Iranian Journal of Medical Microbiology
مجله میکروب شناسی پزشکی ایران
Iran J Med Microbiol
Medical Sciences
http://ijmm.ir
1
admin
1735-8612
2345-4342
8
10.30699/ijmm
14
8888
13
en
jalali
1399
8
1
gregorian
2020
11
1
14
6
online
1
fulltext
fa
ایمونوژنیسیتی نوکلئوپروتئین ویروس آنفلوانزای طیور
Evaluating the Immunogenicity of Avian Influenza Virus Nucleoprotein
ویروس شناسی پزشکی
Medical Virology
مقاله پژوهشی
Original Research Article
<div style="text-align: justify;"><span style="font-size:14px;"><span style="font-family:IRANsans;"><span style="color:#ffffff;"><strong><span style="background-color:#2980b9;">زمینه و اهداف: </span></strong></span>ویروس آنفلوانزا، بیماری عفونی جدی آنفلوانزای مرغی (طیور) را ایجاد میکند که این ویروس متعلق به خانواده ارتومیکیسوویریده نوع <span dir="LTR">A</span> است. سنتز <span dir="LTR">RNA</span> ویروسی <span dir="LTR">A</span> با توجه به میانکنش نوکلئوپروتئین (<span dir="LTR">NP</span>) با پلیمراز ویروسی صورت میگیرد. در مطالعه حاضر، ایمنوژنسیتی نوکلئوپروتئین ویروس آنفلوانزای مرغی بررسی شد.<strong><span style="font-size:9.0pt;"></span></strong><br>
<strong><span style="color:#ffffff;"><span style="background-color:#2980b9;">مواد و روش کار:</span></span> </strong>نمونه ویروسی آنفلوانزی مرغی سویه <span dir="LTR">N2H9</span> <span dir="LTR">A/Chicken/Iran/259/2014/</span> انتخاب گردید. بهمنظور انجام الکتروفورز و خالصسازی نوکلئوپروتئین، غلظت پروتئین نمونهها مشخص شد. الکتروفورز <span dir="LTR">SDS-PAGE</span> و <span dir="LTR">Native-PAGE</span> بر روی ژل پلیآکریلآمید انجام گرفت و تفاوت بین باند ژل در دو روش ارزیابی شد. خالصسازی نوکلئوپروتئین ویروس با روش الکتروالوشن صورت گرفت و نوکلئوپروتئین خالصشده با استفاده از روش الایزا برای بهدست آوردن تیترهای آنتیبادی تولیدشده ارزیابی گردید<span dir="LTR">.</span> برای تأیید نهایی از آزمون اوچترلونی و وسترن بلات استفاده شد.<span style="font-size:9.0pt;"></span><br>
<span style="color:#ffffff;"><strong><span style="background-color:#2980b9;">یافتهها:</span></strong></span> با تعیین وزن مولکولی هر یک از پلیپپتیدها، وزن مولکولی پروتئینهای <span dir="LTR">H9N2</span> بین 30 تا 140 کیلو دالتون و وزن مولکولی نوکلئوپروتئین 60 کیلو دالتون بود. نوکلوپروتئین با روش الکتروالوشن خالص شد. اوچترلونی نشان داد که در رقتهای سرم خام، 1:4 و 1:2، خطوط رسوبی بین سرم و آنتی ژن <span dir="LTR">NP</span> ایجاد شده است. <span dir="LTR">NP</span>-الایزا تشخیص سرولوژی سریع را در رقت 1:20 امکان پذیر کرد. در نهایت، با آزمون وسترن بلات، باند 60 کیلو دالتونی نوکلئوپروتئین تایید شد.<br>
<span style="color:#ffffff;"><strong><span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="background-color:#2980b9;">نتیجهگیری:</span></span></strong></span> <span style="letter-spacing:-.1pt;">نوکلئوپروتئین خالص شده با روش الکترولوشن قابلیت تحریک سیستم ایمنی را دارد که میتوان از آن جهت ساخت کیتهای تشخیصی استفاده نمود.</span></span></span></div>
<div style="direction: ltr; text-align: justify;"><span style="display: none;"> </span><span style="font-family:Times New Roman;"><strong> <span style="background:#1F497D;"><span style="color:white;"><span style="font-size:9.0pt;">Background:</span></span></span> </strong> <span style="color: black;"><span style="font-size:9.0pt;">Influenza viruses cause Avian Influenza (AI) is a serious infectious disease belonging to type A Orthomyxovirus. A viral RNA synthesis is due to an interaction of the nucleoprotein (NP) with the viral polymerase. In the present study, we have evaluated the immunogenicity of avian influenza virus nucleoprotein.</span></span></span></div>
<div style="direction: ltr; text-align: justify;"><span style="font-family:Times New Roman;"><strong> <span style="letter-spacing:-.1pt;background:#1F497D;"><span style="color:white;"><span style="font-size:9.0pt;">Materials & Methods:</span></span></span> </strong> <span style="letter-spacing: -0.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-size:9.0pt;">An Influenza Virus N9H2 subtype A/Chicken Iran/259/2014 was selected. In order to perform electrophoresis and purification of nucleoprotein, the protein concentration of the samples was determined. SDS-PAGE and Native-PAGE electrophoresis on polyacrylamide gel were done and differences in gel bands in two methods were compared. Purification of the virus nucleoprotein performed by electroelution method and purified nucleoprotein were assayed by ELISA to obtain the produced antibody titers. Ouchterlony and western blot tests were used for final approval.</span></span></span></span></div>
<div style="text-align: justify;"></div>
<div style="direction: ltr; text-align: justify;"><span style="font-family:Times New Roman;"><strong><span style="letter-spacing:-.1pt;background:#1F497D;"><span style="color:white;"><span style="font-size:9.0pt;">Results: </span></span></span></strong> <span style="letter-spacing: -0.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-size:9.0pt;">By determining the molecular weight of each polypeptides, the molecular weights of H9N2 proteins were ranged from 30 to 140kDa and the molecular weight of the nucleoprotein was 60kDa. The nucleoprotein was purified by electroelution method. Ouchterlony showed that in serum dilution of 1:2 and 1:4, the sediment lines were formed between the serum and the NP antigen. The NP-ELISA enables rapid serological diagnosis in 1:20.</span></span></span> <span style="letter-spacing: -0.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-size:9.0pt;">Finally, the western blot test confirmed the 60kDa nucleoprotein band.</span></span></span></span></div>
<div style="direction: ltr; text-align: justify;"><span style="font-family:Times New Roman;"><strong><span style="background:#1F497D;"><span style="color:white;"><span style="font-size:9.0pt;">Conclusion: </span></span></span></strong> <span style="color: black;"><span style="font-size:9.0pt;"> The nucleoprotein which was purified by electroelution retained its antigenic property and it could be applied in diagnostic kits.</span></span></span></div>
<div style="direction: ltr;"></div>
<div style="direction: ltr;"><span style="display: none;"> </span></div>
ویروس آنفلوانزا, آنفلوانزای مرغی, نوکلئوپروتئین, وسترن بلات
Influenza virus, Avian influenza, Nucleoprotein, Western blot
643
659
http://ijmm.ir/browse.php?a_code=A-10-1413-1&slc_lang=fa&sid=1
Zahra Sadat
Khademi Sayed Bonadaki
زهرا سادات
خادمی سید بنادکی
mojdehkhademi@yahoo.com
100319475328460015886
100319475328460015886
No
Department of Biochemistry, North Tehran Branch, Islamic Azad University, Tehran, Iran
دانشگاه آزاد اسلامی
Rasool
Madani
رسول
مدنی
madanirasool@gmail.com
100319475328460015887
100319475328460015887
Yes
Department of Proteomics and Biochemistry, Razi vaccine and serum research institute, Agricultural research education and extension organization (AREEO), Karaj, Iran
موسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی
Parviz
Pakzad
پرویز
پاکزاد
parviz_pakzad@yahoo.com
100319475328460015888
100319475328460015888
No
Department of Biochemistry, North Tehran Branch, Islamic Azad University, Tehran, Iran
دانشگاه آراد اسلامی
Fariba
Golchinfar
فریبا
گلچین فر
fafar121349@gmail.com
100319475328460015889
100319475328460015889
No
Department of Proteomics and Biochemistry, Razi vaccine and serum research institute, Agricultural research education and extension organization (AREEO), Karaj, Iran
موسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی
Tara
Emami
تارا
امامی
tara.emami@gmail.com
100319475328460015890
100319475328460015890
No
Department of Proteomics and Biochemistry, Razi vaccine and serum research institute, Agricultural research education and extension organization (AREEO), Karaj, Iran
موسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی