fa تشخیص آلودگی مایکوپلاسمایی در کشت سلول به روش PCR میکروب شناسی مولکولی Molecular Microbiology مقاله پژوهشی Original Research Article <div align="right" style="direction: rtl"> <b>مقدمه و اهداف:</b> آلودگی کشت های سلولی در شرایط آزمایشگاه با گونه های مایکوپلاسما می تواند به مشکلاتی در ارگانیسم های زنده منجر شود. بنابراین، تهیه یک پروتکل تشخیص روتین برای عفونت های مایکوپلاسمایی، جهت به دست‌ آوردن نتایج تحقیقاتی قابل اعتماد، ضروری و انکارناپذیر است. به دلیل محدودیت در روش های متواتر، این اواخر تکنولوژی هایی بر پایه اسید نوکلئیک خصوصا روش های بر پایه واکنش زنجیره ای پلیمراز (PCR) برای شناسایی و تشخیص تمامی گونه های جنس مایکوپلاسما، به عنوان روشی سریع و ویژه ارایه شده اند. هدف از انجام این مطالعه ارایه روشی بر پایه PCR جهت آشکار کردن مایکوپلاسماها در نمونه های کشت سلولی و سایر فرآورده های بیولوژیک مانند واکسن ها بود. <br><b>روش بررسی:</b> با استفاده از پرایمرهای مخصوص جنس SHAH-GPO-3 و MGSO و گونه های استاندارد، روش PCR بهینه شد و از جهت حساسیت و ویژگی بررسی گردید. سپس از کشت های سلولی DNA استخراج و با PCR آزمایش شد. محصول تکثیری کلون و تعیین توالی گردید. <br><b>یافته ها:</b> در این مطالعه، روش حساسی از PCR تهیه و جهت تشخیص جنس مایکوپلاسما در آلودگی های فرآورده های بیولوژیک توسعه داده شد. ژن 16S rDNA به دلیل داشتن سکانس های مشترک و ثابت به عنوان ژن هدف، جهت تکثیر با پرایمرهای تغییر یافته مورد استفاده قرار گرفت. این روش حساس توسعه داده شده، با محصولی به اندازه 272 bp، دارای حساسیتی در حد 10 کپی از DNA ژنوم هدف بوده و با DNA بسیاری از میکروارگانیسم ها، رده های سلولی انسان، واکنش متقاطع ندارد. از این جهت، پرایمرها دارای حساسیت و ویژگی فوق العاده بالایی هستند.<br><b>نتیجه گیری:</b> سنجش PCR بر مبنای سکانس های ثابت و مشترک موجود در 16S rRNA، یک تکنیک مفید، قابل اعتماد با حساسیت، ویژگی، و دقت بالا جهت شناسایی آلودگی های مایکوپلاسمایی در کشت سلول و سایر فرآورده های بیولوژیک است. البته تحقیقات بیشتری در زمینه استخراج DNA، روش های تغلیظ نمونه، سکانس های هدف، روش شناسایی محصول تکثیری باید انجام گیرد. </div> <b>Background and Objectives:</b> Infections with Mycoplasma species can induce a variety of problems in living organisms and in in vitro cell cultures. Therefore, it is necessary to establish a routine diagnostic protocol for Mycoplasma infection in order to ensure reliable research results, as well as the safety of commercial biological products. In order to circumvent those limitations, many nucleic acid technology predicated procedures have been developed. PCR-based methods for detection of certain DNA regions of the Mycoplasma genome have proven both rapid and specific. <br> <b>Material and Methods:</b> Using SHAH-GPO-3, MGSO primers and standard Mycoplasma species PCR optimized and sensitivity and specificity evaluated by Known CFU samples and different strains. Cell culture DNA extracted and then tested by optimized PCR. Amplicon (272 bp) cloned by PCR-cloning and then sequenced by dideoxy chain termination. <br><b>Results:</b> In this study, we describe our newly-developed sensitive PCR procedure for the detection of Mycoplasma genus contaminants. For amplification, the DNA regions of 16S rDNA were targeted using general Mycoplasma primers. The PCR, which generated DNA fragments of 272 bp, was found to be able to detect 10 copies of the target DNA, and evidenced no cross-reactivity with the genomic DNA of related microorganisms or of human cell lines, thereby confirming the sensitivity and specificity of the primers used. 25 from 47 cell lines infected with Mycoplasmas. <br><b>Conclusion:</b>The improved 16S rRNA based PCR method for identification of Mycoplasma in cell culture and biological products, based on common and constant sequences is accurate and useful technique with high specificity and sensitivity. However, more researches should be developed in case of DNA extraction, samples concentration and target sequences and identification of PCR products مایکوپلاسما، PCR، آلودگی، تشخیص مولکولی، کشت سلول Mycoplasma, PCR, Contamination, Molecular diagnosis, Cell culture 15 25 http://ijmm.ir/browse.php?a_code=A-10-1-92&slc_lang=fa&sid=1 Mohhamad Hassan Shahhosseiny محمدحسن شاه حسینی 1003194753284600503 1003194753284600503 Yes Department of Microbiology, Islamic azad university, Shahryar unit/Quds branch گروه میکروبیولوژی، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد شهریار، شهر قدس Zahra Hosseiny زهرا حسینی 1003194753284600504 1003194753284600504 No Department of Microbiology, Islamic azad university, Shahryar unit/Quds branch Bahman Tabarraii بهمن تبرایی 1003194753284600505 1003194753284600505 No Department of Microbiology, Islamic azad university, Karaj unit. Fatemeh Akhlaghi فاطمه اخلاقی 1003194753284600506 1003194753284600506 No Razi institute- Quality control Unit Mohhamad Ali Shokrgozar محمدعلی شکرگزار 1003194753284600507 1003194753284600507 No Pasteur institute of IRAN-Cell Bank Unit. Elham Moslemi الهام مسلمی 1003194753284600508 1003194753284600508 No Department of Biology , Islamic azad university,Eest unit