fa شناسایی آلودگی مایکوپلاسما اوراله در کشت‌های سلولی با استفاده از روش PCR میکروب شناسی مولکولی Molecular Microbiology مقاله پژوهشی Original Research Article <div align="right" style="direction: rtl"><strong>زمینه و اهداف:</strong> آلودگی کشت‌های سلولی توسط مایکوپلاسماها مسئله‌ای مهم در فناوری کشت سلولی محسوب می‌شود. میزان بالایی از کشت‌های سلولی آلوده به <em>مایکوپلاسما اوراله</em> هستند که عموماً توسط کارکنان آزمایشگاه صورت می‌گیرد. بنابراین شناسایی و تشخیص آن به‌منظور جلوگیری از زیان‌های مهم به دنبال آلودگی با این ریزاندامگان‌ها(Microorganisms) بسیار حائز اهمیت است. هدف این مطالعه راه‌اندازی و به‌کارگیری روش واکنش زنجیره پلی‌مراز به‌عنوان روشی سریع، حساس و اختصاصی برای تشخیص <em>مایکوپلاسما اوراله</em> در آلودگی‌های کشت سلولی و فراورده‌های زیست‌شناختی است.</div> <div align="right" style="direction: rtl"><strong>مواد و روش کار:</strong> با به‌کارگیری سویه استاندارد<em> مایکوپلاسما اوراله</em>، تست PCR با استفاده از جفت پرایمرهای اختصاصی گونه <em>مایکوپلاسما اوراله</em> در ناحیه ژن 16S rRNA راه‌اندازی گردید. 62 نمونه‌ کشت سلولی مشکوک به آلودگی مایکوپلاسما ارجاعی به آزمایشگاه رفرنس مایکوپلاسما موسسه رازی پس از استخراجDNA مورد آزمایش PCR قرار گرفتند.</div> <div align="right" style="direction: rtl"><strong>یافته‌ها:</strong> تست PCR راه‌اندازی‌شده باDNA <em>مایکوپلاسما اوراله</em> دارای واکنش مثبت بود، در صورتی که با سایر گونه‌های مایکوپلاسما نظیر: <em>مایکوپلاسما سالیواریوم، مایکوپلاسما هیورینیس، مایکوپلاسما آرژنینی، آکولوپلاسما لایدلاوی، مایکوپلاسما فرمنتانس، مایکوپلاسما پنومونیه</em> و همچنین با <em>اشریشیا کلی و استرپتوکوکوس پنومونیه</em> واکنش نداد که نشان‌دهنده ویژگی بالای این تست بود. از تعداد 62 نمونه کشت سلولی 42 نمونه از نظر جنس مایکوپلاسما و 8 نمونه از نظر گونه <em>مایکوپلاسما اوراله</em> مثبت بودند.</div> <div align="right" style="direction: rtl"><strong>نتیجه‌گیری:</strong> با توجه به میزان بالای آلودگی کشت‌های سلولی به<em> مایکوپلاسما اوراله </em>و ویژگی بالای تست PCR راه‌اندازی‌شده در این مطالعه، به‌کارگیری این روش در تشخیص آلودگی کشت‌های سلولی در آزمایشگاه‌های کشت سلولی توصیه می‌گردد.</div> <b>Background and objectives:</b> Mycoplasma contamination is one of the major concerns in cell culture technology. They can cause undesirable effects on cell cultures. Higher rate of cell culture contaminations by <i>Mycoplasma orale</i> is transmitted by laboratory personnel. Thus, the identification and rapid diagnosis, in controlling and prevention of this contamination are important. The aim of this study was to investigate the detection of <i>Mycoplasma orale</i> using a rapid, sensitive and specific polymerase chain reaction (PCR) method in cell cultures.<br><b>Materials and Methods:</b> A 16S rRNA-based Mycoplasma genus and specific primers PCR method for <i>Mycoplasma orale</i> were developed. The sensitivity and specificity of this method were determined.The PCR test was used after the cultured isolates were DNA extracted.<br><b>Results:</b> A total of 62 cell cultures sample were sent to the Mycoplasma Reference Laboratory at Razi Institute in Karaj, for detection of mycoplasma contamination. The specific PCR method reacted positively for the M. orale whereas no response was observed for, other species such as <i>Mycoplasma S</i>., <i>mycoplasma H</i>.,<i>Mycoplasma arginine</i>, <i>mycoplasma L</i>.,<i>mycoplasma F.</i>, <i>Mycoplasma pneumoniae</i>, which showed the high specificity of this test. 42 out of 62 samples (67%) were scored positive by Mycoplasma genus. From these 42 samples, 8 (19%) samples were reacted positively in the <i>M. orale</i> specific PCR method. <br><b>Conclusion:</b> The obtained results are shown that PCR technique is a suitable and valuable tool for the detection of high percentage of mycoplasma contamination in cell cultures. So a large number of samples can be processed more rapidly during less than 24 hours . In conclusion, the PCR method is a rapid process with the high sensitivity, specificity and low cost. Therefore, it can be used routinely in cell culture laboratories. مایکوپلاسما اوراله، PCR، شناسایی، کشت سلول Mycoplasma orale PCR, Contamination, Detection, Cell culture 7 14 http://ijmm.ir/browse.php?a_code=A-10-1-147&slc_lang=fa&sid=1 Azadeh Fazli آزاده فضلی 10031947532846001079 10031947532846001079 No Department of Microbiology, Islamic Azad University, Karaj, Iran دانشگاه آزاد اسلامی واحد کرج، ایران Seyed Ali Pourbakhsh سید علی پور بخش a.pourbakhsh@rvsri.ac.ir 10031947532846001080 10031947532846001080 Yes Mycoplasma Reference Laboratory, Razi Vaccine and Serum Research Institute, Karaj, Iran آزمایشگاه رفرنس مایکوپلاسما، مؤسسه تحقیقات واکسن و سرم‌سازی رازی کرج، ایران Esmaeil Asli اسماعیل اصلی 10031947532846001081 10031947532846001081 No Mycoplasma Reference Laboratory, Razi Vaccine and Serum Research Institute, Karaj, Iran آزمایشگاه رفرنس مایکوپلاسما، مؤسسه تحقیقات واکسن و سرم‌سازی رازی کرج، ایران Azam Hadadi اعظم حدادی 10031947532846001082 10031947532846001082 No Department of Microbiology, Islamic Azad University, Karaj, Iran گروه میکروبیولوژی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد کرج، کرج، ایران