fa بیان ترشحی بخش کروی هماگلوتینین (HA1) ویروس آنفولانزای H5N1) A) در باسیلوس سوبتیلیس بیوتکنولوژی میکروبی Microbial Biotechnology مقاله پژوهشی Original Research Article <p dir="RTL" style="text-align: justify"><strong>زمینه و اهداف:</strong> ویروس <span dir="LTR">H5N1</span>  ممکن است قابلیت انتقال بین انسان ها را بدست آورد. بنابراین امکان وقوع یک بیماری همه گیر وجود دارد. پروتئین <span dir="LTR">HA1 </span> نقش اصلی را در اتصال ویروس به سلول هدف بازی می کند و پاسخ های آنتی بادی خنثی کننده عمدتاً علیه این ناحیه است. باسیلوس سوبتیلیس میزبانی بدون اندوتوکسین جهت بیان وترشح پروتئین های هترولوگ واجد فعالیت ایمونولوژیک شناخته شده است. اگر چه این باکتری قادر به تولید پروتئین های گلیکوزیله نیست اما تحقیقات نشان داده است که گلیکوزیلاسیون <span dir="LTR">HA</span> برای ایمنی زایی آن چندان ضروری نمی باشد. در این مطالعه پروتئین نوترکیب <span dir="LTR">HA1 </span> در باسیلوس سوبتیلیس به صورت ترشحی تولید شد.</p> <p dir="RTL" style="text-align: justify"><strong>مواد و روش کار: </strong>توالی <span dir="LTR">HA1</span> در وکتور  (–)  <span dir="LTR">pGEM® 5Zf</span>کلون شد. سپس این توالی در شاتل وکتور <span dir="LTR">PHT43</span> ساب کلون وجهت تکثیر به اشریشیاکلی منتقل گردید.پلاسمید نوترکیب استخراج شده از <em>اشریشیاکلی </em>به منظور ترانسفورم <em>باسیلوس سوبتیلیس</em> با روش الکتروپوریشن مورد استفاده قرار گرفت. پس از القای <em>باسیلوس سوبتیلیس</em> نوترکیب با <span dir="LTR">IPTG</span>، کل پروتئین­های سلول و پروتئین ترشح شده درون محیط کشت طی یک بازه زمانی، با استفاده از <span dir="LTR">SDS-PAGE</span> بررسی شد.</p> <p dir="RTL" style="text-align: justify"><strong>یافته‌ها: </strong>صحت ساختار <span dir="LTR">HA1</span>-<span dir="LTR">PHT43</span> با تعیین توالی و هضم آنزیمی تایید شد. نتایج <span dir="LTR">SDS-PAGE</span>  نشان داد که پروتئین نوترکیب<span dir="LTR">HA1</span>  با موفقیت بیان و درون محیط کشت ترشح شده است.                                                     </p> <p style="text-align: justify"><strong><span dir="RTL">نتیجه‌گیری</span>: </strong><em><span dir="RTL"> باسیلوس سوبتیلیس میزبانی بدون اندوتوکسین است که می تواند به عنوان یک بستر پروکاریوتی مناسب جهت تولید پروتئین نوترکیب </span></em>HA1 <em><span dir="RTL"> مورد استفاده قرار گیرد. </span></em><span dir="RTL">پروتئین تولید شده در این پژوهش می تواند به عنوان کاندیدی برای واکسن مورد توجه قرار گیرد و لازم است توان ایمنی زایی آن در کنار مدل های حیوانی همراه با گروه های کنترل مناسب ارزیابی شود.  </span></p> <p style="text-align: justify"><span dir="RTL">                                                      </span></p> <p style="text-align: justify"><strong>Background and Aim: </strong>H5N1 influenza viruses may acquire the ability to transmit between humans thus, there is the possibility of a pandemic event. HA1 protein has been shown to play a major role in binding the virus to its target cell and the main neutralizing antibody responses elicit against this region. Bacillus subtilis has been identified as a free endotoxin host for expression and secretion of heterologous proteins with immunological activity. Although the bacteria is not capable of making glycosylated proteins, it has been shown that glycosylation of HA is not much necessary for its immunogenicity. Here we produced secretory recombinant HA1 protein in B. subtilis.</p> <p style="text-align: justify"><strong>Materials and Methods: </strong>HA1 sequence was cloned into pGEM® 5Zf(–)vector. It was then subcloned into shuttle vector PHT43 and transferred to <em>E.coli</em> for replication. The recombinant plasmid was extracted from <em>E.coli</em> and used to transform of B.subtilis by electroporation. After induction of recombinant B.subtilis by IPTG, total cell protein and the protein secreted into media were analysed through a time course using SDS-PAGE.</p> <p style="text-align: justify"><strong>Results: </strong>The accuracy of PHT43-HA1 construct was confirmed by Sequencing and enzymatic digestion analysis. SDS-PAGE results showed that the recombinant HA1 protein was successfully expressed and secreted into medium.</p> <p style="text-align: justify"><strong>Conclusions: </strong><em>B.subtilis</em> is a free endotoxin host which could be a favorite prokaryotic platform for production of the recombinant HA1 protein.The HA1 protein produced here could be considered and evaluated as a candidate vaccine which its immunogenicity potential needs to be assessed in animal models along with proper control groups.</p> باسیلوس سوبتیلیس, بیان ترشحی, آنفولانزا, H5N1 Bacillus subtilis, secretory expression, influenza, H5N1 48 53 http://ijmm.ir/browse.php?a_code=A-10-324-1&slc_lang=fa&sid=1 Moein Aliakbari معین علی اکبری m.aliakbar90@yahoo.com 10031947532846005025 10031947532846005025 No گروه ژنتیک مولکولی، مرکز تحقیقات علوم و فناوری زیستی، دانشگاه صنعتی مالک اشتر، تهران، ایران. Farida Behzadian فریدا بهزادیان fbehzadian@yahoo.com 10031947532846005026 10031947532846005026 Yes Molecular Genetics department, Research Centre for Biosciences and Biotechnology, Malek -Ashtar University, Tehran, Iran گروه ژنتیک مولکولی، مرکز تحقیقات علوم و فناوری زیستی، دانشگاه صنعتی مالک اشتر، تهران، ایران. Ali Asghar Deldar علی اصغر دلدار msc_students@yahoo.com 10031947532846005027 10031947532846005027 No Molecular Genetics department, Research Centre for Biosciences and Biotechnology, Malek -Ashtar University, Tehran, Iran گروه ژنتیک مولکولی، مرکز تحقیقات علوم و فناوری زیستی، دانشگاه صنعتی مالک اشتر، تهران، ایران. Baharak Mahyad بهارک مهیاد baharakmahyad@yahoo.com 10031947532846005028 10031947532846005028 No Nanobiotechnology Department, Faculty of Biological Science, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran گروه نانوبیوتکنولوژی، دانشکده علوم زیستی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران Maryam Bidram مریم بیدرام bidram_m@yahoo.com bidram_m@yahoo.com 10031947532846005029 10031947532846005029 No Molecular Genetics department, Research Centre for Biosciences and Biotechnology, Malek -Ashtar University, Tehran, Iran گروه ژنتیک مولکولی، مرکز تحقیقات علوم و فناوری زیستی، دانشگاه صنعتی مالک اشتر، تهران، ایران. Maedeh bahreinian مائده بحرینیان maedehfz@yahoo.com 10031947532846005030 10031947532846005030 No Molecular Genetics department, Research Centre for Biosciences and Biotechnology, Malek -Ashtar University, Tehran, Iran گروه ژنتیک مولکولی، مرکز تحقیقات علوم و فناوری زیستی، دانشگاه صنعتی مالک اشتر، تهران، ایران.