fa تشخیص ژن های Stx با استفاده از Multiplex PCR در نمونه های بالینی میکروب شناسی مولکولی Molecular Microbiology مقاله پژوهشی Original Research Article <b>زمینه و اهداف: </b>تاکنون روش های مختلف تشخیصی از جمله کشت سلولی، الایزا، RFLP برای شناسایی شیگاتوکسین ها بکار رفته ولی باتوجه به داشتن هزینه زیاد، صرف زمان زیاد وداشتن حساسیت پائین کمتر مورد توجه واقع شده اند دراین تحقیق برای شناسایی ژن stx و از روش Multiplex PCR استفاده شد.<br> <b>مواد و روش کار:</b> تاکنون روش های مختلف تشخیصی از جمله کشت سلولی، الایزا، RFLP برای شناسایی شیگاتوکسین ها بکار رفته ولی باتوجه به داشتن هزینه زیاد، صرف زمان زیاد و داشتن حساسیت پائین کمتر مورد توجه واقع شده اند دراین تحقیق برای شناسایی ژن stx و از روش Multiplex PCR استفاده شد.<br> <b>یافته‌ها:</b> هر جفت پرایمر به طور اختصاصی برای ژن های مورد نظر عمل نموده و قطعات مورد نظر از PCR بدست آمد. ازبین سویه های مثبت 13 سویه حاوی ژن Stx2،4 سویه حاوی ژن Stx1 و 4 سویه حاوی Stx1و Stx2 بوده است. در ژنوم تخلیص شده از دیگر باکتری های گرم منفی تکثیری مربوط به قطعات این توکسین صورت نگرفت. تعیین توالی انجام شده صحت قطعات تکثیر شده رامورد تائید قرار داد. حساسیت واکنش برای شناسایی ژن Stx1،56/1 پیکوگرم در ماکرولیتر وStx2، 08/1 پیکوگرم در ماکرولیتربود. سویه های مثبت همگی به پادزیست های سفکسیم، جنتامایسین، آمیکاسین، سفتریاکسون، نیتروفورانتین حساس بودند.<br> <b>نتیجه‌گیری: </b>این روش یکی از روش های سریع و دقیق برای تشخیص انواع شیگاتوکسین ها می باشد و می توان ازآن درجهت شناسایی ژن های باکتری های تولید کننده شیگا توکسین استفاده نمود. <p dir="ltr"><strong>Background:</strong> Different methods have been used for detection of shiga toxins such as, &nbsp;cell culture, ELISA, and RFPLA. However, all of these methods suffer from high cost, time-consumption and relatively low sensitivity. In this study we used Multiplex PCR method for detection of genes encoding shiga toxins.</p> <p dir="ltr"><strong>Material and Methods:</strong> In this study, 63 clinical samples were obtained from positive cultures of Shigella and <em>E. coli</em> O157, from Bahman 1391 until Ordibehesht 1392 in Mazandaran province. Initial confirmation of shiga toxins producing bacteria was performed by biochemical and serological methods. After DNA extraction, detection of stx1 and stx2 genes was accomplished by multiplex PCR. &nbsp;For confirmation of the PCR amplicon, DNA sequencing was used. Antibiotic sensitivity tests were performed by disk diffusion method.</p> <p dir="ltr"><strong>Results</strong>: &nbsp;Among the positive strains, 13 strains contained stx2 genes, 4 strains contained Stx/Stx1 genes and 4 strains harbored both Stx/Stx1 and Stx2. The DNA extracted from other Gram-negative bacteria was not protected by the relevant parts of these toxins. Sequencing of the amplified fragments indicated the correct toxin sequences.&nbsp; The sensitivity for identification of Stx/Stx1 gene was 1.56 pg/ &micro;l and for Stx2 was 1.08 pg/&micro;l. The toxin positive strains were all sensitive to Cefixime, Gentamicin, Amikacin, Ceftriaxone, and Nitrofurantoin.</p> <p dir="ltr"><strong>Conclusion:</strong> This method is fast and accurate for detection of bacteria producing shiga toxin and can be used to identify different types of shiga toxin.</p> سندرم اورمی همولتیک, Shigella dysenteriae , E.coli O157:H7 , Multiplex PCR Shigella dysenteriae , E.coli O157:H7 , Multiplex PCR 40 50 http://ijmm.ir/browse.php?a_code=A-10-70-1&slc_lang=fa&sid=1 Askari Ahmadpour عسکری احمدپور 100319475328460033962 100319475328460033962 No Applied Microbiology Research Center, Baqiyatallah University of Medical Sciences, Tehran, Iran مرکز تحقیقات میکروبیولوژی کاربردی ، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله (عج) ، تهران ، ایران Jafar Amani جعفر امانی Jafar.amani@gmail.com 100319475328460033963 100319475328460033963 Yes Applied Microbiology Research Center, Baqiyatallah University of Medical Sciences, Tehran, Iran مرکز تحقیقات میکروبیولوژی کاربردی ، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله (عج) ، تهران ، ایران Abbas Ali Imani Fouladi عباسعلی ایمانی فولادی 100319475328460033964 100319475328460033964 No Applied Microbiology Research Center, Baqiyatallah University of Medical Sciences, Tehran, Iran مرکز تحقیقات میکروبیولوژی کاربردی ، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله (عج) ، تهران ، ایران Hamid Sedighian Rad حمید صدیقیان راد 100319475328460033965 100319475328460033965 No Applied Microbiology Research Center, Baqiyatallah University of Medical Sciences, Tehran, Iran مرکز تحقیقات میکروبیولوژی کاربردی ، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله (عج) ، تهران ، ایران Shahram Nazarian شهرام نظریان 100319475328460033966 100319475328460033966 No Department of Biology, Faculty of Basic Sciences, Imam Hossein University, Tehran, Iran گروه زیست شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه امام حسین (ع) ، تهران، ایران