fa تشخیص سریع مولکولی لیستریامنوسیتوژنز به روش PCR با استفاده از ژن hlyA باکتری شناسی پزشکی Medical Bacteriology مقاله پژوهشی Original Research Article <div align="right" style="direction: rtl"> <b>زمینه و اهداف:</b> در حال حاضر روش استاندارد برای تشخیص<i> لیستریا مونوسیتوژنز</i> کشت می باشد. به علت این که در خوراک دام از آنتی بیوتیک استفاده می شود و این باکتری داخل سلولی می باشد حساسیت کشت به شدت کاهش می یابد. به علاوه، تشخیص با این روش بیشتر از 36 ساعت طول می کشد. لذا، دست یابی به آزمونی که بتواند در هر شرایطی وجود <i>لیستریا مونوسیتوژنز</i> را در نمونه بالینی نشان دهد، ارزشمند می باشد. هدف این مطالعه تشخیص سریع مولکولی <i>لیستریا مونوسیتوژنز</i> به روش PCR با استفاده از ژن hlyA بود. <br><b>روش بررسی:</b> ژن hlyA به عنوان ژن اختصاصی برای شناسایی <i>لیستریا مونوسیتوژنز </i>انتخاب گردید. به منظور بهینه سازی آزمایش از سویه استاندارد <i>لیستریا مونوسیتوژنز</i> PTCC: 1163 استفاده شد. برای بررسی اختصاصیت از باکتری های <i>سالمونلا تیفی</i> PTCC: 1609، <i>لیستریا مونوسیتوژنز</i> PTCC: 1163 و <i>اشریشیاکلی</i> ATCC: 35218، استفاده شد. برای استخراج DNA از روش فنل - کلروفرم استفاده شد و محصول 210bp پس از الکتروفورز در ژل آگارز %1 در دمای اتاق با رنگ اتیدیوم بروماید رنگ آمیزی و مورد شناسایی قرار گرفت. <br><b>یافته ها: </b>نتایج این مطالعه نشان داد که سویه استاندارد محصول مورد نظر را تولید می نماید. در حقیقت، جفت پرایمر انتخاب شده محصولی در اندازه 210bp تولید می کند. آزمایش اختصاصیت نشان داد که روش حاضر با هیچ یک از باکتری های غیرهدف واکنش نشان نمی دهد. بررسی حساسیت نشان داد که حد نهایی تشخیص DNA لیستریا مونوسیتوژنز در این روش 500fg می باشد. <br><b>نتیجه گیری:</b> نتایج بهینه سازی نشان داد که روش PCR به کار رفته در این مطالعه از سرعت، حساسیت و اختصاصیت لازم برخوردار است و نتیجه نهایی در کمتر از سه ساعت بدست می آید. به کارگیری این روش در آزمایشگاه ها تشخیص لیستریا مونوسیتوژنز را امکان پذیر می نماید </div> <b>Background and Objectives:</b> Currently the conventional method for the diagnosis of <i>Listeria monocytogenes</i> is culture method. However, the isolation rate is reduced in culture due to animals' food which is contains antibiotics. Besides, culture method is time consuming and takes more than 36 hrs. So more precise and rapid technique is needed. The aim of this study was application of PCR technique based on <i>hlyA</i> gene fragment for rapid detection of <i>Listeria monocytogenes</i> in clinical samples. <br><b>Materials and Methods:</b> <i>hlyA </i>gene was selected as a specific target sequence for detection of <i>Listeria monocytogenes.</i> <i> Listeria monocytogenes</i> PTCC1163 was used as a standard organism for optimization experiments. A range of bacterial pathogens was used for specificity test including <i>Escherichia coli</i>: ATCC 35218 <i>Salmonella typhi</i> PTCC: 1609. Phenol – chloroform method was used for DNA extraction. PCR technique was performed as per standard protocol. Amplified product was detected by 1% gel agarose electrophoresis, stained by ethidiome bromide. <br><b>Results:</b> Provided data confirmed amplification of expected product. Specificity test proved no cross reaction with tested organisms. Sensitivity test detected 500fg Listeria monocytogenesDNA as a final detection limit. <br><b>Conclusion:</b> Optimized experiment confirmed that the applied PCR protocol is quite fast with high sensitivity and specificity performing in less than three hours. Application of this method in clinical laboratories can help the rapid diagnosis of Listeria monocytogenesin samples. لیستریامونوسیتوژنز،PCR ، ژن hlyA Listeria monocytogenes, PCR, hlyA gene 9 14 http://ijmm.ir/browse.php?a_code=A-10-1-124&slc_lang=fa&sid=1 Ali Najafi علی نجفی 1003194753284600663 1003194753284600663 No Molecular Biology Research Center, Baghiatollah University of Medical Sciences, Tehran, Iran مرکز تحقیقات بیولوژی مولکولی دانشگاه علوم پزشکی بقیه ا...(عج)- تهران- ایران Mahdi Qorbanalizadgan مهدی قربانعلی زادگان 1003194753284600664 1003194753284600664 No مرکز تحقیقات بیولوژی مولکولی دانشگاه علوم پزشکی بقیه ا...(عج)- تهران- ایران Hamid Tavakoli حمید توکلی h.tavakoli1344@yahoo.com 1003194753284600665 1003194753284600665 Yes Nutrition Department, Public Health Research Center, Baghiatollah University of Medical Sciences, Tehran, Iran. گروه تغذیه مرکز تحقیقات بهداشتی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه اله (عج) Ali Ahmadi علی احمدی 1003194753284600666 1003194753284600666 No مرکز تحقیقات بیولوژی مولکولی دانشگاه علوم پزشکی بقیه ا...(عج)- تهران- ایران