fa تولید پروتئین نوترکیب Tax ویروس HTLV 1 در سویه باکتریایی Rosetta DE3 ویروس شناسی پزشکی Medical Virology مقاله پژوهشی Original Research Article <div align="right" style="direction: rtl"> <b>زمینه و اهداف:</b>HTLV1 اولین رتروویروس انسانی شناخته شده است که در انسان تولید بیماری میکند. عمده فیزیوپاتولوژی بیماری های مربوط به HTLV1 به خصوصیات پروتین Tax این ویروس مربوط می شود. استفاده از گونه های جهش یافته پروتین Tax در کنار دارو های تنظیم کننده سیستم ایمنی می تواند به عنوان تعدیل کننده پاسخ های ایمنی قوی در طراحی واکسن بکار گرفته شود. این پاسخ های ایمنی مضر،باعث بیماری HAM-TSP میشود و تعدیل انها راه امیدی را برای درمان بیماران در پیش رو قرار می دهد. به این علت تولید پروتئین نوترکیب Tax هدف این مطالعه قرار گرفت. <br><b>روش بررسی: </b>توالی کد کننده پروتئین Tax (حاوی جهش R222K) موجوددر وکتور (+)pcDNA3.1 توسط برش با انزیم های BamHI و Xhol خارج شده و در وکتور بیانی (+)Pet32a با همین جایگاه های برش در سویه E.coli DH5a کلون گردید. وکتور نوترکیب پس از تایید صحت کلونینگ توسط فرایند های هضم انزیمی، colony PCR و تعیین توالی ژن کلون شده، به میزبان بیانی( DE3(E.coli Rosetta منتقل و القا بیان صورت گرفت.سپس بیان پروتتین با انالیز SDS-PAGE و وسترن بلات بررسی شد. در نهایت خصلت آنتی ژنیسیته پروتین نوترکیب از طریق وسترن بلات با سرم افراد بیمار تایید گردید. <br><b>یافته ها:</b> حضور باند پروتینی Taxدر بررسی های مربوط به SDS-PAGE و وسترن تایید شد. وسترن بلات پروتین نوترکیب با سرم افراد بیمار،حضور باند مربوط به پروتین Tax را نشان داد.<br><b>نتیجه گیری:</b> پروتین به دست امده می تواند به عنوان انتی ژن نوترکیب ویروسی بیان شده و توسط انتی بادی بیماران به درستی شناسایی گردید. </div> <b>Background and objectives:</b> HTLV-1 is the first declared Retrovirus that cause disease in human. physio pathology of HTLV-1 related diseases ,was linked with tax protein characteristic.Use of mutant Tax proteins accompanied by immune regulator drugs could help treating HTLV1 Associated Myelopathy patients as a modulator of potent immune response against this viral protein.Since Tax protein is not commercially available, produce of recombinant Tax protein was targeted for this study. <br><b>Matherial and methods:</b> Coding sequence of Tax protein (contain R222K mutant) in the pcDNA3.1(+) digested with BamHI and XhoI restriction enzymes then removed and then inserted into the expression vector pET32a(+) within the same cutting site s and cloned into Ecoli DH5α. Recombinant vector was confirmed with enzyme digestive processes,colony PCR and sequencing of cloned gene and then expression vector. E-coli Rosetta (DE3) was transformed with the recombinant plasmid and the expression was induced. The expression of protein was assayed with SDS-PAGE and Western blot. Using monoclonal antibodies against Tax and 5His epitope. Finally antigenic characteristic of the recombinant protein was evaluated by wester n blotting against patient serums. <br><b>Results:</b> presence of Tax protein band in the recording of SDS-PAGE and Westernblot was confirmed.western blotting the recombinant protein with patient sera showed the band related to Tax protein. <br><b>Conclusion: </b> The expression recombinant protein is well produced and could be detected by patients' sera,making it eligible to be used as a recombinant viral antigen for future purposes. HTLV1،Tax ،کلونینگ، SDS-PAGE،وسترن بلات HTLV-1,Tax,cloning,SDS-PAGE,Western blot 43 52 http://ijmm.ir/browse.php?a_code=A-10-1-152&slc_lang=fa&sid=1 Samaneh Saffar سمانه صفار 1003194753284600836 1003194753284600836 No Department of Clinical Biochemistry, School of Medicine, Tehran University of Medical Science. گروه بیوشیمی بالینی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی تهران Majid Golkar مجید گل کار 1003194753284600837 1003194753284600837 No Department of Parasitology, Pasteure Institute of Iran, Tehran, Iran Mahdi Amminian مهدی امینیان 1003194753284600838 1003194753284600838 No Department of Clinical Biochemistry, School of Medicine, Tehran University of Medical Science Hesam Mirshahabi حسام میرشهابی 1003194753284600839 1003194753284600839 No Department of Virology, School of Medicine, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran. Houshang Rafatpanah هوشنگ رفعت پناه 1003194753284600840 1003194753284600840 No Department of Immunology, Mashhad University of Medical Science. Taghi Golmohammadi تقی گل محمدی 1003194753284600841 1003194753284600841 No Department of Clinical Biochemistry, School of Medicine, Tehran University of Medical Science Keihan Azadmanesh کیهان آزادمنش azadmanesh@pasteur.ac.ir 1003194753284600842 1003194753284600842 Yes Department of Virology, Pasteure Institute of Iran, Tehran, Iran بخش ویروس شناسی، انیستیتو پاستور ایران