fa استخراج وزیکول‌های غشای خارجی سویه واکسینال بردتلا پرتوسیس به‌عنوان اولین قدم مطالعاتی کاندیدای واکسن علیه عفونت سیاه سرفه باکتری شناسی پزشکی Medical Bacteriology مقاله پژوهشی Original Research Article <p style="font-style: normal; text-align: justify;"><span style="font-size:14px;"><span style="font-family:IRANsans;"><strong><span style="color:#ffffff;"><span style="background-color:#008080;">زمینه و اهداف:</span></span> </strong>پرتوسیس هنوز به‌عنوان یکی از مشکلات بهداشت جهانی مطرح است. افزایش این بیماری در دهۀ اخیر به دلیل جایگزینی واکسن‌های سلولی دارای عوارض جانبی با واکسن ایمن‌تر آسلولار و همچنین تنوع ژنتیکی باکتری می‌باشد. با توجه به اینکه وزیکول‌های غشای خارجی (<span dir="LTR">OMVs</span>) بدست آمده از <em>بردتلا پرتوسیس</em> حاوی ایمونوژن‌های سطحی در ساختار خود است، می‌تواند به‌عنوان کاندیدای کاربردی واکسن پرتوسیس مطرح شود.<strong><span style="font-size:9.0pt;"></span></strong><br> <strong><span style="color:#ffffff;"><span style="background-color:#008080;">مواد و روش کار:</span></span> </strong>سویه واکسینال <span dir="LTR">BP۱۳۴</span> <em>بردتلا پرتوسیس</em> در شرایط استاندارد کشت داده شد و وزیکول‌ها با روش تغییر یافته و بدون استفاده از اولتراسانتریفیوژ استخراج شدند. وزیکول‌های جدا شده توسط میکروسکوپ الکترونی عبوری بررسی و میزان غلظت پروتئین با استفاده از روش برادفورد مشخص گردید. بررسی بیان فاکتورهای بیماری‌زا با استفاده از<span dir="LTR">SDS-PAGE </span>&nbsp;و صحت بیان پروتئین‌ها با تکنیک وسترن ایمونوبلات تایید شدند. در پایان آزمون پیروژنی و سمیت غیر طبیعی بر روی وزیکول‌های استخراج شده انجام شد.<span style="font-size:9.0pt;"></span><br> <span style="color:#ffffff;"><strong><span style="background-color:#008080;">یافته‌ها</span></strong><span style="background-color:#008080;">:</span></span> ریخت‌شناسی وزیکول‌ها با اندازه بین ۴۰ تا ۲۰۰ نانومتر تایید گردید. غلظت پروتئین وزیکول‌های استخراج شده ۶۰۰ میکروگرم مشخص شد. بررسی بیان با <span dir="LTR">SDS-PAGE&nbsp;</span>&nbsp;و وسترن وجود فاکتورهای بیماری‌زا با حضور باندهای پرتوسیس توکسین، فیلامنتوس هماگلوتینین و پرتاکتین را با استفاده از آنتی‌بادی‌های مونوکلونال در <span dir="LTR">OMVs</span> سویه واکسینال تایید کرد. نتیجه آزمون پیروژنی و سمیت غیر طبیعی روی نمونه‌ها منفی بود.<br> <strong><span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:#ffffff;"><span style="background-color:#008080;">نتیجه‌گیری:</span></span></span></strong> <span style="letter-spacing:-.1pt;">نتایج نشان می‌دهد که روش ارائه شده، روشی ساده و کارآمد برای جداسازی </span><span dir="LTR" style="letter-spacing:-.1pt;">OMVs</span> <em><span style="letter-spacing:-.1pt;">بردتلا پرتوسیس</span></em><span style="letter-spacing:-.1pt;"> است و </span><span dir="LTR" style="letter-spacing:-.1pt;">OMV</span> <span style="letter-spacing:-.1pt;">جدا شده می‌تواند به‌عنوان کاندیدای نسل جدیدی از واکسن پرتوسیس به تنهایی یا در ترکیب با ادجوانت‌ها جهت طراحی واکسن‌های آسلولار در آینده مطرح باشد.</span></span></span></p> <p style="text-align: justify;"><span style="font-size:16px;"><span style="font-family:Times New Roman;"><span style="color:#ffffff;"><strong><span style="background-color:#008080;">Background:</span></strong></span> Pertussis is still one of the major public health problems. The increase of the disease emerged in recent decades due to the replacement of the reactogenic whole cell vaccine with the safer acellular vaccine and the genetic diversity of the bacterium. As outer membrane vesicles (OMVs) obtained from <em>Bordetella pertussis </em>contains surface immunogenic antigen in its structure, it has an acceptable characteristic that could be considered as a good candidate for pertussis vaccine.<br> <span style="color:#ffffff;"><strong><span style="background-color:#008080;">Materials & Methods:</span></strong></span> Vaccinal strain BP134 strain of <em>B. pertussis</em> was cultured under standard conditions and OMVs were isolated by modifying the method without the use of ultracentrifuge. The isolated vesicles were examined by transmission electron microscopy and protein content was measured by the Bradford method. The expression of virulence factors was confirmed by SDS-PAGE and protein expression was confirmed by Western immunoblot. Pyrogenicity test and abnormal toxicity test were performed on extracted vesicles.<span dir="RTL"></span><br> <strong><span style="color:#ffffff;"><span style="background-color:#008080;">Results:</span></span> </strong>The morphology of the vesicles was confirmed in the range of 40 to 200 nm. The protein concentration of the extracted vesicles was determined as 600 &mu;g. Expression analysis by SDS-PAGE and western blot confirmed the presence of virulence factors, pertussis toxin, filamentous hemagglutinin, and pertactin using monoclonal antibodies in OMVs of the vaccinal strain. Pyrogenicity test and abnormal toxicity test were negative.<br> <strong><span style="color:#ffffff;"><span style="background-color:#008080;">Conclusion:</span></span> </strong>The proposed method is a simple and efficient method for isolation of the <em>B. pertussis</em> OMVs. The OMVs extracted from <em>B. pertussis</em> could be a candidate for a new generation of pertussis vaccine alone or in combination with adjuvants to design future acellular vaccines.</span></span></p> بردتلا پرتوسیس, واکسن پرتوسیس, SDS-PAGE, وسترن ایمونوبلات Bordetella pertussis, pertussis vaccine, SDS-PAGE, Western immunoblot 213 226 http://ijmm.ir/browse.php?a_code=A-10-1348-1&slc_lang=fa&sid=1 Maryam Sadat Soltani مریم سادات سلطانی m.soltani62@yahoo.com 100319475328460015274 100319475328460015274 No Department of Microbiology and Microbial Biotechnology, Faculty of Life Sciences and Biotechnology, Shahid Beheshti University, Tehran, Iran بخش میکروب شناسی و بیوتکنولوژی میکروبی، دانشکده علوم زیستی و بیوتکنولوژی، دانشگاه شهید بهشتی، تهران، ایران Fereshteh Eftekhar فرشته افتخار f-eftekhar@sbu.ac.ir 100319475328460015275 100319475328460015275 Yes Department of Microbiology and Microbial Biotechnology, Faculty of Life Sciences and Biotechnology, Shahid Beheshti University, Tehran, Iran بخش میکروب شناسی و بیوتکنولوژی میکروبی، دانشکده علوم زیستی و بیوتکنولوژی، دانشگاه شهید بهشتی، تهران، ایران Fereshteh Shahcheraghi فرشته شاه‌چراغی shahcheraghifereshteh@yahoo.com 100319475328460015276 100319475328460015276 No Department of Bacteriology, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran بخش باکتری‌ شناسی، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران Mojtaba Noofeli مجتبی نوفلی noofeli1234@yahoo.com 100319475328460015277 100319475328460015277 No Razi Vaccine and Serum Research Institute, Agricultural research, Education and Extension Organization (AREEO), Karaj, Iran موسسه تحقیقات واکسن و سرم‌ سازی رازی، سازمان تحقیقات، آموزش و ترویج کشاورزی (تات)، کرج، ایران Seyed Reza Banihashemi سید رضا بنی هاشمی reza7471@gmail.com 100319475328460015278 100319475328460015278 No Department of Immunology, Razi Vaccine and Serum Research Institute, Agricultural research, Education and Extention organization(AREEO), Karaj, Iran بخش ایمنی‌ شناسی، موسسه تحقیقات واکسن و سرم‌ سازی رازی، سازمان تحقیقات، آموزش و ترویج کشاورزی (تات)، کرج، ایران