fa استفاده توأم از Omp31 نوترکیب و DNA-واکسن pVAX-omp31 جهت محافظت ایمونولوژیک علیه بروسلا ملی تنسیس در مدل تجربی موش BALB/c میکروب شناسی مولکولی Molecular Microbiology مقاله پژوهشی Original Research Article <p dir="RTL"><strong>زمینه و اهداف:</strong> بروسلوزیس یک بیماری مشترک بین انسان و حیوان می‌باشد و ارزیابی آنتی‌ژن‌های مختلف آن ازنظر پاسخ‌های ایمونولوژیکی و بررسی استراتژی‌های مختلف ایمن‌سازی در طراحی واکسن‌های مؤثر نقشی اساسی دارند. در این تحقیق هدف ما ارزیابی ایمونولوژیکی وکتور یوکاریوتی <span dir="LTR">pVAX1</span> حامل ژن پروتئین غشای خارجی 31 کیلو دالتونی (<span dir="LTR">Omp31</span>) <em>بروسلا ملی تنسیس</em> بود.</p> <p dir="RTL"><strong>مواد و روش کار: </strong>در این مطالعه که در سال 1392 به انجام رسید&nbsp; توالی ژن <em><span dir="LTR">omp31</span></em> <em>بروسلا ملی تنسیس</em> در پلاسمید <span dir="LTR">pVAX1</span> بین جایگاه‌های <em><span dir="LTR">BamHI</span></em> و <em><span dir="LTR">XhoI</span></em> کلون شد. از این پلاسمید برای ایمن‌سازی موش‌های ماده 6-8 هفته‌ای <span dir="LTR">BALB/c</span> (تهیه شده از بخش حیوانات ازمایشگاهی انستیتو پاستور ایران )به‌صورت تزریق داخل ماهیچه‌ای 100 میکروگرم استفاده شد. تزریق یادآور به دو شکل پلاسمیدی یا پروتئینی در گروه‌های جداگانه انجام گرفت. پس از ایمن‌سازی سنجش سطح <span dir="LTR">IFN-&gamma;</span>، <span dir="LTR">IL-4</span> و <span dir="LTR">IL-12</span>، ایمونوگلوبولین <span dir="LTR">G</span> تام سرمی و <span dir="LTR">IgG1</span> و <span dir="LTR">IgG2a</span> نسبت به پروتئین نوترکیب <span dir="LTR">Omp31</span> انجام شد. درنهایت پاسخ ایمنی حفاظت کننده&nbsp; به دنبال مواجه‌سازی با <em>بروسلا ملی تنسیس</em> <span dir="LTR">16M</span> مورد ارزیابی قرار گرفت.</p> <p dir="RTL"><strong>یافته‌ها: </strong><em><span dir="LTR">DNA</span></em>-واکسن حامل <em><span dir="LTR">omp31</span></em> به همراه یادآور پروتئینی <span dir="LTR">Omp31</span>، میزان بیشتری از <span dir="LTR">IFN-</span><strong><em><span dir="LTR">&gamma;</span></em></strong>، <span dir="LTR">IL-12</span> و <span dir="LTR">IgG2a</span> را نسبت به گروه‌های دریافت‌کننده <span dir="LTR">DNA</span><strong><em>-</em></strong>واکسن یا پروتئین نوترکیب تنها تحریک کرده بود. نتایج چالش با سویه بیماری‌زا نیز حاکی ایمنی حفاظت بخش بیشتر در گروه دریافت‌کننده <span dir="LTR">DNA</span>-واکسن و پروتئین بود.</p> <p dir="RTL"><strong>نتیجه‌گیری</strong><strong><span dir="LTR">:</span></strong> بررسی سطح سایتوکین‌ها حاکی از مقدار بالاتر <span dir="LTR">IFN-&gamma;</span>، <span dir="LTR">IL-12</span> در موش‌هایی بود که با رژیم <span dir="LTR">DNA</span>-واکسن و پروتئین نوترکیب ایمن شده بودند. میزان بالاتر <span dir="LTR">IgG2a</span> سرمی در گروه یادشده به‌موازات پاسخ سایتوکینی نشانگر شکل‌گیری ایمنی سلولی در گروه ذکرشده است که پاسخ ایمنی حفاظت بخش در مقابل سویه بیماری‌زای آن را تأیید می‌نماید.</p> <p><strong>Background and Aim: </strong>Brucellosis is still an important zoonotic infection and evaluation of immunologic properties of various bacterial antigens along with different vaccination strategies helps in designing efficient vaccines against the disease. The aim of this study is to immunological evaluate the eukaryotic vector pVAX1, carrying the outer membrane protein gene of 31 kDa (Omp31) <em>B.melitensis.</em></p> <p><strong>Materials and Methods: </strong>In this study which was carried out in 2014, whole sequence of <em>omp31</em> of <em>B. melitensis</em> was inserted between <em>BamHI</em> and <em>XhoI</em> of pVAX1 plasmid vector. Female BALB/c mice aged 6-8 weeks (purchased from Pasteur Institute of Iran) were immunized intra-muscularly with 100&mu;g of the construct, followed by either protein or plasmid boosters separately. The level of IL-4, IL-12, IFN-&gamma;, total serum IgG, and specific IgG1 and IgG2a against recombinant Omp31 were evaluated. Finally the protective immune response following exposure to <em>B. melitensis</em> 16M was evaluated.</p> <p><strong>Results: </strong>DNA-vaccine omp31 career with protein reminders Omp31, stimulate higher levels of IFN-&gamma;, IL-12 and IgG2a compared to groups of DNA-vaccine or recombinant protein. Protective immunity was also significantly higher in mice which immunized with DNA vaccine&ndash; protein regimen.</p> <p><strong>Conclusions: </strong>Mice which immunized with DNA vaccine&ndash;protein regimen showed a significantly higher levels of IL-12 and IFN-&gamma; along with serum IgG2a which together imply augmentation of T cell-mediated immune responses against Omp31. The latter was confirmed by significant protective response to <em>B. melitensis</em> 16M challenge.</p> بروسلا ملی تنسیس,ِ DNA واکسن, Omp31, pVAX B. melitensis, DNA vaccine, Omp31, pVAX1 39 47 http://ijmm.ir/browse.php?a_code=A-10-751-1&slc_lang=fa&sid=1 Naser Harzandi ناصر هرزندی naser.harzandi@kiau.ac.ir 10031947532846008488 10031947532846008488 Yes Department of Microbiology, Karaj Branch, Islamic Azad University, Karaj, Iran گروه میکروب‌شناسی، واحد کرج، دانشگاه آزاد اسلامی، کرج، ایران Haniyeh Aghababa هانیه آقابابا aghababa@modares.ac.ir 10031947532846008489 10031947532846008489 No Department of Bacteriology, Faculty of Medical Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran گروه باکتری‌شناسی، دانشکده علوم پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران Nima Khoramabadi نیما خرم آبادی nima.khoramabadi@gmail.com 10031947532846008490 10031947532846008490 No Department of Bacteriology, Faculty of Medical Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran گروه باکتری‌شناسی، دانشکده علوم پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران Bahman Tabaraie بهمن تبرایی bahmantabaraie@yahoo.com 10031947532846008491 10031947532846008491 No Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران