Iranian Journal of Medical Microbiology

en طراحی روش واکنش زنجیره پلیمراز جهت تشخیص باکتری Bartonella quintana از بیماران مبتلا به اندوکاریت کشت خون منفی Molecular Detection of Infectious Endocarditis (Bartonella quintana) Bacteria from Selected Military Hospitals باکتری شناسی پزشکی Medical Bacteriology مقاله پژوهشی Original Research Article <div style="text-align: justify;">زمینه و اهداف:  Bartonella quintana باکتری گرم منفی است که ایجاد کننده بیماری Trench fever است. باکتری می‌تواند از عوامل ایجاد کننده اندوکاردیت باشد. اندوکاردیت باکتریایی بیماری خطرناک و گاه کشنده‌ای است. تشخیص به موقع و سریع باکتری با روش‌های مولکولی مانند PCR حائز اهمیت می‌باشد. در این مطالعه، آلودگی موارد مبتلا به باکتری B. quintana با روش‌ PCR مورد بررسی قرار گرفت. مواد و روش کار:  نمونه‌های اندوکاردیت کشت منفی از بیماران جمع‌‌آوری شد. PCR، انجام گرفت و ژنftsz  تکثیر و جداسازی شد. نمونه‌هایی اندوکاردیت تعیین توالی شدند. نمونه کنترل مثبت سنتز شد و درون وکتور PUC ۱۸ آماده گردید. تعیین ویژگی برای باکتری‌ها انجام گرفت و ژن کلون گردید. جهت تایید کلونینگ، کلنی PCR انجام گرفت. پلاسمیدها، استخراج شدند و در نهایت حساسیت و حد تشخیص تعیین گردید. یافته ها:  تعیین توالی نشان داد که نمونه‌ها مربوط به باکتری‌های کلبیسلا پنومونیه بودند. به منظور بررسی ویژگی، هیچ باندی روی ژل آگارز مشاهده نگردید. این موضوع نشان‌داد که پرایمرهای طراحی شده فقط به باکتری مورد نظر متصل می‌شود. آخرین رقت پلاسمید با غلظت ng/µl۷۸۰ که باند قابل تشخیصی را در روی ژل ایجاد نمود، ۷-۱۰ و کمترین تعداد کپی قابل تشخیص در PCR  برابر ۲۴ کپی محاسبه گردید. نتیجه‌گیری:  در سال‌های اخیر تلاش زیادی برای توسعه روش‌های مولکولی سریع و خاص برای تشخیص بارتونلا انجام شده است. به نظر می‌رسد روش PCR ابزار مفیدی است که ممکن است زمان تشخیص B. quintana را در طول عفونت‌های سیستمیک، مانند اندوکاریت کاهش دهد.</div> Background and Aim: Bartonella quintana is an aerobic, gram-negative, rod-shaped, and polar bacterium. Detection of this bacterium is done through blood culture in an agar medium, and the longtime of detection by culture has made molecular methods such as PCR important for more accurate and faster detection. Materials and Methods: For this reason, 100 cultured negative endocarditis specimens were collected in this study. DNA extraction was performed from B. quintana, and the concentration and quality of the obtained DNA were measured. PCR reaction was performed on the genome of negative control samples. To clone a portion of the amplified gene in PUC 18 plasmid, the PCR product was first purified. After ligation, JM107 E. coli susceptible to calcium chloride was used. Transformed bacteria were cultured on LB Broth medium containing Ampicillin antibiotic. Then 2 to 3 white colonies were selected, and PCR was performed. Plasmid extraction was performed after confirming the presence of recombinant and inserted plasmids. Results: The last dilution of PUC18 plasmid for B. quintana with an initial concentration of 780 ng/µL, which formed a detectable band on the gel, was calculated to be 10-7, and the minimum number of detectable copies in a 25 μL PCR reaction equal to 24 copies. . In quantitative DNA analysis, its amount was calculated between 1.69 and 1.8. Conclusion: The collected samples were then examined for the presence of B. quintana in patients. Of the 60 samples collected, none were positive. <div></div> بارتونلا کوینتانا, باکتری هوازی گرم منفی, تشخیص مولکولی, PCR Bartonella quintana, Gram-negative aerobic bacteria, Molecular detection, PCR 457 464 http://ijmm.ir/browse.php?a_code=A-10-1936-3&slc_lang=en&sid=1 Ashkan Dirbazian اشکان دیربازیان ghadir02017@gmail.com 100319475328460021916 100319475328460021916 No Infectious Diseases Research Center, AJA University of Medical Sciences, Tehran, Iran مرکز تحقیقات بیماری‌های عفونی، دانشگاه علوم پزشکی آجا، تهران، ایران Mojtaba Sadeghimanesh مجتبی صادقی منش Mojtabasm80@gmail.com 100319475328460021917 100319475328460021917 No Infectious Diseases Research Center, AJA University of Medical Sciences, Tehran, Iran مرکز تحقیقات بیماری‌های عفونی، دانشگاه علوم پزشکی آجا، تهران، ایران Abbas Morovvati عباس مروتی abbasmorovvati@gmail.com 100319475328460021918 100319475328460021918 No Infectious Diseases Research Center, AJA University of Medical Sciences, Tehran, Iran مرکز تحقیقات بیماری‌های عفونی، دانشگاه علوم پزشکی آجا، تهران، ایران Mohammad Soleimani محمد سلیمانی Soleimanidor@yahoo.com 100319475328460021919 0000000282709499 Yes Department of Microbiology, Faculty of Medicine, AJA University of Medical Sciences, Tehran, Iran گروه میکروبیولوژی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی آجا، تهران، ایران Rohollah Mirjani روح اله میرجانی Mirjani.r@gmail.com 100319475328460021920 100319475328460021920 No Department of Genetics and Advanced Medical Technology, Faculty of Medicine, AJA University of Medical Sciences, Tehran, Iran گروه ژنتیک و فناوری پیشرفته پزشکی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی آجا، تهران، ایران Seyyed Hossein Mousavi سید حسین موسوی dr.shmusavi@yahoo.com 100319475328460021921 100319475328460021921 No Department of Cardiology, School of Medicine, AJA University of Medical Sciences, Tehran, Iran گروه قلب و عروق، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی آجا، تهران، ایران