fa ایجاد تغییر در ساختار اولیه گلیکوپروتئین ویروس هاری و جایگزین کردن آن در ساختار ویروس هاری با روش ژنتیک معکوس ویروس شناسی پزشکی Medical Virology مقاله پژوهشی Original Research Article <p style="font-style: normal; text-align: justify;"><span style="font-size:14px;"><span style="font-family:IRANsans;"><strong><span style="color:#ffffff;"><span style="background-color:#008080;">زمینه و اهداف:</span></span></strong>&nbsp;<span dir="RTL">هاری یک بیماری زئونوز کشنده و عامل مولد آن ویروس هاری با ژنوم </span>RNA<span dir="RTL"> تک‌رشته‌ای است. این ویروس می‌تواند سیستم اعصاب مرکزی فرد مبتلا&nbsp; &nbsp;به هاری را آلوده و مختل سازد. گلیکوپروتئین </span>(G)<span dir="RTL"> مهمترین پروتئین در اتصال ویروس به گیرنده‌های سلولی و همچنین ایجاد پاسخ ایمنی بر ضد ویروس در میزبان است. با استفاده از فناوری ژنتیک معکوس می‌توان تغییراتی در ژن کدکنندۀ گلیکوپروتئین ویروس ایجاد و ویروسی با توان ایمنی‌زایی بالاتر و یا بیماری‌زایی کمتر تولید کرد.&nbsp;</span><br> <strong><span style="color:#ffffff;"><span style="background-color:#008080;">مواد و روش کار:</span></span> </strong><span dir="RTL">در این پژوهش با کمک نرم‌افزار در توالی ژنتیکی گلیکوپروتئین ویروس هاری سویه پاستور جهشی در سایت آنتی‌ژنیک اصلی </span>II<span dir="RTL">، در موقعیت اسیدهای آمینه ۴۲-۳۴ طراحی گردید و پس از سنتز، ژن تغییر یافته تعیین توالی گردید و نوکلئوتید جهش‌یافته تأیید شد. سازه حاوی ژن تغییریافته بوسیله دو آنزیم‌ محدودالاثر جایگزین ژن اصلی در ژنوم ویروس هاری شد و کلون گردید. سلول </span>T۷-BHK<span dir="RTL"> تحت پروموتر فاژ </span>T۷ <span dir="RTL">برای بیان ژن گلیکوپروتئین، همزمان با سازۀ ژنی و وکتورهای بیان کنندۀ ژن‌های </span>N, P<span dir="RTL"> و </span>L<span dir="RTL"> ویروس هاری و فول ژنوم ترنسفکت شد. پس از بیان ژن‌های ویروسی و تایید آن، در سلول </span>BSR<span dir="RTL"> کشت داده شد.</span><span style="font-size:9.0pt;"></span><br> <span style="color:#ffffff;"><strong><span style="background-color:#008080;">یافته‌ها</span></strong><span style="background-color:#008080;">:</span></span> <span dir="RTL">بازیابی ویروس نوترکیب</span> <span dir="RTL">حامل </span><span dir="RTL">ژن جهش‌یافتۀ گلیکوپروتئین، پس ازکلون شدن و ترنسفکت در سلول </span>T۷-BHK<span dir="RTL">، </span><span dir="RTL">در سلول </span>BSR<span dir="RTL"> کشت</span><span dir="RTL"> و</span><span dir="RTL"> تکثیر پیدا کرد و پس از استخراج ژنوم آن از سلول، بوسیله تعیین توالی تأیید نهایی گردید.</span><br> <span style="color:#ffffff;"><strong><span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="background-color:#008080;">نتیجه‌گیری:</span></span></strong></span> <span dir="RTL" style="letter-spacing:-.1pt;">با </span><span dir="RTL" style="letter-spacing:-.1pt;">بررسی بر روی توان ایمنی‌زایی یا کاهش قدرت بیماریزایی و همچنین حفظ یا افزایش آنتی‌ژنیسیتۀ ویروس نوترکیب بازیابی شده می‌توان از آن جهت مطالعات تحقیقاتی در ساخت واکسن بهره‌ جست</span><span style="letter-spacing:-.1pt;">.</span></span></span></p> <p style="text-align: justify;"><span style="font-size:16px;"><span style="font-family:Times New Roman;"><span style="color:#ffffff;"><strong><span style="background-color:#008080;">Background:</span></strong></span> Rabies is a deadly zoonotic disease that is caused by the rabies virus. The virus can infect and disrupt the central nervous system of a rabid patient. The rabies virus is a neurotropic single stranded RNA virus. Glycoprotein (G) is the most important protein that binds to the cellular receptors and also induces an immune response against the virus in the host. Using reverse genetics technology, the glycoprotein gene could be modified and a virus with higher immunogenicity or lower pathogenicity.<br> <strong><span style="color:#ffffff;"><span style="background-color:#008080;">Materials & Methods:</span></span></strong> In this study, we designed a mutation in the sequence of glycoprotein gene using a software, on the main antigenic site II of the Pasteur virus strain at the position of 42-34 amino acids. Agene fragment in the cloning vector containing the rabies virus genome was replaced by the synthesized construct containing the altered gene by two restricted enzymes, and then cloned. The T7-BHK cell under the T7 phage promoter control was transfected to express the glycoprotein gene, along with the construct and vectors expressing the N, P, and L genes of the rabies virus as well as the full genome. After expressing and confirming viral genes, it was cultured and amplified in BSR cell.<span dir="RTL"></span><br> <strong><span style="color:#ffffff;"><span style="background-color:#008080;">Results:</span></span> </strong>after cloning and expression of the recombinant virus in the target cell, the vector containing the mutated gene led to the rescue of the recombinant virus. The recombinant virus cultured and propagated in the BSR cells, then the genome was extracted and finally confirmed by sequencing.<br> <strong><span style="color:#ffffff;"><span style="background-color:#008080;">Conclusion:</span></span> </strong>The rescued recombinant virus can be used for research studies or in the vaccines manufacturing, provide that the antigenicity is maintained or increased.</span></span></p> کلمات کلیدی: ویروس هاری,فناوری ژنتیک معکوس,واکسن,ویروس نوترکیب,گلیکوپروتئین Rabies, Reverse genetics, Vaccine, Glycoprotein, Recombinant virus 348 360 http://ijmm.ir/browse.php?a_code=A-10-1357-1&slc_lang=fa&sid=1 Narges Miandehi نرگس میاندهی nmiandehi@gmail.com 100319475328460017768 100319475328460017768 No Department of Biology, Payam-e Noor University, Tehran, Iran گروه زیست شناسی، دانشگاه پیام نور، تهران، ایران kazem bidoki سید کاظم بیدکی drbidoki@yahoo.com 100319475328460017769 100319475328460017769 No Department of Biology, Payame Noor University, Tehran, Iran گروه زیست شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه پیام نور واحد، تهران، ایران Mehdi Ajorloo مهدی آجورلو ajorloo.m@lums.ac.ir 100319475328460017770 100319475328460017770 No Department of Clinical Laboratory Sciences, School of Allied Medicine, Lorestan University of Medical Sciences, Khorramabad, Iran. گروه علوم آزمایشگاهی، دانشکده پیراپزشکی، دانشگاه علوم پزشکی لرستان، خرم آباد، ایران Alireza Gholami علیرضا غلامی a.gholami@pasteur.ac.ir 100319475328460017771 100319475328460017771 Yes The National Center for Reference and Research on Rabies, Virology Department, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran بخش واکسن هاری انسانی، مجتمع تولیدی تحقیقاتی، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران