en طراحی TaqMan Duplex Real-time PCR برای تشخیص همزمان کلامیدیا تراکوماتیس و مایکوپلاسما ژنیتالیوم میکروب شناسی مولکولی Molecular Microbiology مقاله پژوهشی Original Research Article <p style="font-style: normal; text-align: justify;"><span style="font-size:14px;"><span style="font-family:IRANsans;"><span style="color:#ffffff;"><strong><span style="background-color:#16a085;">زمینه و اهداف:&nbsp;</span></strong></span>&nbsp;عفونت های جنسی منتقل شده توسط باکتری یکی از مشکلات درمانی و اجتماعی در سراسر جهان است. روش<span dir="LTR"> Real-time PCR </span>&nbsp;یکی از حساس ترین روش های تشخیصی و غربالگری این عفونت ها است<span dir="LTR">.</span> هدف از این مطالعه شناسایی همزمان <em>کلامیدیا تراکوماتیس</em> و <em>مایکوپلاسما ژنیتالیوم</em> با استفاده از <span dir="LTR">TaqMan duplex real-time polymerase chain reaction</span> بود<span dir="LTR">.</span><br> <strong><span style="color:#ffffff;"><span style="background-color:#16a085;">مواد و روش کار:&nbsp;</span></span>&nbsp;</strong>در مطالعه حاضر از<span dir="LTR"> DNA </span>استخراج شده از زنان مبتلا به عفونت واژن موجود در بانک مرکز تحقیقات پزشکی و مولکولی دانشگاه علوم پزشکی اراک، اراک، ایران استفاده شد. <span dir="LTR">duplex real-time PCR</span> برای تشخیص کلامیدیا تراکوماتیس و مایکوپلاسماژنیتالیوم در ۱۱۰ نمونه واژینال و اندوسرویکال مورد ارزیابی قرار گرفت. برای تایید عملکرد تشخیصی روش طراحی شده، آزمایش ها با یک کیت تشخیصی تجاری مقایسه شدند<span dir="LTR">.</span><br> <span style="color:#ffffff;"><strong><span style="background-color:#16a085;">یافته ها:&nbsp;</span></strong></span>&nbsp;اندازه آمپلیکون‌های<span dir="LTR"> ۱۳۵ </span>جفت باز <em><span dir="LTR">OmpA</span></em>&nbsp;و<span dir="LTR"> ۱۴۵ </span>جفت باز <em><span dir="LTR">MgPa</span></em>، نشان‌دهنده اجرای درست مراحل طراحی پرایمرها بود<span dir="LTR">.</span> تجزیه و تحلیل پانل<span dir="LTR"> STI </span>انسانی هیچ واکنش متقابلی را در روش نشان نداد<span dir="LTR">.</span> حساسیت و ویژگی روش تشخیصی طراحی شده<span dir="LTR"> TaqMan duplex Real-time PCR </span>به ترتیب ۹۷% و ۷۵% در مقایسه با کیت تشخیصی تجاری بود<span dir="LTR">.</span><br> <strong><span style="color:#ffffff;"><span style="background-color:#16a085;">نتیجه‌گیری:&nbsp;</span></span>&nbsp;</strong>نتایج نشان داد که تکنیک<span dir="LTR">TaqMan duplex real-time PCR </span>&nbsp;استفاده شده،&nbsp;اختصاصی و مقرون به صرفه است و می‌تواند جایگزینی عالی برای کیت‌های تجاری برای تشخیص همزمان <em>کلامیدیا تراکوماتیس</em> و <em>مایکوپلاسما ژنیتالیوم</em> باشد<span dir="LTR">.</span> اگر چه محدودیت این روش هزینه بالای آن است، اما این عیب به میزان قابل توجهی با روش مالتی پلکس برطرف شده است<span dir="LTR">.</span></span></span></p> <p style="text-align: justify;"><span style="font-size:16px;"><span style="font-family:Times New Roman;"><span style="color:#ffffff;"><strong><span style="background-color:#16a085;">Background and Objective:</span></strong></span>&nbsp;Sexually infections transmitted by bacteria are one of thetherapeutic and social problemsworldwide. The Real-time PCR assay is one of the most sensitive diagnostic and screening methods for these infections. The purpose of this study wassimultaneous detection of <em>Chlamydia trachomatis</em> and <em>Mycoplasma genitalium</em>using the TaqMan duplex real-time polymerase chain reaction.<br> <strong><span style="color:#ffffff;"><span style="background-color:#16a085;">Materials and Methods:</span></span>&nbsp;</strong>In the present study, we used extracted DNA from women with vaginal infections available in the bank ofthe molecular and medicalresearch center, Arak University of Medical Sciences, Arak, Iran. The duplex real-time PCR was evaluated to detect<em>Chlamydia trachomatis</em> and <em>Mycoplasmagenitalium</em> in 110 vaginal andendocervical samples. To validate the diagnostic performance of the designedmethod, the tests were compared with a commercial diagnostic kit.<br> <span style="color:#ffffff;"><strong><span style="background-color:#16a085;">Results:</span></strong></span>&nbsp;The size of the amplicons<em>OmpA</em>, 135 bp and <em>MgPa</em>, 145bp,indicated the accuracy of the primers designing procedures. The analysis of a panel of human STI revealed no cross-reactivity in the method. The diagnostic sensitivity and specificity of developedTaqMan duplex real-time PCR were 97% and 75%, respectively,compared to a commercial diagnostic kit.<br> <span style="color:#ffffff;"><strong><span style="background-color:#16a085;">Conclusion:</span></strong></span>&nbsp;The results indicated that the used TaqMan duplex real-time PCR technique is specific and cost-effective and can be an excellent alternative to commercial kits for simultaneously detecting C. trachomatis and M. genitalium. Although the disadvantage of this method is its high cost, this disadvantage has significantly been resolved by the multiplex method.</span></span></p> <div><div></div></div> کلامیدیا تراکوماتیس, مایکوپلاسما ژنیتالیوم, Real-time PCR, تشخیص همزمان, TaqMan Chlamydia trachomatis, Mycoplasma genitalium, Real-time PCR,Simultaneous detection, TaqMan 35 42 http://ijmm.ir/browse.php?a_code=A-10-449-1&slc_lang=en&sid=1 Mina Zolfaghari مینا ذوالفقاری minazolfaghari606@gmail.com 100319475328460018951 100319475328460018951 No Department of Immunology and Microbiology, Arak University of Medical Sciences, Arak, Iran گروه میکروبیولوژی و ایمونولوژی، دانشگاه علوم پزشکی اراک، اراک، ایران Behzad Khansarinejad بهزاد خوانساری نژاد B_Khansarinejad@yahoo.com 100319475328460018952 100319475328460018952 No Molecular and Medicine Research Center, Arak University of Medical Sciences, Arak, Iran گروه میکروبیولوژی و ایمونولوژی، مرکز تحقیقات پزشکی و مولکولی، دانشگاه علوم پزشکی اراک، اراک، ایران Zeinab Hamzehloo زینب حمزه لو Z.Hamzehloo459@gmail.com 100319475328460018953 100319475328460018953 No Department of Medical Biotechnology, Arak University of Medical Sciences, Arak, Iran گروه بیوتکنولوژی پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی اراک، اراک، ایران Azam Ahmadi اعظم احمدی ahmadia22@yahoo.com 100319475328460018954 100319475328460018954 No Infectious Diseases Research Center (IDRC), Arak University of Medical Sciences, Arak, Iran مرکز تحقیقات بیماری‌های عفونی، دانشگاه علوم پزشکی اراک، اراک، ایران Hamid Abtahi حمید ابطحی h_abtahi2@yahoo.co.uk 100319475328460018955 100319475328460018955 Yes Molecular and Medicine Research Center, Arak University of Medical Sciences, Arak, Iran گروه میکروبیولوژی و ایمونولوژی، مرکز تحقیقات پزشکی و مولکولی، دانشگاه علوم پزشکی اراک، اراک، ایران