fa طراحی و ساخت وکتور خودکشی pDS132-ΔkanR به منظور حذف ژن مقاومت به آنتی-بیوتیک کانامایسین در بروسلا ملی‌تنسیس سویه Rev1 جهش‌یافته برای تولید سویه کاندید واکسن بیوتکنولوژی میکروبی Microbial Biotechnology مقاله پژوهشی Original Research Article <p dir="RTL" style="text-align: justify;"><strong>زمینه و اهداف:</strong> بروسلوز از مهم‌ترین بیماری‌های مشترک انسان و دام محسوب می‌گردد. بهترین راه مقابله با بروسلوز انجام واکسیناسیون مناسب می&shy;باشد. واکسن&shy;های موجود از قبیل واکسن <span dir="LTR">Rev1</span> با معایبی چون سقط جنین در حیوانات باردار همراه است لذا تهیه واکسن مناسب برای درمان بروسلوز ضروری&nbsp;می&shy; باشد. هدف از انجام این مطالعه، طراحی و ساخت وکتور خودکشی <span dir="LTR">pDS132-&Delta;<em>kan^R</em></span> به منظور حذف ژن مقاومت به آنتی&shy;بیوتیک کانامایسین در <em>بروسلا ملی&shy;تنسیس</em> سویه <em><span dir="LTR">Rev1</span></em> جهش&shy;یافته برای تولید سویه کاندید واکسن بود.</p> <p dir="RTL" style="text-align: justify;"><strong>مواد و روش کار: </strong>در این مطالعه برای حذف ترادف هدف، تصمیم به استفاده از پلاسمید <span dir="LTR">pDS132</span>&nbsp;به&nbsp;عنوان وکتور خودکشی گرفته شد. بمنظور ساخت کاست حذف، پس از طراحی و سنتز جداگانه قطعات دارای همولوژی با ترادف&shy;های هدف، این قطعات جهت ساخت قطعه واحد، با استفاده از آنزیم&shy;های محدودگر مناسب در وکتور <span dir="LTR">pBluescriptSK(-)</span>&nbsp;کلون&nbsp;شد. سپس به منظور ساخت وکتور خودکشی، قطعه کاست حذف با استفاده از آنزیم&shy; های محدودگر مناسب از وکتور فوق جدا و در وکتور <span dir="LTR">pDS132</span> ساب کلون شد.</p> <p dir="RTL" style="text-align: justify;"><strong>یافته‌ها: </strong>وکتور خودکشی <em><span dir="LTR">pDS132-&Delta;kan^R</span></em> با در برداشتن 590 جفت باز از توالی بالادست و 421 جفت باز از توالی پایین&shy;دست ترادف هدف می&shy;تواند به عنوان یک ناقل خودکشی اختصاصی در ایجاد تداخل در ژن <em><span dir="LTR">kan^R</span></em> در ژنوم باکتری<em>بروسلا ملی&shy;تنسیس</em> سویه <em><span dir="LTR">Rev1</span></em> جهش &shy;یافته موجب حذف مقاومتآنتی&shy; بیوتیکی در آن بشود.</p> <p dir="RTL" style="text-align: justify;"><strong>نتیجه‌گیری</strong>: استفاده از سیستم خودکشی مورد نظر با استفاده از وکتور <span dir="LTR">pDS132-&Delta;kan^R</span>، ایجاد جهش هدفمند را تسهیل و در مقایسه با سایر روش&shy; های خودکشی وابسته به مارکر مثبت و نیز روش‌های ابتدایی مانند پاساژ متوالی، روش موثرتری می&shy;باشد.</p> <p style="text-align: justify;"><strong>Background and Aim: </strong>Brucellosis is a common disease between humans and animals. Vaccination is the best approach to prevent brucellosis. Existing vaccines such as <em>Rev1</em> are associated with disadvantages such as abortion in pregnant animals. Therefore, it is necessary to generate an appropriate vaccine that is produced by molecular methods. The aim of this study was designing and construction of pDS132-&Delta;<em>kan^r</em> suicide vector to delete kanamycin resistance sequence (<em>kan^R</em>) in a mutant strain of <em>Brucella melitensis rev1</em> to generate a candidate vaccine strain<strong>.</strong></p> <p style="text-align: justify;"><strong>Materials and Methods: </strong>In this study, the plasmid pDS132 was used as a suicide vector to delete target gene. In order to construct the deletion cassette, two homologous fragments were separately designed and constructed by PCR, and tandemly cloned into the pBluescriptSK(-) vector using appropriate restriction enzymes. Then, the deletion cassette was digested from the recombinant vector by terminal restriction enzymes, and sub cloned into the pDS132 vector to construct the suicide vector pDS132-&Delta;<em>kan^R</em>.&nbsp;</p> <p style="text-align: justify;"><strong>Results: </strong>The pDS132-&Delta;<em>kan^R</em> contains 590bp upstream sequences and 421bp downstream sequences on the deletion cassette fragment; it can be used as specific suicide vector to disrupt the <em>kan^R</em> sequence in genome of mutant strain of<em> Brucella melitensis</em> <em>Rev1.</em></p> <p style="text-align: justify;"><strong>Conclusions: </strong>The use of suicide pDS132-&Delta;kan^R system facilitated mutant construction which is a more specific and effective system in comparison with the other positive marker-dependent suicide systems and primary techniques such as serial passages.</p> kanR, بروسلا ملی‌تنسیس Rev1, وکتور خودکشی kanR, Brucella melitensis Rev1, suicide vector 23 32 http://ijmm.ir/browse.php?a_code=A-10-470-1&slc_lang=fa&sid=1 Zahra Nassaji زهرا نساجی zahra_nassaji@yahoo.com 10031947532846008356 10031947532846008356 No Molecular Genetics department, Research Centre for Sciences and Biotechnology, Malek Ashtar University, Tehran, Iran گروه مهندسی ژنتیک، پژوهشکده علوم و فناوری زیستی، دانشگاه مالک اشتر، تهران، ایران Alireza Saeedinia علیرضا سعیدی نیا a.saeedinia@modares.ac.ir 10031947532846008357 10031947532846008357 Yes Molecular Genetics department, Research Centre for Sciences and Biotechnology, Malek Ashtar University, Tehran, Iran گروه مهندسی ژنتیک، پژوهشکده علوم و فناوری زیستی، دانشگاه مالک اشتر، تهران، ایران Mehdi Zeinoddini مهدی زین الدینی zeinoddini@yahoo.com 10031947532846008358 10031947532846008358 No Molecular Genetics department, Research Centre for Sciences and Biotechnology, Malek Ashtar University, Tehran, Iran گروه مهندسی ژنتیک، پژوهشکده علوم و فناوری زیستی، دانشگاه مالک اشتر، تهران، ایران Ali Asghar Deldar علی اصغر دلدار msc_students@yahoo.com 10031947532846008359 10031947532846008359 No Molecular Genetics department, Research Centre for Sciences and Biotechnology, Malek Ashtar University, Tehran, Iran گروه مهندسی ژنتیک، پژوهشکده علوم و فناوری زیستی، دانشگاه مالک اشتر، تهران، ایران