Factor in Shigella Sonnei, in Terms of Simultaneous Expression of Chaperone IpgC میکروب شناسی مولکولی Molecular Microbiology مقاله پژوهشی Original Research Article <div>زمینه و هدف: شیگلا، یک باسیل گرم منفی متعلق به خانواده آنتروباکتریاسه است و موجب شیگلوزیس می‌شود که نوعی عفونت حاد روده‌ای است. برآورد می‌شود فقط در آسیا، سالانه ۱۲۵ میلیون عفونت و ۱۴۰۰۰ مرگ‌ومیر ناشی از شیگلوز وجود دارد. شیگلا سونئی عامل اصلی اپیدمی در کشورهای درحال‌توسعه است. IpaB فاکتور بیماری‌زای ضروری و چند‌منظوره‌ای در روند عفونت به شمار می‌رود. دستیابی به بیان پروتئین IpaB و انتقال پلاسمید حامل ژن IpaB به باکتری ضعیف‌شده، ساخت واکسن ژنی کارامد را علیه شیگلوز میسر می‌سازد. مواد و روش‌ کار: ژن‌های کدکننده IpaB و IpgC از ژنوم سویه شیگلا سونئی به روش PCR جدا شده و با هضم آنزیمی به داخل ناقل pBAD/myc-His B وارد ‌شد. سپس به داخل میزبان‌های کلون‌سازی و بیانی وارد شده و پس از تأیید بیان، آنتی‌ژنیسیته آن به روش لکه‌گذاری وسترن بررسی شد. یافته‌ها: ساخت سازواره‌های بیانی حامل ژن IpaB و بیان پروتئین IpaB صورت گرفت. همچنین بیان ژن ترانکیت IpaB در کنار دنباله هیستیدینی در غیاب ژن IpgC در باکتری E.Coli مؤید نقش چپرونی ژن IpgC بر بیان و پایداری IpaB است که می‌تواند استراتژی مناسبی در راستای بیان IpaB تلقی شود. نتیجه‌گیری: با توجه به اینکه تاکنون بیان IpaB در سیستم‌های پروکاریوتی موفقیت‌آمیز نبوده است و در عین حال این پروتئین در رفتار تهاجمی باکتری نقشی محوری دارد؛ با بیان کنترل‌شده IpaB، امکان دستیابی به یک سویه تحت کنترل در مطالعات رفتارشناسی باکتری و نیز کاندید احتمالی برای تحریک سیستم ایمنی فراهم شد.  </div> <div>Background and Aims: The virulence plasmid of the Gram negative pathogen Shigella generates many virulence factors within the Ipa-mxi-spa region. Shigella spreads via fecal-oral and person-to-person transmission which causes human bloody diarrhea. In Asia alone, it is estimated that there are 125 million infections and 14,000 deaths due to shigellosis annually. IpaB is essential for Shigella infection and pathogenicity. Materials and Methods: Expression plasmid based on the araBAD promoter is designed for tight control of background expression and l-arabinose dependent graded expression of the target proteins. IpgC and IpaB genes were amplified using polymerase chain reaction (PCR) with designed primers.  In the next step, the products were then cloned into pBAD/myc-HisB expression vector. The presence of the insert was confirmed by restriction digestion. In order to confirm the chaperone role of IpgC on IpaB protein stability, the 300-bp is removed from the N-terminal portion of IpaB and His6-tagged CPD is fused to the C-terminus of target proteins in the pET28b. Results: The construction of IpaB gene expression plasmid and expression of IpaB protein was achieved. Also, expression of the gene truncation of IpaB along with the His6 tag sequence in the absence of the IpgC gene in Escherichia coli revealed that the role of the IpgC chaperone gene on IpaB expression can be considered as an appropriate strategy for expression of IpaB.  Conclusions: In the present study IpgC and IpaB genes were successfully cloned and expressed under the control of arabinose-dependent promoters to provide IpaB expressing plasmid. The role of the IpgC as a chaperone protein on IpaB expression and stability can be considered as an appropriate strategy for expressing IpaB. The induced vector can be used for future analysis of Shigella vaccine development.  </div> شیگلا سونئی, IpaB, IpgC, DNA نوترکیب, چپرون Shigella sonnei, IpaB, IpgC, Recombinant DNA, Chaperone 260 268 http://ijmm.ir/browse.php?a_code=A-10-1072-1&slc_lang=fa&sid=1 Fateme Nasrollahi Boroujeni فاطمه نصراللهی بروجنی narges.nasrollahi@gmail.com 100319475328460012529 100319475328460012529 No MSc in Molecular Biotechnology, Department of Genetic Engineering, Research Centre for Sciences and Biotechnology, Malek-Ashtar Industrial University, Tehran, Iran گروه بیوتکنولوژی مولکولی، ﭘﮋﻭﻫﺸﻜﺪﻩ ﻓﻨﺎﻭﺭﻱ ﺯﻳﺴﺘﻲ، ﺩﺍﻧﺸﮕﺎﻩ ﺻﻨﻌﺘﻲ ﻣﺎﻟﻚ ﺍﺷﺘﺮ، ﺗﻬﺮﺍﻥ، ایران Ali Asghar Deldar علی اصغر دلدار aad.phd.gene@gmail.com 100319475328460012530 100319475328460012530 Yes PhD in Molecular Genetics, Assistant Professor, Department of Genetic Engineering, Research Centre for Sciences and Biotechnology, Malek-Ashtar Industrial University, Tehran, Iran گروه مهندسی ژنتیک، پژوهشکده فناوری زیستی، دانشگاه صنعتی مالک اشتر، تهران، ایران