fa طراحی سیستم الیزای غیرمستقیم با استفاده از پادگن‌های ترشحی مایکوباکتریوم آویوم زیرگونه پاراتوبرکلوزیس برای تشخیص پاراتوبرکلوزیس بیماری های مشترک انسان - دام Zoonoses Research مقاله پژوهشی Original Research Article <p dir="RTL" style="text-indent:11.15pt;"><span style="font-size:12px;"><span style="font-family:tahoma;"><strong>زمینه و اهداف:</strong> <em>مایکوباکتریوم</em> <em>آویوم</em> زیرگونه <em>پاراتوبرکلوزیس </em>(<span dir="LTR">MAP</span>)، عامل به وجود آورنده پاراتوبرکلوزیس است که به‌ عنوان بیماری یون نیز نامیده می‌شود و علت ضررهای اقتصادی جبران‌ناپذیر در صنعت دامپروری به‌حساب می‌آید. جهت تشخیص آلودگی به پاراتوبرکلوزیس، الیزای غیرمستقیم به‌عنوان یک روش ساده با حساسیت و ویژگی بالا بیشتر مورد توجه بوده است. از این‌رو هدف از این مطالعه طراحی یک سیستم الیزای غیرمستقیم جهت تشخیص بیماری پاراتوبرکلوزیس می‌باشد.</span></span></p> <p dir="RTL" style="text-indent:11.15pt;"><span style="font-size:12px;"><span style="font-family:tahoma;"><strong>مواد و روش کار: </strong>تعداد 100 نمونه سرم از 10 گله در سال 1394 در استان های تهران و البرز که پاراتوبرکلوزیس توسط کشت در آن‌ها به اثبات رسیده با کیت استاندارد مورد مطالعه قرار گرفت و سیستم داخلی مطابق کیت استاندارد طراحی گردید. جهت طراحی سیستم الیزا با استفاده از پادگن‌های ترشحی، سرم مثبت و منفی واقعی پلیت متقاطع تیتراسیون انجام گرفت. جهت تعیین حد آستانه از نتایج کیت خارجی به ‌عنوان استاندارد طلایی استفاده شد.</span></span></p> <p dir="RTL" style="margin-bottom:0in;margin-bottom:.0001pt;text-indent:11.15pt;"><span style="font-size:12px;"><span style="font-family:tahoma;"><strong>یافته‌ها: </strong>با در نظر گرفتن نتایج (15 نمونه مثبت و 85 نمونه منفی) در ارزیابی‌های کیت تجاری، بهترین غلظت پادگن و رقت پادتن در سیستم طراحی‌شده به ترتیب 1/2 میکروگرم و 1/100 به ترتیب در هر چاهک ارزیابی شد. علاوه بر این، میزان حد آستانه برابر با 0/44 مشخص گردید. حساسیت و ویژگی به ترتیب 100 و 70 درصد ارزیابی شد.</span></span></p> <p dir="RTL" style="margin-bottom:0in;margin-bottom:.0001pt;text-indent:11.15pt;"><span style="font-size:12px;"><span style="font-family:tahoma;"><strong>نتیجه‌گیری</strong><strong><span dir="LTR">:</span></strong> پادگن‌های ترشحی <em>مایکوباکتریوم پاراتوبرکلوزیس</em> حساسیت لازم را جهت تشخیص بیماری ایجاد می‌کنند، اما تشخیص باکتری از مدفوع در مراحل اولیه بیماری، مشکل است. بنابراین با استفاده از الیزای غیرمستقیم طراحی‌شده می‌توان پادتن را در مراحل اولیه بیماری ردیابی کرد.</span></span></p> <p><strong>Background and Aim: </strong><em>Mycobacterium avium </em>subsp. <em>paratubercuiosis </em>(MAP) is the causative agent of paratuberculosis, also called as Johne&#39;s disease and is considered as the cause of irrecoverable economic losses in livestock industry. For the detection of the paratuberculosis, indirect ELISA has been highly considered as a simple method with high sensitivity and specificity. Accordingly, this study aims at designing a system of indirect ELISA for the detection of paratuberculosis.</p> <p><strong>Materials and Methods: </strong>A total of 100 serum samples from 10 herds, in Tehran and Alborz provinces in 2015, in which paratuberculosis has been proven by culture, were selected and surveyed using the standard kit and the internal system was designed according to the standard kit. To design ELISA system, by using secretory antigens and confirmed positive and negative serum samples were used and checkerboard titration was performed. To determine the cutoff point, the results of the commercial kit were used as gold standard.</p> <p><strong>Results: </strong>According to the commercial ELISA kit results (15 positive samples and 85 negative samples), the best concentration of antigen and antibody dilution were evaluated as<br> 1.2 &micro;g and 1.100 per well, respectively. Furthermore, the cutoff point was determined as 0.44. The sensitivity and specificity were evaluated as 70% and 100%, respectively.</p> <p><strong>Conclusions: </strong>Secreted antigens in <em>M. avium </em>subsp. <em>paratubercuiosis</em> are sensitive to detect the infected animals but it is difficult to detect bacteria from feces in the early stages of disease. Therefore, by using indirect designed ELISA, it can be detected antibodies in the early stages of the disease.</p> مایکوباکتریوم آویوم, پاراتوبرکلوزیس, الیزای غیرمستقیم, پادگن‌های ترشحی Mycobacterium avium, Paratuberculosis, Indirect ELISA, Secreted Antigens 26 33 http://ijmm.ir/browse.php?a_code=A-10-877-1&slc_lang=fa&sid=1 Mona Hatamifar مونا حاتمی فر mmrpentium@yahoo.com 10031947532846009244 10031947532846009244 No Medical Biotechnology Research Center, Ashkezar Branch, Islamic Azad University, Ashkezar, Yazd, Iran مرکز تحقیقات زیست‌فناوری پزشکی، واحد اشکذر، دانشگاه آزاد اسلامی، اشکذر، یزد، ایران Nader Mosavari نادر مصوری nmosavari@gmail.com 10031947532846009245 10031947532846009245 Yes Bovine Tuberculosis Reference Laboratory, Razi Vaccine and Serum Research Institute, Agricultural Research, Education and Extension Organization (AREEO), Tehran, Iran آزمایشگاه رفرانس سل گاوی، موسسه تحقیقات واکسن و سرم‌سازی رازی، سازمان تحقیقات، آموزش و ترویج کشاورزی (تات)، تهران، ایران Javad Kazemi جواد کاظمی j.kazemi@gmail.com 10031947532846009246 10031947532846009246 No Medical Biotechnology Research Center, Ashkezar Branch, Islamic Azad University, Ashkezar, Yazd, Iran مرکز تحقیقات زیست‌فناوری پزشکی، واحد اشکذر، دانشگاه آزاد اسلامی، اشکذر، یزد، ایران