Iranian Journal of Medical Microbiology

fa شناسایی ژن‌های بتالاکتاماز وسیع‌الطیف CTX-M-2، CTX-M-8 و ژن CMY وابسته به Ampc در شیگلا سونئی جداسازی شده از نمونه‌های اسهال کودکان با روش Multiplex-PCR و تعیین الگوی مقاومت آنتی‌بیوتیکی آن‌ها Identification of Broad-Spectrum Beta-lactamase CTX-M-2, CTX-M-8, and Ampc-dependent CMY Genes in Shigella sonnei Isolated from Pediatric Diarrhea Specimens by Multiplex-PCR and Antibiotic Resistance Pattern Determination میکروب شناسی مولکولی Molecular Microbiology مقاله پژوهشی Original Research Article <div style="text-align: justify;">زمینه و اهداف: گونه‌های شیگلا به‌عنوان یکی از عوامل شایع دیسانتری باسیلی و گاهی مرگ‌ومیر به‌ویژه در کودکان و افراد دارای نقص ایمنی مطرح هستند. تنوع گونه‌های ایجادکننده بیماری و بروز مقاومت دارویی، انتخاب آنتی‌بیوتیک مناسب برای درمان شیگلوزیس را با مشکل مواجه می‌سازد. یکی از عوامل مهم بروز مقاومت در ایزوله‌های شیگلا حضور ژن‌های کدکننده بتالاکتامازهای وسیع‌الطیف می‌باشد. لذا، هدف از این مطالعه تعیین فراوانی سویه‌های شیگلا سونئی تولیدکننده ژن‌های بتالاکتامازهایCTX-M-2 &lrm;&rlm; ، &rlm;CTX-M-8&lrm;، &rlm;CMY&rlm; با روش Multiplex PCR و بررسی ارتباط آن‌ها باوجود مقاومت آنتی‌بیوتیکی در سویه‌های شیگلا سونئی است. مواد و روش کار: در این مطالعه توصیفی-مقطعی که در یک بازه زمانی 6 ماهه از ابتدای خرداد لغایت انتهای آبان 1395 انجام گردید. تعداد 200 نمونه اسهالی از بیماران مشکوک به شیگلوزیس از بیمارستان مرکز طبی اطفال (تهران) جمع‌آوری گردید. آزمون حساسیت آنتی‌بیوتیکی با استفاده از روش انتشار از دیسک بر روی محیط مولر هینتون آگار و مطابق با دستورالعمل CLSI  انجام شد. پس از استخراج DNA، حضور ژن‌هایCTX-M-2 ، CTX-M-8، CMY  وابسته به &rlm;Ampc&rlm; با استفاده از پرایمرهای اختصاصی توسط Multiplex-PCR تعیین گردید. یافته‌ها: از مجموع نمونه‌های اخذشده، تعداد 60 (30%) سویه شیگلا سونئی با استفاده از آزمون‌های استاندارد میکروبیولوژیکی و بیوشیمیایی به‌دست آمد. اکثر سویه‌ها به اریترومایسین (26 سویه، %43/3) و سفپیم (24 سویه 40%) مقاوم بودند. نتایج آزمون مولکولی نشان داد که 40 (66/6%) و 33 (55%) از سویه‌ها به ترتیب حامل ژن‌های CTX-M-8 و  CMY بودند (P<0.05). همچنین ژنCTX-M-2 &lrm; در هیچ‌یک از نمونه‌ها شناسایی نگردید. نتیجه‌گیری: نتایج بیانگر فراوانی بالای ژن CMY در میان ایزوله‌های شیگلا سونئی و  مقاومت بیشتر این سویه‌ها نسبت به اریترومایسین و سفپیم است. به همین جهت مراقبت‌های دقیق پزشکی و استفاده صحیح و به‌موقع از آنتی‌بیوتیک‌های مناسب جهت جلوگیری از شیوع ایزوله‌های مقاوم امری اجتناب‌ناپذیر به نظر می‌رسد.</div> <div style="direction: ltr; text-align: justify;">Background:  Shigella species are one of the most common causes of bacillary dysentery and sometimes death especially in children and immune-compromised individuals. The diversity of disease-causing species and the emergence of drug resistance make it difficult to select the appropriate antibiotic to treat shigellosis. One of the important causes of resistance in Shigella isolates is the presence of genes encoding broad-spectrum beta-lactamase enzymes. The aim of this study was to determine the frequency of Shigella sonnei strains producing CTX-M-2, CTX-M-8, and CMY beta-lactamase genes by Multiplex PCR and to investigate their association with antibiotic resistance in Shigella sonnei strains.</div> <div style="direction: ltr; text-align: justify;"> Materials & Methods:   This descriptive cross-sectional study was conducted in a period of 6 months from the beginning of June to the end of October 2016. A total of 200 diarrhea specimens were collected from the patients with suspected shigellosis from the Children's Medical Center (Tehran). The antibiotic susceptibility testing was performed using disk diffusion method on Müller-Hinton agar in accordance with CLSI instructions. After DNA extraction, the presence of CTX-M-2, CTX-M-8, and Ampc-dependent CMY genes was determined by Multiplex-PCR using specific primers.</div> <div style="text-align: justify;"></div> <div style="direction: ltr; text-align: justify;">Results:   From all the samples, 60 (30%) Shigella sonnei strains were obtained using standard microbiological and biochemical tests. Majority of the strains were resistant to erythromycin (26 strains, 43.3%) and cefepime (24 strains, 40%). The molecular test results showed that 40 (66.6%) and 33 (55%) of the strains carried the CTX-M-8 and CMY genes, respectively (P<0.05). The CTX-M-2 gene was not detected in any of the samples.</div> <div style="text-align: justify;"></div> <div style="direction: ltr; text-align: justify;">Conclusion:   The results indicate a high frequency of CMY gene among Shigella sonnei isolates and higher resistance of these strains was found against erythromycin and cefepime. Therefore, careful medical care and proper and timely use of appropriate antibiotics to prevent the spread of resistant isolates seems inevitable.</div> شیگلا سونئی, بتالاکتاماز وسیع‌الطیف, دیسک دیفیوژن, Multiplex-PCR Broad-spectrum beta-lactamase, Disk diffusion, Multiplex-PCR, Shigella sonnei 501 511 http://ijmm.ir/browse.php?a_code=A-10-969-1&slc_lang=fa&sid=1 Kumarss Amini کیومرث امینی dr_kumarss_amini@yahoo.com 100319475328460015694 100319475328460015694 Yes Department of Microbiology, Saveh Branch, Islamic Azad University, Saveh, Iran گروه میکروبیولوژی، دانشکده علوم پایه، واحد ساوه، دانشگاه آزاد اسلامی، ساوه، ایران Mona Konkori مونا کنکوری k1985mona@gmail.com 100319475328460015695 100319475328460015695 No Department of Microbiology, Saveh Branch, Islamic Azad University, Saveh, Iran گروه میکروبیولوژی، دانشکده علوم پایه، واحد ساوه، دانشگاه آزاد اسلامی، ساوه، ایران