fa فرآیند جدا سازی دو ژن wsp و 16sr RNA باکتری داخل سلولی Wolbachia pipientis در پشه خاکی فلبوتوموس پاپاناسی ناقل بیماری لیشمانیوز جلدی نوع روستائی ایران ویروس شناسی پزشکی Medical Virology مقاله پژوهشی Original Research Article <div align="right" style="direction: rtl"> زمینه و اهداف: باکتری داخل سلولی Wolbachia pipientis از جمله باکتری های ریکتزیایی است. ژن این باکتری در حشرات به صورت مادرزادی به ارث می رسد و می تواند عامل ایجاد ناسازگاری های سیتوپلاسمی باشد. این باکتری به طور بالقوه می تواند در دستکاری های ژنتیکی جمعیت و کنترل ناقلین برخی بیماری ها مفید باشد. در این مطالعه W. pipientis با استفاده از روشPCR در پشه خاکی گونه فلبوتوموس پاپاتاسی، ناقل بیماری لیشمانیوز جلدی نوع روستایی ایران، ردیابی و مشخص شد. برای این منظور از ژن ( RNAریبوزومی (16 s rDNA و ژن پروتئین سطحی ولباکیا (wsp gene) استفاده گردید. <br><b>روش بررسی:</b> برای تشخـیص و ردیابی باکتـری W. pipientis از ژن RNAریبوزومـی( 16 s rDNA) و ژن پروتئـین سطـحی ولباکیا (wsp gene) اسـتفاده شد. با استفاده از روش PCR، از دو جفت پـرایمـر اختـصاصی (wsp 691R/81F) و (16S 994R/99F) استفاده گردید. توالی های بدست آمده با نرم افزار Sequencher TM v.3.1 ویراستاری و مقایسه شدند. جهت مشخص کردن هاپلوتایپ های W. pipientis و آنالیز و ترسیم درخت فیلوژنتیکی آن از نرم افزار PAUP) Phylogenetic Analysis Using Parsimony) استفاده شد. <br><b>یافته ها:</b> از 165 عدد پشه خاکی فلبوتوموس پاپاتاسی، قطعه ژنی wsp در (%75.2) 124 و قطعه ژنی 16srDNA در (%74.5) 123، پشه خاکی تکثیر و تعیین توالی شد. برای هر ژن فقط یک هاپلوتایپ منفرد یافت شد. <br><b>نتیجه گیری:</b> استفاده از یک سویه ژنتیکی تعریف شده برای W. pipientis در استفاده از ترانسژن ها، امکان انتقالLeishmania major را توسط پشه خاکی، به منظور جلوگیری از انتشار آن، افزایش می دهد. سویه های ژنتیکی این باکتری می توانند فنوتیپ ناسازگاری سیتوپلاسمی را در جمعیت پشه خاکی گونه فلبوتوموس پاپاتاسی نشان دهند. با توجه به وجود آلودگی طبیعی ولباکیا در پشه خاکی ها و ناسازگاری سیتوپلاسمی، امکان استفاده از ولباکیا به عنوان ترانسژن ژن های هدف در بین جمعیت پشه خاکی ها مورد نظر، می توان جمعیت ناقلین را تحت کنترل در آورد و با گسترش بیماری لیشمانیوز مقابله کرد </div> <b>Background and Objective:</b> The intracellular<i> </i>Wolbachia pipientisis a Rickettsia-like bacterium. The gene of <i>W. pipientisis</i> usually congenitally-inherited in insects and can cause cytoplasmic incompatibility (CI), which is potentially useful for driving genes through populations. In present study, <i>W. pipientis </i>has been detected in Phlebotomus papatasi, the vector of rural cutaneous leishmaniosis in Iran by using PCR to amplify fragments either of the 16S ribosomal RNAgene (16S rRNA) or of the major Wolbachiasurface protein gene wsp.<br><b>Materials and Methods:</b> sand flies were screened for the presence of W. pipientis by PCR using the nonstrain specific primers wsp81F with 691R and 16S 99F with 994R. The sequences obtained were edited and aligned using Sequencher TM v. 3.1 to identify W. pipient ishaplo types, which were analysed phylogenetically using PAUP* software. <br><b>Results:</b> from 165 Individual wild-caught P. papatasi from Iran, the gene fragment of wspwas found in 124 cases (75.2%), and 16s RNA gene fragment was identified in 123 cases (74.5%). Only one haplotype was obtained for each gene, from which it is inferred that only one A-group genetic strain of W. pipientisoccurs in P. papatasithroughout much of this sandfly's range. <br><b>Conclusion: </b>based on the results of this study there is possibility of using just one genetically modified strain of W. pipientisto drive through wild sand fly populations transgenes for intervening in the transmission of L. major by P. papatasi. This genetically modified strain would have to show a CI phenotype in P. papatasi, in order to be spread quickly through wild sand fly populations. Due to natural infection of Wolbachia in sand flies and for their behavior of Cytoplasmic Incompatibility(CI) , Wolbachia can be used as a transferring gene in populations of sand flies to control Leishmaniasis Wolbachia pipientis؛ فلبوتوموس پاپاتاسی، ژن RNA ریبوزومی (16 s rRNA)، ژن پروتئین سطحی (wsp gene)، ایران 53 60 http://ijmm.ir/browse.php?a_code=A-10-1-142&slc_lang=fa&sid=1 Parviz Parvizi پرویز پرویزی parp@pasteur.ac.ir 10031947532846001319 10031947532846001319 Yes Molecular Systematics Laboratoy, Pasteur Institute of Iran,Tehran,Iran. آزمایشگاه سیستماتیک مولکولی، انستیتو پاستور ایران - تهران، 1316943551، ایران Farzaneh Fardid فرزانه فردید 10031947532846001320 10031947532846001320 No Department of Microbiology, Islamic Azad University of Qom,Qom,Iran. Department of Microbiology, Islamic Azad University of Qom,Qom,Iran. Aref Amirkhani عارف امیرخانی 10031947532846001321 10031947532846001321 No Department of Epidemiology, Pasteur Institute of Iran,Tehran,Iran. Department of Epidemiology, Pasteur Institute of Iran,Tehran,Iran.