fa شناسایی سویه های Enteroaggregative Escherichia coli در اسهال کودکان توسط Multiplex PCR و مطالعه قابلیت چسبندگی آن ها به سلول اپی تلیال باکتری شناسی پزشکی Medical Bacteriology مقاله پژوهشی Original Research Article <div align="right" style="direction: rtl"> <b>زمینه و اهداف:</b> Enteroaggregative <i>Escherichia coli </i>EAEC یک پاتوژن روده ای در حال ظهور است که باعث اسهال حاد و مزمن در کودکان می شود. مشخصه EAEC الگوی چسبندگی آجر مانند به سلول های HEp-2 یا HeLa که برای تشخیص EAEC تست طلایی محسوب می شود. این چسبندگی متمایز از الگوی (Enteropathogenic <i>Escherichia coli</i> (EPEC و (Diffusly Adherent <i>E.coli </i>(DAEC است. در این مطالعه برای تشخیص سویه های EAEC از تست (Multiplex PCR(mPCR استفاده شد و نتایج با تست چسبندگی به سلول HeLa مقایسه گردید. <br><b>روش بررسی: </b>سویه های <i>E. coli</i> از نمونه مدفوع کودکان مبتلا به اسهال در مرکز طبی کودکان تهران جدا و شناسایی آنها طبق روش های استاندارد انجام گرفت. غربالگری اولیه سویه های EAEC بر اساس تست چسبندگی به سلول انجام شد و 170 سویه که به نوعی به سلول چسبندگی داشتند، انتخاب شدند. برای تشخیص سویه های EAEC از تست mPCR استفاده شد. این تست بر مبنای سه ژن پلاسمیدی aaP، aggR و AA طراحی شده است. سپس برای تعدادی از سویه های mPCR مثبت و منفی تست اتصال به سلول HeLa انجام گرفت. <br><b>یافته ها: </b>بر اساس mPCR، 114 سویه (%67) به عنوان EAEC تشخیص داده شدند. ژن های پلاسمیدی aaP،aggR و AA به ترتیب در 114 (100%)، در 110 (%96.4) و در 80 (%70) سویه دیده شدند. بر اساس تست چسبندگی به سلول 53 (%86.9) سویه mPCR مثبت و 3 (%27.2) سویه mPCR منفی نیز دارای الگوی چسبندگی آجر مانند بودند. <br><b>نتیجه گیری:</b> نتایج نشان داد که mPCR قادر است اکثر سویه های EAEC، که دارای الگوی چسبندگی آجر مانند هستند، را تشخیص دهد. این تست قادر است آن دسته از سویه های EAEC را که الگوی آجر مانند را هم نشان نمی دهند، تشخیص دهد. به نظر می رسد که mPCR یک تست سریع و با ویژگی خوب برای تشخیص سویه های EAEC باشد و به ویژه برای غربالگری تعداد زیاد ایزوله در موارد اپیدمی مناسب می باشد. </div> <b>Background and Objectives:</b> Enteroaggregative <i>Escherichia coli </i>(EAEC) is an emerging pathogen that cause acute and chronic infantile diarrhea. The stacked – brick appearance of EAEC strains to HeLa or Hep-2 cells is the gold standard assay for the detection of EAEC strains and is different from adherence pattern of EPEC and DAEC. In the present study, a multiplex PCR ( mPCR ) assay was used for detection of EAEC strains and its results was compared to HeLa cells adherence assay. <br><b>Materials and Methods: </b>In this study the <i>E.coli s</i>trains isolated from diarrheal children from Tehran children medical center were used. The isolates were identified according to standard procedure. The 170 strains were subjected to mPCR assay. This assay is based on the presence of three plasmid borne genes i.e aaP, aggR , aatA. The mPCR positive and negative strains were further checked for their adherence patterns on HeLa cells. <br><b>Results: </b>the results of mPCR of these strains revealed that 114 (67%) of these strains were identified as EAEC by this mPCR assay. The frequency of occurance of these genes was 100 %, 96.4 % and 70% for the aaP, aggR, and aatA genes respectively. The 86.9% of mPCR positive strains were HeLa cell adherent (stacked-brick) and only 13.1% of mPCR positive strains were not adherent. On the other hand 27.2% of strains that on mPCR assay were negative, adhered to HeLa cells in a characteristic manner of EAEC isolates (stacked –brick). <br> <b>Conclusion:</b> the overall results obtained in this study, showed that the mPCR assay used here is able to detect the strains with HeLa cells adherence characteristic of EAEC isolates. Moreover some strains non-adherent on HeLa cells was positive with the mPCR visa-versa. In conclusion it seems this mPCR assay is rapid and specific assay for detection of EAEC strains and especially is suitable for screening large number of isolates in epidemic situation. HeLa cells، Multiplex PCR، EAEC، چسبندگی آجر مانند Multiplex PCR, EAEC, HeLa cell, stacked –brick adherence 19 24 http://ijmm.ir/browse.php?a_code=A-10-1-100&slc_lang=fa&sid=1 Abolfazl Davoodabadi ابوالفضل داوودآبادی 1003194753284600542 1003194753284600542 No Department of Molecular Biology, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran بخش بیولوژی مولکولی، انستیتو پاستور ایران Maryam Abaszadeh مریم عباس زاده 1003194753284600543 1003194753284600543 No Department of Molecular Biology, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran بخش بیولوژی مولکولی، انستیتو پاستور ایران Mana Alavi مانا علوی 1003194753284600544 1003194753284600544 No Department of Molecular Biology, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran بخش بیولوژی مولکولی، انستیتو پاستور ایران Anis Jafari انیس جعفری 1003194753284600545 1003194753284600545 No Department of Molecular Biology, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran بخش بیولوژی مولکولی، انستیتو پاستور ایران Said Bouzari سعید بوذری saeidbouzari@yahoo.com 1003194753284600546 1003194753284600546 Yes Department of Molecular Biology, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran بخش بیولوژی مولکولی، انستیتو پاستور ایران