fa جدا سازی ژن زیر واحد G آنزیم V-ATPase از قارچ Trichophyton rubrum و کلونینگ آن در E.coli باکتری شناسی پزشکی Medical Bacteriology مقاله پژوهشی Original Research Article <b>زمینه و اهداف: </b><i>T.rubrum) Trichophyton rubrum</i>) شایع ترین عامل کچلی انسان در سراسر دنیا می باشد. درمان این بیماری کامل نیست و پس از قطع دارو عود کننده است. اخیراً زیرواحد G از آنزیم V-ATPase به-عنوان هدف برای داروها مورد توجه قرار گرفته. هدف مطالعه کلون کردن ژن کدکننده زیرواحد G آنزیم V-ATPase قارچ <i>T.rubrum</i> در باکتری <i>E.coli</i> به منظور نگهداری و مطالعه بر روی پروتئین حاصل از آن بود.<br><b>روش بررسی: </b>DNA و RNA از قارچ درماتوفیت <i>T.rubrum</i> جدا شد، سپس توسط PCR و RT-PCR تکثیر یافت و محصول RT-PCR در پلاسمید T–pTG19 الحاق شد. پلاسمید نوترکیب با روش شوک حرارتی به داخل <i>E.coli</i> وارد شد. باکتری کشت داده شد و کلنی های مشکوک جدا شدند و مجداداً کشت داده شدند .سپس PCR طبق روش قبل انجام شد.<br> <b>یافته ها:</b> وزن مولکولی DNA استخراج شده حدود 750bp و cDNA تقریبا 700bp بود. با کشت <i>E.coli</i> بر روی (Luria agar (LB Agar کلنی های آبی و سفید دیده شد. PCR کردن DNA حاصل از کلنی های مشکوک نشان داد 5 کلون از 8 کلون دارای ژن مورد نظر بود. <br> <b>نتیجه گیری:</b> به نظر می رسد که این ژن دارای اینترون است. کلنی های سفید رنگ به احتمال زیاد دارای ژن مورد نظر می باشد. نتایج حاصل از PCR در آخرین مرحله نشان دهنده کلون شدن ژن مورد نظر است. <b>Background & objective:</b> <i>Trichophyton rubrum</i> is the most common etiologic agent of chronic dermatophytosis of body in the world. Therapy of this disease is not complete and the disease may relapse after stopping medicine consumption. Recently it is suggested that V-ATPase may work as a target for antifungal drugs development. In this study we cloned G subunit of V-ATPase gene from <i>T.rubrum</i> into E.coli to produce the relevant protein in high density, save it and then study it. <br><b>Material and methods:</b> DNA and RNA was extracted from <i>Trichophyton rubrum</i>. Then, the gene was replicated using PCR & RT-PCR. We inserted cDNA in pTG19-T and cloned it in E.coli white using hit shock method. Then PCR was done with the same protocol.<br><b>Results:</b> DNA has 750 bp and cDNA has 700 bp. When E. coli was cultured on Luria agar we found both blue and white colonies and by doing PCR it was shown that the 5 colony of E.coli had this gene.<br><b>Conclusion:</b> It seems the gene V-ATPase has intron. It is also suggests that the white colonies have probably the gene. The product of latest PCR indicated that the cloning was done successfully. کلون کردن، زیرواحد G ،V-ATPase ،Trichophyton rubrum ،PCR Cloning, G subunit, V-ATPase, Trichophyton rubrum, PCR 36 44 http://ijmm.ir/browse.php?a_code=A-10-1-14&slc_lang=fa&sid=1 Hajarasadat Ghaderi هاجرالسادات قادری 10031947532846001108 10031947532846001108 Yes Department of Microbiology, Islamic Azad university, North Tehran branche, Tehran, Iran گروه میکرب شناسی،دانشکده علوم پایه، دانشگاه آزاداسلامی،واحد تهران شمال Sasan Rezaie ساسان رضایی 10031947532846001109 10031947532846001109 No Department of Mycology and Parazitology, Molecular biology section, Faculty of Health, Tehran university of medical sciences, Tehran, Iran بخش بیولوژی مولکولی،گروه قارچ شناسی وانگل شناسی،دانشکده بهداشت، دانشگاه علوم پزشکی تهران Fatemeh Noorbakhsh فاطمه نوربخش 10031947532846001110 10031947532846001110 No Department of Microbiology, Islamic Azad university, Varamin-Pishva branche, Varamin, Iran گروه میکرب شناسی ،دانشکده علوم پایه ، دانشگاه آزاد اسلامی،واحدورامین-پیشوا Mahtab Vafaie مهتاب وفایی 10031947532846001111 10031947532846001111 No Department of Microbiology, Islamic Azad university, North Tehran branche, Tehran, Iran گروه میکرب شناسی،دانشکده علوم پایه، دانشگاه آزاداسلامی،واحد تهران شمال kamiyar Motavaze کامیار متواضع 10031947532846001112 10031947532846001112 No Department of Microbiology, Islamic Azad university, North Tehran branche, Tehran, Iran گروه میکرب شناسی،دانشکده علوم پایه، دانشگاه آزاداسلامی،واحد تهران شمال Masoud Emamy مسعود امامی 10031947532846001113 10031947532846001113 No Department of Microbiology, Islamic Azad university, North Tehran branche, Tehran, Iran گروه میکرب شناسی،دانشکده علوم پایه، دانشگاه آزاداسلامی،واحد تهران شمال Mohammadreza Safari محمدرضا صفری 10031947532846001114 10031947532846001114 No گروه قارچ شناسی و انگل شناسی،دانشکده بهداشت، دانشگاه علوم پزشکی تهران