en شرایط بهینه در استخراج و خالص سازی آنزیم پنی سیلیناز میکروب شناسی صنعتی Industrial Microbiology مقاله پژوهشی Original Research Article <p style="font-style: normal; text-align: justify;"><span style="font-size:14px;"><span style="font-family:IRANsans;"><span style="color:#ffffff;"><strong><span style="background-color:#16a085;">زمینه و اهداف:&nbsp;</span></strong></span>&nbsp;مطالعه حاضر با هدف بررسی شرایط بهینه برای استخراج و خالص سازی آنزیم پنی سیلیناز انجام شد. منبع آنزیم، با<br> کتری ۶۳۴۶<em><span dir="LTR">Bacillus licheniformis </span></em>&nbsp;بدست آمده سازمان پژوهش&shy; های علمی&shy;- صنعتی ایران بود.<br> <strong><span style="color:#ffffff;"><span style="background-color:#16a085;">مواد و روش کار:&nbsp;</span></span>&nbsp;</strong>باکتری <em><span dir="LTR">&nbsp;B. licheniformis</span></em>در محیطی حاوی نمک های معدنی، ترکیبات نیتروژن دار و منابع کربنی کشت داده شد. بعد از برداشت و آماده سازی سوسپانسیون باکتری، تخریب دیواره سلولی باکتری به روش تلفیقی از لیزوزیم و اولتراسونیکاسیون ضعیف جهت تهیه عصاره خام سلولی، صورت گرفت.&nbsp;سپس با روش کروماتوگرافی و الکتروفورز مقدار آنزیم تعیین شد. علاوه بر این، بهترین دمای&nbsp;رشد و بهترین زمان انکوباسیون بر اساس میزان جذب نمونه‌ها در طول موج ۲۴۰ نانومتر، میزان فعالیت آنزیمی ، بهینه‌سازی شدت هوادهی، بهینه سازی زمان تولید آنزیم و<span dir="LTR"> pH </span>بهینه مشخص شد.<br> <span style="color:#ffffff;"><strong><span style="background-color:#16a085;">یافته ها:&nbsp;</span></strong></span>&nbsp;در هر لیتر کشت حدود ۸ گرم سلول بازیابی&nbsp;شد. <span dir="LTR">pH</span> بهینه ۶/۵ تعیین گردید. ارزیابی پایداری حرارتی آنزیم در زمان‌های مختلف نشان داد که، آنزیم برای بیش از ۱ ساعت در دمای ۲۰ تا ۴۵ درجه سانتی‌گراد پایدار است، در حالی که در ۶۰ درجه سانتی‌گراد در ۱۰ دقیقه غیرفعال می‌شود. همچنین بهترین زمان انکوباسیون برای باکتری ۹ ساعت در دمای ۳۰ درجه سانتی گراد است. همچنین از لحاظ شدت هوا&shy;دهی بالاترین میزان تولید آنزیم در ارلن&shy; های ۲۵۰ میلی&shy; لیتری با حجم ۵۰ میلی&shy; لیتر محیط کشت، در دور<span dir="LTR">RPM </span>۲۰۰، به دست آمد. میزان تولید آنزیم در این شرایط به <span dir="LTR">unit/ml</span> ۲۳۹۴ رسید، هوا دهی بیشتر باعث اثر مهار کنندگی اکسیژن و کاهش فعالیت آنزیم تولید شده، گردید.<br> <strong><span style="color:#ffffff;"><span style="background-color:#16a085;">نتیجه‌گیری:&nbsp;</span></span>&nbsp;</strong>باکتری <em><span dir="LTR">B. licheniformis</span></em> میکروارگانیسم مناسبی برای استخراج آنریم پنی سیلیناز است<span dir="LTR">.</span></span></span></p> <p style="text-align: justify;"><span style="font-size:16px;"><span style="font-family:Times New Roman;"><span style="color:#ffffff;"><strong><span style="background-color:#16a085;">Background and Objective:</span></strong></span>&nbsp;The present study aimed to evaluate the optimum conditions for extracting and purifying penicillinase enzyme. The enzyme source was <em>Bacillus licheniformis</em> 6346 obtained from the Iranian Research Organization for Science and Technology.<br> <strong><span style="color:#ffffff;"><span style="background-color:#16a085;">Materials and Methods:</span></span>&nbsp;</strong><em>B. licheniformis</em> was cultured in a medium containing mineral salts, nitrogen compounds, and cultured carbon sources. Following the harvesting and preparation of bacterial suspension, the destruction of the bacterial cell wall and crude cell extraction was completed using a combination of lysozyme and weak ultrasonication. Afterward, enzyme amount was determined utilizing chromatography and electrophoresis. Furthermore, the optimum growth temperature and incubation time were assessed based on the absorbance of samples at 240 nm, enzyme activity, aerification intensity optimization, enzyme production time, and optimum pH.<br> <span style="color:#ffffff;"><strong><span style="background-color:#16a085;">Results:</span></strong></span>&nbsp;Approximately 8 g of cells were retrieved in one liter of culture. The optimum pH was determined as 6.8. The heat stability evaluation of the enzyme at different times revealed that the enzyme was stable for more than 1 h at 20&deg;C-45&deg;C, while it is inactivated in 10 min at 60&deg;C. Moreover, the best incubation time for this bacterium was obtained as 9 h at 30&deg;C. In terms of aerification intensity, the highest enzyme production rate of 2394 U/mL was achieved in a 250 mL Erlenmeyer flask with a 50 mL culture medium at 200 RPM. More aerification led to the inhibitory effect of oxygen and reduced enzyme activity.<br> <span style="color:#ffffff;"><strong><span style="background-color:#16a085;">Conclusion:</span></strong></span>&nbsp;Our findings showed that the bacterium <em>B. licheniformis</em> 6346 can be used for producing penicillinase enzyme in optimum conditions.</span></span></p> <div><div></div></div> پنی سیلیناز, باسیلوس لیچنی­فورمیس, خالص سازی, شرایط بهینه Bacillus licheniformis, Optimum conditions, Penicillinase, Purification 684 691 http://ijmm.ir/browse.php?a_code=A-10-273-6&slc_lang=en&sid=1 Kambiz Najafi کامبیز نجفی k_najafi@yahoo.com 100319475328460027539 100319475328460027539 No Department of Biology, Sanandaj Branch, Islamic Azad University, Sanandaj, Iran دانشجوی دکترا بیوشیمی، گروه زیست شناسی، واحد سنندج، دانشگاه آزاد اسلامی، سنندج، ایران Nahid Haghnazari ناهید حقنظری n.haghnazari@gmail.com 100319475328460027540 100319475328460027540 No Department of Biology, Sanandaj Branch, Islamic Azad University, Sanandaj, Iran استادیار بیوشیمی، گروه زیست شناسی، واحد سنندج، دانشگاه آزاد اسلامی، سنندج، ایران Kambiz Davari کامبیز داوری k.microbiology@gmail.com 100319475328460027541 100319475328460027541 No Department of Biology, Sanandaj Branch, Islamic Azad University, Sanandaj, Iran استادیار میکروبیولوژی، گروه زیست شناسی، واحد سنندج، دانشگاه آزاد اسلامی، سنندج، ایران Fatemeh Keshavarzi فاطمه کشاورزی f.keshavarzi@iausdj.ac.ir 100319475328460027542 100319475328460027542 Yes Department of Biology, Sanandaj Branch, Islamic Azad University, Sanandaj, Iran دانشیار ژنتیک، گروه زیست شناسی، واحد سنندج، دانشگاه آزاد اسلامی، سنندج، ایران