Iranian Journal of Medical Microbiology

en PCR-RFLP پلاسمیدهای کوکسیلا بورنتی جدا شده از نمونه‌های شیر خام در ایران PCR-RFLP of Coxiella burnetii Plasmids Isolated from Raw Milk Samples in Iran بیماری های مشترک انسان - دام Zoonoses Research مقاله پژوهشی Original Research Article زمینه و اهداف:  با توجه به حضور توالی های ژنی منحصر به فرد در پلاسمید اختصاصی QpH۱ مختص کوکسیلا بورنتی، روش‌های متعددی برای تمایز جدایه های کوکسیلا بورنتی بر اساس این پلاسمید جهت تفریق فرم حاد از فرم مزمن بیماری تب کیو در انسان و حیوانات استفاده شده است. بنابراین هدف اصلی این مطالعه بررسی تابلوی قطعات اسید نوکلئیک ناشی از برش آنزیمی در پلاسمید QpH۱ جداشده از شیر گاو و گاومیش با روش واکنش زنجیره ای پلیمراز آشیانه ای می باشد. مواد و روش کار:  تعداد ۸۶ جدایه کوکسیلا بورنتی حاوی ژن پلاسمیدی QpH۱ که با روش Nested-PCR طی سال ۲۰۱۸ تایید شده بودند به منظور تعیین تابلوی RFLP پلاسمید QpH۱ مورد استفاده قرار گرفت. پلاسمید ها ابتدا با کیت استخراج شدند و سپس تحت تاثیر آنزیم محدود کننده Hph۱ قرار گرفتند. تعداد ۴ نمونه اسید نوکلئیک جهت تعیین توالی با پرایمر ژن IS۱۱۱۱ به شرکت پیشگام ارسال گردید. یافته ها:  نتایج آزمایش PCR-RFLP نشان داد که همه نمونه های پلاسمیدی یک الگوی مشابه دو قطعه ای را تحت تاثیر آنزیم Hph۱ نشان دادند. همچنین نتایج تعیین توالی اسید نوکلئیک تمامی ۴ نمونه ارسالی نشان داد که کوکسیلا بورنتی (Nine Mile RSA۴۹۳ strain) می باشند. نتیجه‌گیری:  نتایج نشان داد که هیچ تفاوتی در الگوهای RFLP بر روی پلاسمید QpH۱ کوکسیلا بورنتی جداشده از شیر گاو و گاومیش وجود ندارد. بنابراین تمام جدایه ها از نظر ژنتیکی یکسان هستند و عفونت در حیوانات می تواند از یک سویه کوکسیلا بورنتی (سویه Nine Mile RSA۴۹۳) منشاء گرفته باشند. Background and Aim: Several methods have been employed to identify Coxiella burnetii isolates based on the specific Coxiella burnetii QpH1 plasmid to distinguish the acute form from the chronic form of Q fever disease in humans and animals owing to the presence of unique gene sequences in this plasmid. Therefore, the present study aimed to investigate the panel of nucleic acid fragments resulting from the enzymatic cleavage in the QpH1 plasmid isolated from cow and buffalo milk by nested polymerase chain reaction (Nested-PCR). Materials and Methods: A total of 86 isolates of Coxiella burnetii QpH1 plasmid, which were confirmed by the Nested-PCR method in 2018, were used to determine the RFLP panel of the QpH1 plasmid. Plasmids were first extracted with the kit and were then affected by the Hph1 restriction enzyme. Additionally, 4 nucleic acid samples were sent to Pishgam Company for sequencing with the IS1111 gene primer. Results: Based on the results of the PCR-RFLP test, all plasmid samples showed a similar two-fragment pattern under the influence of Hph1. The results of the nucleic acid sequencing of all 4 samples indicated that they had a Coxiella burnetii type (Nine Mile RSA493 strain). Conclusion: RFLP patterns exhibited no difference on the Coxiella burnetii QpH1 plasmid isolated from cow and buffalo milk. Hence, all isolates were genetically identical, and the infection in animals could originate from one Coxiella burnetii strain (Nine Mile RSA493 strain). <div></div> گاومیش, گاو, PCR-RFLP, کوکسیلا بورنتی, پلاسمید Buffalo, Cattle, Coxiell burnetii, plasmid, PCR-RFLP 66 72 http://ijmm.ir/browse.php?a_code=A-10-1304-2&slc_lang=en&sid=1 Peyman Khademi پیمان خادمی p.khademi@urmia.ac.ir 100319475328460023826 100319475328460023826 No Department of Microbiology, Faculty of Veterinary Medicine, Urmia University, Urmia, Iran دانشجو دکتری، گروه میکروب شناسی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه ارومیه، ارومیه، ایران Abdulghaffar Ownagh عبدالغفار اونق ownagh@yahoo.com 100319475328460023827 100319475328460023827 Yes Department of Microbiology, Faculty of Veterinary Medicine, Urmia University, Urmia, Iran استاد، گروه میکروب شناسی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه ارومیه، ارومیه، ایران Karim Mardani کریم مردانی kmardani@yahoo.com 100319475328460023828 100319475328460023828 No Department of Food Hygiene and Quality Control, Faculty of Veterinary Medicine, Urmia University, Urmia, Iran استاد، گروه بهداشت مواد غذایی و کنترل کیفی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه ارومیه، ارومیه، ایران Mohammad Khalili محمد خلیلی mdkhalili1@yahoo.com 100319475328460023829 100319475328460023829 No Department of Pathobiology, Faculty of Veterinary Medicine, Shahid Bahonar University of Kerman, Kerman, Iran استاد، گروه پاتوبیولوژی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه شهید باهنر کرمان، کرمان، ایران