fa شناسایی گونه‌های کاندیدا جدا شده از نمونه خون بیماران مبتلا به کاندیدمی به روش Seminested PCR قارچ شناسی پزشکی Medical Mycology مقاله پژوهشی Original Research Article <div align="right" style="direction: rtl"> <b>زمینه و هدف:</b> شاهد شیوع عفونت‌های قارچی از جمله کاندیدا و شیوع بیشتر بیماری ایدز، بدخیمی ها و افزایش اختلالات سیستم ایمنی هستیم. این امر زمینه را برای افزایش شیوع کاندیدیازیس سیستمیک و سپتی سمی کاندیدایی خصوصا با گونه‌های غیر آلبیکنس کاندیدا فراهم کرده است. هدف از این مطالعه تعیین هویت گونه‌های کاندیدا جدا شده از نمونه های کشت خون با استفاده از روش Seminested PCR بود. <br><b>روش بررسی:</b> 2516 نمونه‌ کشت خون در بیمارستان بقیه ا... در سال 1388 از نظر رشد عوامل مخمری بررسی شد. نمونه‌های مثبت از جهت حضور کاندیدا با آزمون های فنوتیپی (مورفولوژی، بررسی رنگ کلنی روی محیط کروم آگار کاندیدا، آزمون لوله زایا و تولید کلامیدوسپور)و ژنوتیپی (Seminested PCR)، بررسی شد. DNAی همه نمونه‌ها به‌طور مستقیم ازکشت خون و با استفاده از کیت DNG-plus استخراج شد. برای PCR مرحله اول از پرایمرهای CTSF و CTSR که قطعه ITS2) Internal Transcribed Spacer2) را تکثیر می کند استفاده شد. محصول مرحله اول به عنوان DNAی الگو برای انجام PCR مرحله دوم با استفاده از پرایمر عقبی مرحله اول(CTSR) و در حضور پرایمرهای اختصاصی گونه به نام های CADET ، CPDET ،CTDET ،CGDET و CDDET استفاده شد. پرایمرهای اختصاصی به ترتیب برای شناسایی گونه‌های کاندیدا آلبیکنس، کاندیدا پاراپسیلوزیس، کاندیدا تروپیکالیس، کاندیدا گلابراتا و کاندیدا دابلینینسیس بود. گونه مخمر با توجه به الگوی باندهای ایجاد شده روی ژل و اندازه آن تشخیص داده شد. <br><b>یافته ها:</b> از١٤ (0.5%) نمونه کشت خون 16 ایزوله کاندیدا جدا و شناسایی شد. از این تعداد، ٦ ایزوله کاندیدا آلبیکنس، ٤ ایزوله کاندیدا پاراپسیلوزیس، ٤ ایزوله کاندیدا گلابراتا، ٢ ایزوله کاندیدا تروپیکالیس بود. در دو نمونه خون، به‌طور همزمان دو گونه کاندیدا مشاهده و تعیین هویت شد(عفونت مخلوط). کاندیدا دابلینینسیس از هیچ نمونه‌ای جدا نشد. <br><b>نتیجه گیری: </b>با استفاده از روش مولکولی Seminested PCR ، امکان تشخیص سریع گونه های پاتوژن کاندیدا از نمونه‌های خون با حساسیت و ویژگی بالا، فراهم شد. </div> <b>Background and Objective:</b> In recent decades, the incidence of fungal infections has increased. Invasive Candida nfection is an increasing cause of morbidity and mortality in the immunocompromised patients, for example, neuropenic patient with hematological malignancies, recipients of allogeneic transplants and HIV-infected individuals. There is an increasing incidence of bloodstream infections caused by Candida species. In this study, we applied Seminested PCR for detection and identification of Candida species in blood specimens. <br> <b>Materials and Method:
</b> A total of 2516 blood culture samples in Baghiyetollah hospital were investigated for the presence of yeast cells duringthe year 2009. Fourteen blood samples which were found to be infected with Candidaspecies, as proved by culture, were analysed. All yeasts cells were identified by germ tube test, chlamydospor production on cornmeal agar and using CHROMagar Candida medium. DNA was extracted by DNG-plus kit from whole blood. The universal outer primers (CTSF & CTSR) amplified the Internal Transcribed Spacer2 (ITS2). The species-specific primers (CADET, CPDET, CTDET, CGDET and CDDET), complementary to unique sequences within the ITS2 of each test species, amplified speciesspecific DNA in the reamplification step of snPCR. PCR products were identified by electrophoresis.<br><b>Results:</b> Among the 14 (0.5%) blood samples, 16 Candidaspecies were detected and identified by using snPCR. Using snPCR for Candidaspecies identification indicated that 6 isolates were C. albicans, 4 isolates of C. parapsilosis, 4 isolates of C. glabrata, and 2 isolates of C. tropicalis. Two of the patients had dual infection with C. tropicalisand either C. albicansor C. glabrata. C. dubliniensiswasn’t detected in blood samples. <br> <b>Conclusion:</b> The Seminested PCR that was applied and evaluated in this study is a rapid, specific and sensitive method for the diagnosis of candidemia or hematogenous candidiasis caused by common pathogenic Candidaspecies. کاندیدا آلبیکنس، کاندیداهای غیر آلبیکنس، کشت خون، Seminested PCR ، ITS2 91 99 http://ijmm.ir/browse.php?a_code=A-10-1-41&slc_lang=fa&sid=1 Mohhamad Hossein Shahhosseiny محمد حسن شاه حسینی Shahhosseiny@yahoo.com 1003194753284600207 1003194753284600207 Yes Department of Microbiology , Islamic Azad University,Shahr-e- Qods Branch, Tehran, Iran. گروه میکرب شناسی، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد شهر قدس Mohhamad Nematian Soteh محمد نعمتیان سوته 1003194753284600208 1003194753284600208 No Department of Biology, Islamic Azad University, Science and Research branch , Tehran, Ira گروه زیست‌شناسی، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد علوم و تحقیقات تهران Mohhamad Ghahri محمد قهری 1003194753284600209 1003194753284600209 No Department of Biology , Imam Hossein University ,Tehran, Iran گروه میکرب شناسی، دانشگاه امام حسین(ع) Sara Saadatmand سارا سعادتمند 1003194753284600210 1003194753284600210 No Department of Biology, Islamic Azad University, Science and Research branch , Tehran, Ira گروه زیست‌شناسی، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد علوم و تحقیقات تهران Seyed Ahmad Hosseiny سید احمد حسینی 1003194753284600211 1003194753284600211 No Resalat medical laboratory, Tehran, Iran آزمایشگاه رسالت، تهران