en بررسی اثر ایمنی‌زایی واکسن کونژوگه آلژینات-اگزوتوکسین A علیه عفونت سودوموناس آئروژینوزا در مدل موش باکتری شناسی پزشکی Medical Bacteriology مقاله پژوهشی Original Research Article <p style="font-style: normal; text-align: justify;"><span style="font-size:14px;"><span style="font-family:IRANsans;"><span style="color:#ffffff;"><strong><span style="background-color:#16a085;">زمینه و اهداف:&nbsp;</span></strong></span>&nbsp;<em><span style="vertical-align:baseline;">سودوموناس آئروژینوزا </span></em><span style="vertical-align:baseline;">پاتوژنی فرصت طلب بوده و آلژینات از مهم&shy;ترین شاخص‌های بیماری‌زایی آن است. هدف این مطالعه بررسی ایمنی‌زایی کونژوگه آلژینات <em>سودوموناس آئروژینوزا</em> با اگزوتوکسین </span><span dir="LTR" style="vertical-align:baseline;">A</span><span style="vertical-align:baseline;"> به‌عنوان کاندیدای واکسن در موش است.</span><br> <strong><span style="color:#ffffff;"><span style="background-color:#16a085;">مواد و روش کار:&nbsp;</span></span>&nbsp;</strong><span style="vertical-align:baseline;">برای تهیۀ آلژینات از سویۀ موکوئیدی <em>سودوموناس آئروژینوزا</em> ۶۴۹۴و سویۀ استاندارد </span><span dir="LTR" style="vertical-align:baseline;">PAO۱</span><span style="vertical-align:baseline;"> برای جداسازی اگزوتوکسین </span><span dir="LTR" style="vertical-align:baseline;">A</span><span style="vertical-align:baseline;"> استفاده شد. آلژینات به‌وسیلۀ رسوب دادن با اتانول سرد، دیالیز، هضم آنزیمی و کروماتوگرافی استخراج و برای افزایش ایمنی‌زایی، آنتی‌ژن به </span><span style="vertical-align:baseline;">اگزوتوکسین</span> <span dir="LTR" style="vertical-align:baseline;">A</span><span style="vertical-align:baseline;"> از </span><span dir="LTR" style="vertical-align:baseline;">ADH</span><span style="vertical-align:baseline;"> به‌عنوان فاصله‌گذار و </span><span dir="LTR" style="vertical-align:baseline;">EDAC</span><span style="vertical-align:baseline;"> به‌عنوان لینکر استفاده گردید. تست‌های تائیدی مشخص کرد که کونژوگه حاصل فاقد سمیت مشخص و تب‌زایی بود. چهار گروه موش‌ </span><em><span dir="LTR" style="vertical-align:baseline;">BALB/c</span></em><span style="vertical-align:baseline;"> ماده (هر گروه شامل ۱۵ موش) انتخاب شدند که گروه اول با </span><span dir="LTR" style="vertical-align:baseline;">ALG</span><span style="vertical-align:baseline;"> ، گروه دوم با </span><span dir="LTR" style="vertical-align:baseline;">D-ALG-ETA</span><span style="vertical-align:baseline;"> ، گروه سوم با </span><span dir="LTR" style="vertical-align:baseline;">ETA</span><span style="vertical-align:baseline;"> و گروه چهارم، به‌عنوان گروه شاهد با نرمال سالین واکسینه شدند.&nbsp;</span><span style="vertical-align:baseline;">واکسیناسیون با سه دوز تزریقی با فواصل دو هفته‌ای انجام و پاسخ‌های آنتی‌بادی با روش الایزا برای </span><span dir="LTR" style="vertical-align:baseline;">IgG</span><span style="vertical-align:baseline;"> تام،</span><span dir="LTR" style="vertical-align:baseline;">IgG۳ </span><span style="vertical-align:baseline;">، </span><span dir="LTR" style="vertical-align:baseline;">IgG۲b</span> <span dir="LTR" style="vertical-align:baseline;">IgG۲a </span><span style="vertical-align:baseline;">، </span><span dir="LTR" style="vertical-align:baseline;">IgG۱</span><span style="vertical-align:baseline;"> در نمونه‌های سرمی اندازه‌گیری شد.</span><br> <span style="color:#ffffff;"><strong><span style="background-color:#16a085;">یافته ها:&nbsp;</span></strong></span>&nbsp;<span style="vertical-align:baseline;">پس از دومین و سومین تزریق، با </span><span dir="LTR" style="vertical-align:baseline;">ALG-ETA</span><span style="vertical-align:baseline;"> افزایش چشم</span><span style="vertical-align:baseline;">‌</span><span style="vertical-align:baseline;">گیری در میزان تیتر آنتی‌ بادی‌ها بر علیه </span><span dir="LTR" style="vertical-align:baseline;">ALG-ETA</span><span style="vertical-align:baseline;"> در مقایسه با </span><span dir="LTR" style="vertical-align:baseline;">ALG</span><span style="vertical-align:baseline;"> خالص نشان دادند. در تزریق سوم نسبت به تزریق اول کونژوگه، تیتر آنتی‌بادی‌های</span><span dir="LTR" style="vertical-align:baseline;">IgG۲a, IgG۲b, IgG, IgG۱, IgG۳</span><span style="vertical-align:baseline;"> علیه آلژینات به ترتیب ۹/۲، ۱۰، ۵/۲، ۳ و ۲/۹ برابر افزایش یافت.</span><br> <strong><span style="color:#ffffff;"><span style="background-color:#16a085;">نتیجه‌گیری:&nbsp;</span></span>&nbsp;</strong><span style="vertical-align:baseline;">نتایج نشان می‌دهدکه </span><span dir="LTR" style="vertical-align:baseline;">ALG</span><span style="vertical-align:baseline;"> <em>سودوموناس آئروژینوزا</em> آنتی‌بادی‌های ضد </span><span dir="LTR" style="vertical-align:baseline;">ALG</span><span style="vertical-align:baseline;"> را در فرم کونژوگه با اگزوتوکسین </span><span dir="LTR" style="vertical-align:baseline;">A</span><span style="vertical-align:baseline;"> افزایش داده و می‌توانند یک ادجوانت مناسب به شمار بیایند.</span></span></span></p> <p style="text-align: justify;"><span style="font-size:16px;"><span style="font-family:Times New Roman;"><span style="color:#ffffff;"><strong><span style="background-color:#16a085;">Background and Objective:</span></strong></span>&nbsp;<em>Pseudomonas aeruginosa</em> is an opportunistic pathogen, and alginate is its most important factor in pathogenicity. The objective of the study is the immunogenicity evaluation of P. <em>Pseudomonas aeruginosa</em> alginate conjugated to exotoxin A as a vaccine candidate in mice.<br> <strong><span style="color:#ffffff;"><span style="background-color:#16a085;">Materials and Methods:</span></span>&nbsp;</strong>The mucoid strain of <em>Pseudomonas aeruginosa</em> 6494 was used to prepare alginate, and the separation of exotoxin A was done with the standard strain of PAO1. Alginate was extracted by means of sedimentation with cold ethanol, dialysis, enzymatic digestion and chromatography. To improve immunogenicity, purified antigen was coupled to exotoxin A with ADH as a spacer and EDAC as a linker. Based on confirmation tests, the resulting conjugate was devoid of specific toxicity and pyrogenic effect. Four groups of <em>BALB/c</em> female mice (each group was included 15 mice) were selected in the next step. The first group with the ALG, the second group with the D-ALG-ETA, and the third one with the ETA were vaccinated. The fourth group (control group) was vaccinated with normal saline. Vaccination was performed in three injectable doses with two-week intervals. Subsequently, serum samples were collected, and antibody responses were measured by the ELISA method for total IgG, IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG3.<br> <span style="color:#ffffff;"><strong><span style="background-color:#16a085;">Results:</span></strong></span>&nbsp;After the second and third doses with ALG-ETA showed a significant increase in antibody titer against ALG-ETA in comparison with pure ALG. The titers of IgG2a, IgG2b, IgG, IgG1, IgG3 antibodies that produced against alginate increased in the third injection compared to the first conjugate injection, which was 2.9, 3, 5.2, 10, and 9.2, respectively.<br> <span style="color:#ffffff;"><strong><span style="background-color:#16a085;">Conclusion:</span></strong></span>&nbsp;These results show that ALG from <em>Pseudomonas aeruginosa</em> increases anti-alginate antibodies in conjugate form with exotoxin A and can be considered an appropriate, effective adjuvant.</span></span></p> <div><div></div></div> سودوموناس آئروژینوزا, آلژینات, اگزوتوکسینA, کونژوگاسیون, الایزا Alginate, Conjugate, Exotoxin A, ELISA, Pseudomonas aeruginosa 1 16 http://ijmm.ir/browse.php?a_code=A-10-1686-1&slc_lang=en&sid=1 Roya Haji Ali Babaei رویا حاجی علی بابایی Roya_1305@yahoo.com 100319475328460018944 100319475328460018944 No Department of Microbiology, Zanjan Branch, Islamic Azad University, Zanjan, Iran کارشناسی ارشد میکروبیولوژی، گروه میکروب شناسی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد زنجان، زنجان، ایران Reza Shapoori رضا شاپوری drreza1357@gmail.com 100319475328460018945 100319475328460018945 Yes Biologic Research Center, Zanjan Branch, Islamic Azad University, Zanjan, Iran مرکز تحقیقات بیولوژی، واحد زنجان، دانشگاه آزاد اسلامی، زنجان، ایران Masoumeh Beig معصومه بیگ masi73bi@gmail.com 100319475328460018946 100319475328460018946 No Department of Microbiology, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran دکتری میکروب شناسی پزشکی، گروه میکروب شناسی، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران