fa تولید گونه‌ی تراریخت استرپتومایسس کلاولی‌جروس واجد ژن cas2 و بررسی افزایش تولید پادزیست در آن با روش بیواسی بیوتکنولوژی میکروبی Microbial Biotechnology مقاله پژوهشی Original Research Article <div align="right" style="direction: rtl"> <b>زمینه و اهداف:</b> <i>استرپتومایسس کلاولی‌جروس</i> تولیدکننده‌ی پادزیست‌ کلاولانیک اسید است که به‌طور گسترده‌ای همراه با سایر پادزیست‌های قوی و حساس به β لاکتاماز استفاده می‌گردد. ژن cas2 در دسته ژنی کلاولانیک اسید قرارگرفته و در تنظیم بیوسنتز کلاولانیک اسید نقش دارد. <br>مواد و روش کار: سازه (کانسترکت) نوترکیب pMTcas2 حاوی ژن cas2 از دانشگاه اصفهان تهیه گردید. با استفاده از روش لیز قلیایی پلاسمید نوترکیب از سویه‌ی <i>استرپتومایسس لیویدنس</i> استخراج گردید. کانسترکت نوترکیب با استفاده از روش پلی‌اتیلن گلیکول به پروتوپلاست‌های تهیه‌شده از باکتری <i>استرپتومایسس کلاولی‌جروس</i> ترانسفورم گردید. به‌منظور تأیید ترانسفورماسیون از روش‌های استخراج پلاسمید و PCR با استفاده از پرایمر های اختصاصی cas2 استفاده شد. درنهایت به‌منظور بررسی نحوه‌ی تأثیر ژن cas2 اضافه‌شده در تولید پادزیست از روش بیواسی استفاده گردید. <br><b>یافته‌ها:</b> ساختار پلاسمید نوترکیب پس از استخراج با روش هضم آنزیمی تأیید شد. پس از ترانسفورماسیون کلنی‌های تک بر روی محیط بازیابی پروتوپلاست حاوی پادزیست اسپورهای خاکستری‌رنگ بر روی آن شکل گرفت. استخراج پلاسمید از سویه‌ی ترانسفورم شده انجام‌شده و ترانسفورماسیون با انجام PCR تأیید گردید. مطالعات بایواسی نشان داد که حضور پلاسمید نوترکیب سبب افزایش 1/4 برابری تولید کلاولانیک اسید در سویه‌ی <i>استرپتومایسس کلاولی‌جروس</i> گردیده است. <br><b>نتیجه‌گیری:</b> با انجام روش بیواسی و تجزیه‌وتحلیل یافته‌ها مشخص شد که حضور پلاسمید نوترکیب واجد ژن cas2 سبب افزایش تولید کلاولانیک اسید در سویه‌ی <i>استرپتومایسس کلاولی‌جروس</i> گردیده است. افزایش تولید کلاولانیک اسید می‌تواند گامی مؤثر در روند کاهش هزینه‌های تولید داروهای پرمصرف وابسته به آن گردد. </div> <b>Background:</b> Streptomyces clavuligerus is one of the most important strain that produce clavulanic acid that wildly used in combination of strong but sensitive to β-lactamase antibiotics in clinics. The cas2 is one of the important genes in the biosynthesis pathway of clavulanic acid. <br><b>Materials and Methods:</b> The recombinant construct pMTcas2 which contain cas2 gene is obtained from Isfahan University. Recombinant plasmid extracts from streptomyces lividans and confirm by enzyme digestion. The streptomyces clavuligerus protoplast was prepared and transformation was done by using polyethylene glycol. Transformation was confirmed by plasmid extraction and PCR using cas2 specific primers. Finally, bioassay method was used to survey the effect of extra copy of cas2 on clavulanic acid production. <br> <b>Result:</b> Plasmid extraction was initially carried out and the structure of plasmid was confirmed by digestion. The typical white colony was seen on protoplast recovery culture containing thiostrepton antibiotic and gray spores were detected after one week. Plasmid extraction was done from transformed strain and transformation was confirmed by PCR. The results of the bioassay show that amplification of the cas2 gene in multicopy plasmids resulted in a 4.1 fold increase in clavulanic acid production. <br><b>Conclusion:</b> The bioassay was done and the diameters of zone of inhibition in control and sample were compared. The results of the bioassay show that amplification of the cas2 gene in multicopy plasmids resulted in a 4.1 fold increase in clavulanic acid production. Overproduction of clavulanic acid decreases the cost of its dependent drug production. استرپتومایسس کلاولی‌جروس, کلاولانیک اسید, بایواسی, پلاسمید pMTcas2, ژن cas2 Streptomyces clavuligerus, clavulanic acid, Bioassay, pMTcas2 plasmid, cas2 gene. 30 35 http://ijmm.ir/browse.php?a_code=A-10-73-1&slc_lang=fa&sid=1 Zohreh Hojati زهره حجتی نجف آبادی Z.hojati@sci.ui.ac.ir 10031947532846002168 10031947532846002168 Yes University of Isfahan دانشگاه اصفهان Sedighe Givi صدیقه گیوی S_givi@yahoo.com 10031947532846002169 10031947532846002169 No University of Isfahan دانشگاه اصفهان Maryam Kay مریم کی maryam_kay2001@yahoo.com 10031947532846002170 10031947532846002170 No University of Isfahan دانشگاه اصفهان