fa تعیین ارزش تشخیصی PCR-ELISA نسبت به روش‌های کلاسیک و PCR برای شناسایی سویه‌های استافیلوکوکوس اورئوس مقاوم به متی‌سیلین میکروب شناسی مولکولی Molecular Microbiology مقاله پژوهشی Original Research Article <div><span style="font-family:iransans;"><span style="font-size:12px;"><strong><span style="letter-spacing:-.1pt;">زمینه و هدف: </span></strong><span style="letter-spacing:-.1pt;">شیوع بالای ایزوله‌های<a name="OLE_LINK2"></a><a name="OLE_LINK1"> <em>استافیلوکوکوس اورئوس</em> </a>که به آنتی‌بیوتیک متی‌سیلین مقاوم هستند و همچنین ایجاد مقاومت چند دارویی در این باکتری، درمان عفونت‌های ناشی از این باکتری را با مشکل مواجه کرده است. به همین خاطر شناسایی سویه‌های</span> <span dir="LTR" style="letter-spacing:-.1pt;">MRSA</span> <span style="letter-spacing:-.1pt;">با روش‌های سریع و دقیق ضروری است. </span><span dir="LTR" style="letter-spacing:-.1pt;">PCR-ELISA</span><span style="letter-spacing:-.1pt;"> روش مولکولی دقیقی است که برای شناسایی باکتری‌های مختلفی استفاده شده است. هدف از این تحقیق شناسایی باکتری <em>استافیلوکوکوس اورئوس </em>مقاوم به متی‌سیلین با روش </span><span dir="LTR" style="letter-spacing:-.1pt;">PCR-ELISA</span> <span style="letter-spacing:-.1pt;">است.</span><br> <strong>مواد و روش کار: </strong>ابتدا پرایمرهای اختصاصی مربوط به ژن <em><span dir="LTR">mecA</span></em> طراحی شد. سپس از <span dir="LTR">dNTP</span> نشان‌دارشده به همراه دیگوکسی ژنین برای تکثیر ژن <em><span dir="LTR">mecA</span></em> استفاده شد. محصولات نشان‌دارشده به کف چاهک‌های واجد استراپتویدین متصل و با آنتی‌بادی کانژوگه ضدنشان <span dir="LTR">DIG</span> شناسایی شد. همچنین از پروب <span dir="LTR">DNA</span> اختصاصی نشان‌دارشده با بیوتین برای ژن <em><span dir="LTR">mecA</span></em> استفاده و در نهایت حساسیت و اختصاصیت روش تعیین شد. برای این منظور مقاومت به متی‌سیلین در ۷۰ جدایه بالینی با روش انتشار دیسک، آگار دایلوشن و <span dir="LTR">PCR-ELISA</span> ارزیابی شد. <strong><span style="font-size:9.0pt;"></span></strong><br> <strong>یافته‌ها: </strong>با استفاده از پرایمرهای اختصاصی، ژن <em><span dir="LTR">mecA</span></em> باکتری<em> استافیلوکوکوس اورئوس </em>تکثیر شد که نتیجه آن یک قطعه به طول ۳۱۰ جفت باز بود. نتایج حاصل از <span dir="LTR">PCR-ELISA</span> نشان داد این تکنیک هیچ واکنش متقاطعی با باکتری‌های <em>کلبسیلا پنومونیه</em>، <em>باسیلوس سوبتلیس</em> و <em>اشریشیاکلی </em>به عنوان کنترل ندارد و همچنین میزان حساسیت آن ۰/۵ نانوگرم ارزیابی شد. فراوانی جدایه‌های بالینی مقاوم به متی‌سیلین با روش انتشار دیسک، آگار دایلوشن و <span dir="LTR">PCR-ELISA</span> به ترتیب ۶۰، ۵۸/۵ و ۶۰ درصد بود.<br> <strong>نتیجه‌گیری:</strong> تکنیک <span dir="LTR">PCR-ELISA</span> به عنوان روشی حساس و دقیق به منظور شناسایی عوامل بیماری‌زا با استفاده از ژن اختصاصی آنها شناخته شده است. این روش می‌تواند به عنوان روش جایگزین مناسبی برای تکنیک‌های زمان‌بر، با حساسیت کمتر و هزینه بیشتر همچون <span dir="LTR">Real-time PCR</span> و تست‌های بیوشیمیایی افتراقی که در آزمایشگاه‌ها استفاده می‌شوند، به کار رود.<br> &nbsp;</span></span><br> &nbsp;</div> <div style="text-align: justify;"><span style="font-family:iransans;"><strong>Background and Aims: </strong>High prevalence of Methicillin Resistant <em>Staphylococcus Aureus </em>isolates (MRSA) as well as the multi-drug resistance in this bacterium causes difficulties in the treatment of infections due to these bacteria. Hence, detection of MRSA isolates by rapid and accurate methods is necessary. PCR-ELISA is an accurate and molecular technique that is used for the detection of several pathogens. The aim of this study is the detection of MRSA using PCR-ELISA<em>.</em><br> <strong>Materials and Methods: </strong>Specific primers for <em>mecA</em> gene were designed. Then, dNTP labeled with Digoxigenin was applied for amplifying <em>mecA</em> gene. DIG-labeled PCR products were seeded on the well coated streptoavidin and identified by anti-DIG&ndash;peroxidase conjugate. Furthermore, Biotin-labeled DNA probe specific for <em>mecA</em> gene was used. Sensitivity and specificity of the method was determined. Resistance to methicillin among 70 clinical isolates was determined by the disk diffusion, agar dilution and PCR-ELISA methods. <strong><span dir="RTL"></span></strong><br> <strong>Results:</strong> <em>MecA</em> gene of <em>S. aureus</em> was amplified using gene specific primers resulted in a fragment with 310 bp length. Findings from the PCR-ELISA technic showed no cross-reactivity with <em>Klebsiella Pneumoniae</em>, <em>Bacillus subtilis</em> and <em>Esheriashia coli</em> as control bacteria and its sensitivity was 0.5 ng. The prevalence of MRSA clinical isolates by the disk diffusion, agar dilution and PCR-ELISA methods was 60%, 58.5% and 60%, respectively.<span dir="RTL"></span><br> <strong>Conclusion:</strong>The PCR-ELISA technique was known as an accurate and rapid test for the detection of infection agents using their specific gene. This technic can applied as an appropriate alternative method for time-consuming, less sensitive and expensive techniques such as Real<span dir="RTL">-</span>time PCR and differential biochemical tests which are currently used in laboratory. <strong><span dir="RTL"></span></strong><br> &nbsp;<br> &nbsp;<br> &nbsp;</span></div> استافیلوکوکوس اورئوس, مقاومت آنتی‌بیوتیکی, PCR-ELISA, ژن mecA Staphylococcus aureus, Antibiotic resistance, PCR-ELISA, mecA gene 22 31 http://ijmm.ir/browse.php?a_code=A-10-70-3&slc_lang=fa&sid=1 Susan Rezavand سوسن رضاوند ali.karami@gmail.com 100319475328460013466 100319475328460013466 No Department of Biology, Faculty of Basic Sciences, Arak Branch, Islamic Azad University, Arak, Iran گروه زیست‌شناسی، دانشکده علوم ژایه، واحد اراک، دانشگاه آزاد اسلامی، اراک، ایران Jafar Amani جعفر امانی jafar.amani@gmail.com 100319475328460013467 100319475328460013467 Yes Applied Microbiology Research Center, Systems Biology and Poisonings Institute, Baqiyatallah University of Medical Sciences, Tehran, Iran مرکز تحقیقات میکروبیولوژی کاربردی، انستیتو سیستم بیولوژی و مسمومیت‌ها، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله (عج)، تهران، ایران Neda Akbari ندا اکبری jn_biolab@yahoo.com 100319475328460013468 100319475328460013468 No Department of Biology, Faculty of Basic Sciences, Arak Branch, Islamic Azad University, Arak, Iran گروه زیست‌شناسی، دانشکده علوم ژایه، واحد اراک، دانشگاه آزاد اسلامی، اراک، ایران Hamid Reza Mohajerani حمید رضا مهاجرانی jamani5@bmsu.ac.ir 100319475328460013469 100319475328460013469 No Department of Biology, Faculty of Basic Sciences, Arak Branch, Islamic Azad University, Arak, Iran گروه زیست‌شناسی، دانشکده علوم ژایه، واحد اراک، دانشگاه آزاد اسلامی، اراک، ایران Shahram Nazarian شهرام نظریان nazarian56@gmail.com 100319475328460013470 100319475328460013470 No Department of Biology, Faculty of Basic Sciences, Imam Hussein University, Tehran, Iran گروه زیست‌شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه امام حسین(ع)، تهران ، ایران Hamideh Mahmoodzadeh Hosseini حمیده محمود زاده حسینی hosseini361@yahoo.com 100319475328460013471 100319475328460013471 No Applied Microbiology Research Center, Systems Biology and Poisonings Institute, Baqiyatallah University of Medical Sciences, Tehran, Iran مرکز تحقیقات میکروبیولوژی کاربردی، انستیتو سیستم بیولوژی و مسمومیت‌ها، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله (عج)، تهران، ایران Mehrdad Moosazadeh Moghaddam مهرداد موسی زاده مقدم mm.genetics@gmail.com 100319475328460013472 100319475328460013472 No Applied Biotechnology Research Center, Baqiyatallah University of Medical Sciences, Tehran, Iran مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی کاربردی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله (عج)، تهران، ایران