fa کلونینگ، بیان و تخلیص پروتئین پیلین سودوموناس آئروژینوزا در میزبان پروکاریوتی باکتری شناسی پزشکی Medical Bacteriology مقاله پژوهشی Original Research Article <p dir="RTL" style="text-align: justify;"><strong>زمینه و اهداف: </strong>سویه های پاتوژن <em>سودوموناس آئروژینوزا</em> پیلی قطبی تولید می کند که برای تحرک، چسبندگی و تهاجم مورد نیاز است. هدف از این مطالعه تولید و تخلیص پروتئین نوترکیب پیلین می باشد.</p> <p dir="RTL" style="text-align: justify;"><strong>مواد و روش ‌ ها: </strong>ژن کد کننده پیلین (<em><span dir="LTR">pilA</span></em>) از سویه <span dir="LTR">PAO1</span> <em>سودوموناس آئروژینوزا</em> با بوسیله <span dir="LTR">PCR</span> جدا گردید و در وکتور بیانی <span dir="LTR">pET-22b</span> کلون شد. تایید ساختار وکتور نوترکیب به وسیله ی هضم آنزیمی دوگانه و تعیین توالی صورت گرفت. وکتور نوترکیب به داخلی باکتری (<em><span dir="LTR">E.coli</span></em><span dir="LTR"> BL21(DE3</span> ترانسفورم شد و تخلیص پروتئین نوترکیب بوسیله کروماتوگرافی تمایلی انجام شد. آزمون وسترن بلات با استفاده از توسط آنتی بادی ضد پلی هیستیدنی انجام شد.</p> <p dir="RTL" style="text-align: justify;">&nbsp;<strong>یافته ها:</strong> نتایج تعیین توالی و هضم آنزیمی صحت کلونینگ را تایید نمود. الکتروفورز پروتئین نشان داد که وزن مولکولی پروتئین نوترکیب پیلین حدود 19 کیلودالتون می باشد. همچنین نتایج آزمون وسترن بلات تولید پروتین نوترکیب را تایید کرد. &nbsp;مقدار پروتئین تولید شده که به روش اسپکتروفتومتری مستقیم اندازه گیری شد که مقدار ان.58/2 میلی گرم به هر میلی لیتر تعیین شد.</p> <p dir="RTL" style="text-align: justify;"><strong>نتیجه گیری:</strong> نتایج وسترن بلات و الیزا به موازات نتایج تعیین توالی نشان دهنده صحت تولید پروتئین نوترکیب پیلین و حفظ ساختار نسبی آن می باشد.</p> <p style="text-align: justify;"><strong>Background:</strong> Pathogenic <em>Pseudomonas aeruginosa</em> strains produce polar pili has required for motility, adhesion, and invasion. The main aims of the present study are to identify, clone, express and purify the recombinant pilin protein of <em>P. aeruginosa </em>in the prokaryotic host.</p> <p style="text-align: justify;"><strong>Material and methods: </strong>The recombinant pilin gene (<em>pilA</em>) was isolated from <em>P. aeruginosa </em>PAO1 strain by PCR and cloned into pET-22b vector. The recombinant plasmid was subsequently verified by restriction analysis, and DNA sequencing. The recombinant vector was transformed into <em>E. coli</em> BL21 (DE3) strain, then the recombinant pilin overexpressed and affinity purified by Ni-NTA agarose-affinity chromatography<span dir="RTL">.</span>Western blot analysis was performed using anti-6His tag antibody.</p> <p style="text-align: justify;"><strong>Results:</strong> The PCR and enzymatic digestion results showed the accuracy of the <em>pilA</em> gene cloning. The protein electrophoresis showed that the molecular weight of recombinant pilin is about 19 kDa. Western blot analysis also confirmed the production of recombinant protein. The amount of produced protein was measured by the direct spectrophotometery method, which was 2/58 mg/mL.</p> <p style="text-align: justify;"><strong>Conclusion:</strong> Western blot and ELISA results along with that of sequencing ensure accurate production of recombinant pilin, retaining its partial epitopes.&nbsp;</p> پروتئین پیلین سودوموناس آئروژینوزا, کلونینگ, بیان Pseudomonas aeruginosa pilin protein, Cloning, Expression 55 62 http://ijmm.ir/browse.php?a_code=A-10-242-1&slc_lang=fa&sid=1 Fatemeh Korpi فاطمه کرپی fatemeh.korpi@yahoo.com 10031947532846005698 10031947532846005698 No Iran University of Medical Sciences گروه میکروبشناسی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی ایران ، تهران ، ایران. Bahador Behrouz بهادر بهروز bahador.behroz3@gmail.com 10031947532846005699 10031947532846005699 No Tehran University of Medical Sciences گروه میکروبشناسی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی تهران، تهران ، ایران. Mohmmad Motameifar محمد معتمدی فر motamedm@yahoo.com 10031947532846005700 10031947532846005700 No Shiraz University of Medical Sciences گروه باکتری شناسی و ویروس شناسی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی شیراز، شیراز، ایران Gholamreza Irajian غلامرضا ایراجیان dr.irajian@gmail.com 10031947532846005701 10031947532846005701 Yes Iran University of Medical Sciences گروه میکروبشناسی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی ایران ، تهران ، ایران.