fa طراحی و ساخت BCG نوترکیب حاوی ژن سیتوزین دآمیناز به منظور ارتقا کارایی BCG اینتراوزیکال در درمان سرطان مثانه بیوتکنولوژی میکروبی Microbial Biotechnology مقاله پژوهشی Original Research Article <div align="right" style="direction: rtl"> <b>زمینه و اهداف:</b> سرطان مثانه دومین سرطان شایع دستگاه ادراری- تناسلی در جهان است. ایمونوتراپی با BCG درمان انتخابی این سرطان می باشد. روش دیگر، ژن درمانی سرطان مثانه با سیستم (Cytosine Deaminase/5-Fluorocytosine (CD/5-FC است. هدف از ساخت شاتل وکتور مایکوباکتریال، انتقال ژن سیتوزین دآمیناز (CD) به BCG با روش الکتروپوریشن بود تا با تبدیل 5-FC به 5-Fluorouracil)5-FU) توسط آنزیم CD، سلول های توموری بیشتری نابود شوند. <br><b>روش بررسی:</b> قطعات ژنی شاتل وکتور مایکوباکتریال شامل، پروموتر hsp60، توالی سیگنال آلفا آنتی ژن و ژن CD مخمر (Saccharomyces cerevisiae) پس از تکثیر با PCR و هضم آنزیمی و با استفاده از فناوری های کلونینگ در پلاسمید pBTGGT و pVN2 به ترتیب کلون و ساب کلون شدند. پلاسمید نهایی با روش الکتروپوریشن به داخل BCG هدایت گردید و وجود آن در BCG بررسی شد. یافته ها: نتایج تعیین توالی وکتور نهایی صحت آن را تایید و وکتور pHARA نامگذاری شد. سلول هایی که pHARA را دریافت کردند پس از 17 روز روی محیط میدل بروک 7 H10 حاوی غلظت نهایی 20 mg/ml کانامایسین، کلنی تشکیل دادند. <br><b>نتیجه گیری:</b> BCG نوترکیب فوق علاوه بر فراخوانی موضعی سیستم ایمنی، با تبدیل داروی 5-FC به 5-FU توسط آنزیم CD، می تواند سلول های توموری بیشتری را نابود نماید </div> <b>Background and Objectives:</b> Bladder cancer is the second common genitourinary tract cancer in the world. Immuno therapy with intravesical <i>Mycobacterium bovis </i>BCG is the selective treatment for superficial bladder cancer. CD/5FC Enzyme-Prodrug system of gene therapy is an alternative technique for controlling bladder cancer. This research is aimed at the design and construction of mycobacterial shuttle vector containing hsp60 promoter, alpha antigen signal sequence and cytosine deaminase (CD) and consequent transformation to <i>M. bovis</i> BCG by electroporation. It is assumed that converting of 5-FC to 5-FU via CD will kill more tumor cells and increase the efficacy of this therapeutic method. <br> <b>Material and Method: </b>After amplification of mycobacterial shuttle vector gene fragments containing hsp60 promoter, alpha antigen signal sequence and Saccharomyces cerevisiaeCD gene by PCR and enzymatic digestion, they were cloned and subcloned in pBGGT and pVN2 respectively. The final plasmid was transformed to <i>M. bovis</i> BCG by electroporation method. <br> <b>Results:</b> Sequencing results confirmed the integrity and correctness of final vector which called pHARA. The cells which received pHARA, were cultured on Middlebrook 7H10 agar with 20µg/ml final concentration of kanamycin, and grown during 17 days. Conclusion:Mentioned recombinant BCG (rBCG) secreting CD enzyme in addition to adjuvant property and stimulation of local immunity responses against tumor cells, can also destroy more tumor cells through converting 5-FC to 5-FU via CD enzyme that intensifies BCG efficacy in treatment of superficial bladder cancer. BCG، سرطان مثانه، ایمونوتراپی، ژن درمانی، الکتروپوریشن 1 8 http://ijmm.ir/browse.php?a_code=A-10-1-98&slc_lang=fa&sid=1 Aida Feiz Barazandeh آیدا فیض برازنده 1003194753284600557 1003194753284600557 Yes Faculty of Science, Shahid Beheshti University, Tehran, Iran گروه میکروبیولوژی دانشکده زیست شناسی دانشگاه شهید بهشتی Hossein Khanahmad حسین خان احمد 1003194753284600558 1003194753284600558 No BCG Department, Pasteur Institute of Iran بخش تحقیقات BCG، مجتمع تولیدی- تحقیقاتی انستیتو پاستور ایران Gholamhossein Ebrahimipour غلامحسین ابراهیمی پور 1003194753284600559 1003194753284600559 No Faculty of Science, Shahid Beheshti University, Tehran, Iran گروه میکروبیولوژی دانشکده زیست شناسی دانشگاه شهید بهشتی Mohhamad Abolhassani محمد ابوالحسنی 1003194753284600560 1003194753284600560 No BCG Department, Pasteur Institute of Iran بخش تحقیقات BCG، مجتمع تولیدی- تحقیقاتی انستیتو پاستور ایران Hesamadin Movassagh حسام الدین موثق 1003194753284600561 1003194753284600561 No BCG Department, Pasteur Institute of Iran بخش تحقیقات BCG، مجتمع تولیدی- تحقیقاتی انستیتو پاستور ایران Tayebeh Sohrabi طیبه سهرابی 1003194753284600562 1003194753284600562 No BCG Department, Pasteur Institute of Iran بخش تحقیقات BCG، مجتمع تولیدی- تحقیقاتی انستیتو پاستور ایران