fa تشخیص ژن Stx1 درشیگلا دیسانتریه جدا شده از نمونه های بالینی در استان مازندران با استفاده ازتکنیک PCR-ELISA باکتری شناسی پزشکی Medical Bacteriology مقاله پژوهشی Original Research Article <p dir="RTL"><strong>هدف:</strong> در میان باکتریهای خانواده آنتروباکتریاسه، شیگلا دیسانتریه بدلیل تولید توکسین پروتئینی تحت عنوان شیگاتوکسین با داشتن فعالیت سیتوتوکسینی و نوروتوکسینی موجب بیماریهایی اسهال، گاستروانتریت و اختلال ا نعقاد داخل عروقی می شود که امروزه به عنوان مهمترین چالش برای سلامتی انسانها مطرح می باشند<span dir="LTR">.</span> &nbsp;هر چند روشهای کلاسیک ومتداول میکروبیولوژی &nbsp;برای تشخیص حساس واختصاصی می باشند اما محدودیت های خاص خود را دارند. لذا این مطالعه بمنظور رفع محدودیت ها و شناسایی توکسین&nbsp; <span dir="LTR">Stx1</span>&nbsp; در کمترین زمان و میزان در شیگلا دیسا نتریه&nbsp; با حساسیت و اختصاصیت بالا بوسیله تکنیک<span dir="LTR">PCR-ELISA </span>&nbsp;انجام شد.</p> <p dir="RTL"><strong>مواد وروش ها:</strong> توالی <span dir="LTR">Stx1</span> (<span dir="LTR">bp</span>490) &nbsp;بعنوان ژن هدف با استفاده از <span dir="LTR">DIG-dUTP</span> نشاندار تکثیر و سپس محصول نشاندار شده کف میکروپلیت الایزا کوت شده و در نهایت با استفاده از آنتی بادی ضد دیگوکسی ژنین کانژوگه شناسایی انجام شد. همچنین حساسیت و اختصاصیت این تکنیک با نمونه های بالینی مورد بررسی قرار گرفت.</p> <p dir="RTL">یافته ها : حساسیت&nbsp; تشخیص&nbsp; باکتری در نمونه&nbsp; بررسی شده با استفاده از <span dir="LTR">DNA</span> ژنومی <span dir="LTR">pg</span> 56/1 برای شیگلا دیسانتریه تعیین ودر بررسی اختصاصیت این تکنیک بغیر از شیگلا دیسانتریه دیگر گونه های خانواده انتروباکتریاسه جذب قابل قبولی نداشتند . الیزا مربوط به<span dir="LTR">DNA</span> ژنومی تا رقت 156/0 پیکوگرم ازجذب معنی داری داشت. از 70 نمونه بالینی مورد بررسی 3 نمونه حاوی ژن <span dir="LTR">stx1</span> با این تکنیک شناسایی شد.</p> <p dir="RTL"><strong>نتیجه گیری:</strong> کارایی تکنیک <span dir="LTR">PCR-ELISA</span> نشان داد علاوه بر سادگی، سریع بودن و برخورداری از حساسیت واختصاصیت بالا جایگزینی مناسب برای روش &nbsp;کشت و <span dir="LTR">PCR</span> می باشد و براحتی قابلیت کاربردی شدن در هر آزمایشگاه طبی را دارد.</p> <p><strong>Background:</strong>Among <em>enterobacteriaceae</em> bacteria, <em>Shigella</em><em> dysenteriae</em> produce a shiga protein toxin, and have cytotoxicity, enterotoxin and neurotoxin activity. The toxin causes diseases such as diarrhea, gastroenteritis, intravascular coagulation disorder. Today diarrhea is the most important challenge for the human health. The classic and conventional microbiological detection methods are sensitive and specificity, there is limitation. This study was designed to identify <em>shigella</em><em> dysenteriae</em> in shortest time and the amount of toxin Stx1 with high sensitivity and specificity by using PCR-ELISA method.</p> <p></p> <p><strong>Method and material:</strong> The Stx1 sequence (490bp) as a target gene was amplified by Dig-dUTP labeled, then product was coating on microplate and by using anti antibody digoxigenin conjugated detection was done. &nbsp;Also the specificity and sensitivity of method with clinical specimens examined.</p> <p></p> <p><strong>Results:</strong> Sensitivity detection of bacteria in the sample using genomic DNA for <em>Shigella dysenteriae</em> was 1/56pg and specificity of technique didn&rsquo;t showed acceptable OD in other species of <em>enterobacteriaceae</em> family. ELISA for genomic DNA Up to dilution 0/156 pg had significant absorption. As well as from 70 clinical samples which was analyzed, 3 samples contained stx1 gene.</p> <p dir="RTL"></p> <p><strong>Conclusion:</strong> Efficiency PCR-ELISA techniques showed that it was simple, faster, high specific and sensitive methods. This technique is more suitable than culture and PCR method also it was easily can applied in each medical laboratory.</p> <p style="margin-left:.2pt;"></p> <p style="margin-left:.2pt"></p> شیگلا دیسانتریه , شیگاتوکسین ,دیگوکسی ژنین, ,PCR-ELISA Shigella dysenteriae ,Shiga toxin, Digoxigenin, PCR-ELISA 11 19 http://ijmm.ir/browse.php?a_code=A-10-70-2&slc_lang=fa&sid=1 Askary Ahmadpour عسکری احمدپور askarmail1389@yahoo.com 10031947532846008318 10031947532846008318 No Department of Biology, Islamic Azad University Amol branch, Amol, Iran گروه زیست شناسی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد آیت ا... آملی، آمل، ایران Esmail Fatahi اسماعیل فتاحی askarmail1389@yahoo.com 10031947532846008319 10031947532846008319 No Department of Biology, Islamic Azad University Amol branch, Amol, Iran گروه زیست شناسی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد آیت ا... آملی، آمل، ایران Amani Jafar جعفر امانی jafar.amani@gmail.com 10031947532846008320 10031947532846008320 Yes Applied Microbiology Research Center, Baqiyatallah University of Medical Sciences, Tehran, Iran مرکز تحقیقات میکروبیولوژی کاربردی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه ا... (عج)، تهران، ایران Abbas Ali Imani Fooladi عباسعلی ایمانی فولادی imanifouladi.a@bmsu.ac.ir 10031947532846008321 10031947532846008321 No Applied Microbiology Research Center, Baqiyatallah University of Medical Sciences, Tehran, Iran مرکز تحقیقات میکروبیولوژی کاربردی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه ا... (عج)، تهران، ایران Aghil Tabar Molahassan عقیل تبار ملاحسن askarmail1389@yahoo.com 10031947532846008322 10031947532846008322 No Department of Immunology, Islamic Azad University Babol branch, Babol, Iran گروه ایمونولوژی، دانشکده پزشکی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد بابل، بابل، ایران