fa ارزیابی پاسخ آنتی بادی به پروتئین های غشا خارجی بروسلا آبورتوس S99 به روش ELISA باکتری شناسی پزشکی Medical Bacteriology مقاله پژوهشی Original Research Article <div align="right" style="direction: rtl"> <b>زمینه و اهداف:</b> به پروتئین های غشا خارجی (OMPs) بروسلا به عنوان ساختارهای ایمونوژنیک برای طراحی و تولید واکسن زیر واحد بروسلوز انسانی توجه شده است. OMP های <i>بروسلا آبورتوس</i> همراه با سایر اجزا باکتریایی در خرگوش، سنتز سطوح بالای مولکول های IgG ویژه علیه بروسلا را تحریک می کنند. هدف مطالعه ارزیابی پاسخ آنتی بادی به پروتئین های غشا خارجی بروسلا آبورتوس S99 به روش الیزا بود. <br><b>روش بررسی:</b> OMP ها از گونه صاف بروسلا آبورتوس S99 با استخراج منظم سلول های سونیکه شده به وسیله اولتراسانتریفوژ و پیش هضم با لیزوزیم تخلیص شدند و با کروماتوگرافی تبادل یونی و ژل فیلتراسیون به طور خالص جداسازی شدند. میزان کل پروتئین تخلیص شده توسط دستگاه نانودراپ اسپکتروفتومتر (ND-1000) به طور صحیح و دقیق اندازه گیری شد. با استفاده از روش سدیم دودسیل سولفات پلی آکریل آمید ژل الکتروفورز (SDS-PAGE)، پروفایلی از پروتئین های غشا خارجی به دست آمد، که طبق آن پروتئین ها بر اساس وزن مولکولی از یکدیگر تفکیک شدند. با این روش دسته دوم از پروتئین ها که جزو پورین ها (Porins) هستند و در گونه <i>بروسلا آبورتوس</i> بیشترین گروه OMPها را تشکیل می دهند، تخلیص شدند. سپس سه دسته خرگوش سه تایی طبق یک برنامه ایمونیزاسیون به طور آزمایشگاهی با سه ترکیب مختلف شامل پروتئین های غشا خارجی به تنهایی و همراه با لیپو پلی ساکارید (LPS) و ادجوانت کامل فروند (CFA) ایمونیزه شدند. طبق برنامه زمانبندی شده پس از خون گیری از حیوان،‌ عیار پاسخ آنتی بادی اختصاصی مورد ارزیابی قرار گرفت. <br><b>یافته ها: </b>نتایج نشان دادند ترکیبی از LPS+Porins و CFA+Porins به عنوان ایمونوژنیک ترین ترکیبات هستند و عیار بالاتری از آنتی بادی را در مدل حیوانی القا می کنند. افزایش عیار آنتی بادی در دو گروه فوق در مقایسه با گروه ایمونیزه شده با پورین، معنی دار بود (P<0.05). <br><b>نتیجه گیری:</b> مجموعه پورین ها و LPS بروسلا می تواند ایمنی حفاظتی و طولانی مدت را علیه بروسلا ایجاد کند. این مجموعه احتمالا می تواند برای واکسن زیر واحد جهت پیشگیری از بروسلوز انسانی مورد استفاده قرار گیرد </div> <b>Background and objectives:</b> Currently, antigenic determinants of Brucella cell wall such as outer membrane proteins (OMPs) and lipopolysaccharide (LPS) are considered as potential candidates to develop subunit vaccines. It has been shown that OMPs of <i>Brucella abortus </i>along with other bacterial components could stimulate synthesis of specific IgG antibody in rabbits. The aim of present study was evaluation of antibody response to OMPs of <i>Brucella abortus </i>S99by ELISA method. <br><b>Materials and Methods:</b> OMPs were extracted by deoxycholate extraction technique and further purification performed by sequential centrifugation and ultracentrifugation. Protein concentration determined by using the Nano drop ND – 10000. Sodium dodecyle sulfate polyacryl amid gel electrophoresis (SDS – PAGE) was used to produce a profile of OMPs proteins which these were further differentiated on the basis of molecular weight. By using this method, the class II proteins belongs to porins, which comprised the major OMPs in <i>B. abortus </i>were purified. The groups consisted of 3 rabbits were immunized with three different compounds comprises of OMPs only, combined with LPS and combined with complete Freund's adjuvant (CFA). Sera from immunized animals were then evaluated for specific antibody response. <br> <b>Results:</b> the most immunogenic compounds were LPS+ porins and CFA+ porins and could promoted specific antibody response in experimental animals. The level of specific antibodies in rabbits immunized with above mentioned combinations was significantly higher compared to immunized rabbits with porins only (P<0.05) . <br><b>conclusion:</b> Based on the results, the combination of LPS+ porins can produce long term protective immunity against Brucella. So it could be probably considered for developing of subunit vaccine for prevention of human brucellosis. بروسلا آبورتوس S99، واکسن، پروتئین غشا خارجی، لیپوپلی ساکارید، ELISA Brucella abortusS99, outer membrane proteins , ELISA ,LPS, Vaccine 25 30 http://ijmm.ir/browse.php?a_code=A-10-1-101&slc_lang=fa&sid=1 Sahar Karami سحر کرمی 1003194753284600547 1003194753284600547 No Department of Microbiology, Isalmic Azad University, Karaj Branch, Iran بخش واکسن های باکتریایی و تهیه آنتی ژن، مجتمع تولیدی- تحقیقاتی انستیتو پاستور ایران Seyed Davar Siadat سیدداور سیادت d.siadat@gmail.com 1003194753284600548 1003194753284600548 Yes Bacterial vaccine and antigen preparation unit, Research and Production Complex, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran بخش واکسن های باکتریایی و تهیه آنتی ژن، مجتمع تولیدی- تحقیقاتی انستیتو پاستور ایران Bahman Tabaraie بهمن تبرایی 1003194753284600549 1003194753284600549 No Department of hepatitis and aids, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran Dariush Norouzian داریوش نوروزیان 1003194753284600550 1003194753284600550 No Bacterial vaccine and antigen preparation unit, Research and Production Complex, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran Naser Harzandi ناصر هرزندی 1003194753284600551 1003194753284600551 No Department of Microbiology, Isalmic Azad University, Karaj Branch, Iran Mohammadreza Aghasadeghi محمدرضا آقاصادقی 1003194753284600552 1003194753284600552 No Department of hepatitis and aids, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran Jalal Izadi Mobarakeh جلال ایزدی 1003194753284600553 1003194753284600553 No Department of hepatitis and aids, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran Mohammadreza Razavi محمدرضا رضوی 1003194753284600554 1003194753284600554 No Department of hepatitis and aids, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran Mayam Kheirandish مریم خیراندیش 1003194753284600555 1003194753284600555 No Research center, Iranian Blood Transfusion Organization Seyed Mehdi Sadat سیدمهدی سادات 1003194753284600556 1003194753284600556 No Department of Microbiology, Isalmic Azad University, Karaj Branch, Iran