fa مدل‌سازی ایمونوانفورماتیکی، ساخت پلاسمیدهای حامل اپی‌توپ‌های CTL ویروس هپاتیت C و بررسی اولیه ایمنی‌زایی آنها ویروس شناسی پزشکی Medical Virology مقاله پژوهشی Original Research Article <div align="right" style="direction: rtl"><b>زمینه و اهداف:</b> تاثیرات سرکوب کنندگی برخی از کلیدی ترین پروتئین‌های ویروس هپاتیت c بر سیستم ایمنی و جهش سریع ویروس، توجه را به واحدهای ایمونوژن کوچک و پایدار جلب نمود. لذا، واکسن های مولتی اپی توپ به منظور تمرکز پاسخ ایمنی بر این واحدها معرفی شدند. ولی، به دلیل پاسخ ایمنی نسبتاً ضعیف علیه این واکسن ها، افزایش ایمنی زایی نیازمند تمهیدات بیشتری است. این مطالعه با هدف ساخت پلاسمیدهای حامل اپی‌توپ‌های CTL ویروس هپاتیت C به‌روش مدل سازی ایمونوانفورماتیک و تعیین اولیه ایمنی زایی آنها انجام شد.<br><b> روش بررسی: </b>یک اپی توپ H-2D^d و دو اپی‌توپ HLA-A*0201 از نواحی E2، E1 و core در HCV انتخاب شد و با ابزارهای ایمونوانفورماتیک برای بهترین ترادف آنالیز شد. توالی مولتی اپی توپ به روش SOEing-PCR ساخته شد و در ناقل pcDNA3.1+ کلون گردید. توالی های ارتقاء دهنده PADRE، سیگنال رتیکولوم آندوپلاسمیک (ER signal sequence: ERss) و HBsAg به انتهای '5 توالی مولتی اپی توپ متصل شد و بیان پلاسمیدها به صورت in-vitro به روش های RT-PCR، دات-بلات، وسترن-بلات و ایمونوفلورسانس بررسی شد. ارزیابی اولیه ایمنی‌زایی به صورت in-vivo با آزمایش ازدیاد حساسیت تاخیری (Delayed type hypersensitivity: DTH) انجام شد. نتایج با آزمون‌های Non parametric Mann-Whitney و ANOVA ارزیابی شدند. <br><b>یافته ها:</b> نتایج آزمایش‌های in-vitro، بیان پلاسمیدها را تائید کرد و ارزیابی‌های اولیه in-vivo، پردازش و عرضه اپی‌توپ H-2D^d را در موش BALB/c نشان داد. همچنین در حالیکه اثرات ارتقاء پاسخ برای ERss و PADRE نشان داده شدند، اتصال HBsAg تاثیری در افزایش پاسخ نداشت.<br><b>نتیجه گیری:</b> این مطالعه ارزش پیش بینی های ایمونوانفورماتیک و آزمایش DTH را، برای آنالیز اولیه واکسن-های داوطلب مولتی اپی‌توپی در موش‌های BALB/c، نشان داد. نتایج، تائید کافی برای بررسی بیشتر سازه های طراحی شده را در موش ترانس ژنیک (تراریخته) HLA-A2 فراهم می کند. </div> <b>Background and objectives:</b> High mutation rate and immunosuppressive effect of some key proteins of hepatitis C virus (HCV) encouraged researchers to find conserved and small immunogenic units to induce immune responses. Thus epitope-based vaccines were introduced to find out any potential immunogens. However, the relatively weak immune responses against these vaccines require a creation of additional measures. This study aimed to construct plasmids carrying CTL epitope of hepatitis C virus using immunoinformatics modeling method and assessment of their preliminary immunogenicity.<br><b>Materials and Methods:</b> One H-2Dd and two HLA-A*0201-restricted CD8+ T-cell epitopes from E2, E1 and core regions of HCV were selected and immunoinformatically analyzed for optimum sequentiality. The multiepitope sequence was constructed by SOEing PCR and cloned in pcDNA3.1+ vector. PADRE, endoplasmic reticulum signal sequence (ERss) and hepatitis B surface antigen (HBsAg) immuno-enhancer sequences were fused to the 5′ end of multiepitope constructs. In vitro, expression of each plasmid was analyzed by RT-PCR, dot-blot, Western-blot and immunofluorescence techniques. Preliminary in vivo immunogenicity of the construct was assessed by delayed-type hypersensitivity (DTH) response in BALB/c mice.<br><b>Results: </b>In vitro, analyses confirmed the expression of plasmids. Preliminary, in vivo assessments indicated the processing and presentation of the H-2Dd epitope in BALB/c mice. Moreover, although the immunostimulation effects of ERss and PADRE were shown, fusion of HBsAg did not enhance the DTH response. <br><b>Conclusion: </b>This study shows the value of immunoinformatics prediction of hepatitis C virus epitopes as a multiepitope vaccine candidate and DTH assay for preliminary analysis using BALB/c mice. Data obtained, provide enough support for further evaluation of the designed constructs in HLA-A2 transgenic mice. ایمونوانفورماتیک، تقویت کننده ایمنی، مولتی-اپی‌توپ، بیان یوکاریوتی، ویروس هپاتیت C Hepatitis C Virus, Immunoinformatics, Multiepitope vaccine, In vivo expression, Immunostimulant. 30 40 http://ijmm.ir/browse.php?a_code=A-10-1-4&slc_lang=fa&sid=1 Arash Arashkia آرش آرش کیا 100319475328460013 100319475328460013 No بخش هپاتیت و ایدز، بانک ژن نوترکیب، انستیتو پاستور ایران Farzin Rouhvand فرزین روحوند 100319475328460014 100319475328460014 Yes فرزین روحوند، انستیتو پاستور ایران، بخش هپاتیت و ایدز، بانک ژن نوترکیب Arash Memarnejadian آرش معمارنژادیان 100319475328460015 100319475328460015 No Shahadeh Alizadeh شهاده علیزاده 100319475328460016 100319475328460016 No Fatemeh Motevalli فاطمه متولی 100319475328460017 100319475328460017 No Mekania Ebrahimi ملانیا ابراهیمی 100319475328460018 100319475328460018 No