fa کلونینگ و تعیین توالی ژن ساکول استافیلوکوکوس اورئوس بیوتکنولوژی میکروبی Microbial Biotechnology مقاله پژوهشی Original Research Article <div align="right" style="direction: rtl"><b>زمینه و اهداف:</b> عفـونت های طبیعی استافیلـوکوکوسی و واکسن های حـاوی سلول کامـل باکتـری توانایی کمی در برانگیختـن آنتـی بادی های میزبان دارند. در حالی که آنتی بادی های اختصاصی بر علیه آنتی ژن های نوترکیب استافیلوکوکوسی بسیار محافظت کننده هستند. ساکول آنتی ژنی است که به تازگی شناخته شده است و اطلاعات اندکی در مورد ویژگی های ساختاری و ایمونولوژیکی آن وجود دارد. هدف این مطالعه کلون کردن و تعیین توالی ژن ساکول <i>استافیلوکوکوس اورئوس</i> می باشد. <br><b>روش بررسی:</b> پس از تهیـه پرایمرهای اختصاصی قطعـه ای از ژن مورد نظر با روش PCR تکثیر یافت و به همراه پلاسمید با آنزیم های NdeI و XhoI، به صورت انتهاهای چسبان تولید گردیدند. پس از ترانسفورم pET21asacol به درون باکتری حد واسط <i>اشریشیا کلی</i>، پلاسمید نوترکیب با روش های هضم آنزیمی و تعیین ترادف ارزیابی شد. در نهایت ژن sacol با استفاده از نرم افزار مورد ارزیابی قرار گرفت. <br><b>یافته ها:</b> ژن ساکول به طول 723 جفت باز با توالی صحیح، کلون گردید. هضم آنزیمی با موفقیت انجام شد بدین ترتیب که ساکول به طور کامل از پلاسمید جدا گردید. تعیین توالی شباهت 100 درصد را با ژن الگوی اولیه از <i>استافیلوکوکوس اورئوس</i> نشان داد. بررسی نرم افـزاری حاکی از آن بود کـه این ژن پروتئینی به وزن مولکولی 32 کیلو دالتون را کد کرده و دارای 267 اسید آمینه می باشد که در انتهای –N ترمینال دارای یک C51 پپتیداز و در ساختار ثانویه خود دارای 1 مارپیچ آلفا و 14 صفحه بتا می باشد. <br><b>نتیجه گیری:</b> ساکول در اکثر سویه های <i>استافیلوکوکوس اورئوس</i> حفظ شده است و ممکن است در اکثر عفونت های استافیلوکوکوسی نقش داشته باشد. مطالعه نقش ایمونولوژیک و بررسی تنظیم بیان آن در مطالعات آتی اهمیت آن را فاش خواهد ساخت. </div> <b>Background & Objectives: </b>Natural staphylococcal infections and vaccines based whole bacteria lead to poor antibody responses, but recent research reveals that specific antibodies based on recombinant staphylococcal antigens are much more protective. Sacol is a novel antigen that its structural and immunological traits poorly characterized. This research aimed to clone of sacol, a novel gene from <i>Staphylococcus aureus.</i> <br><b>Material and Methods:</b> The specific primers with suitable restriction sites were designed and sacol amplified by PCR. The sacoland plasmid were produced as sticky ends by restriction enzymes NdeI and XhoI. To amplify the recombinant plasmid the pET21sacol transferred into competent cell <i>E.coli</i> TOP10. The recombinant plasmid harvested from the host and analyzed by restriction enzymes and sequencing. Finally, sacolgene analyzed by bioinformatics tools. <br><b>Results:</b> The sacolgene has 723bp which amplified, cloned and sequenced successfully. Sacol is highly conserved in <i>Staphylococcus aureus</i> strains. Moreover, software analysis shows that sacolencodes a protein with 32KDa molecular weight (267 amino acids) which has similarity with C51 peptidase in N-terminal with one alpha helix and 14 beta sheets. <br> <b>Conclusion:</b> the sacolgene is conserved in majority of <i>Staphylococcus aureus</i> strains and may exist and express in most of staphylococcal infections.The role and regulation of the gene is thus of great interest. استافیلوکوکوس اورئوس، ساکول، کلونینگ Staphylococcus aureus,sacol, cloning 9 14 http://ijmm.ir/browse.php?a_code=A-10-1-83&slc_lang=fa&sid=1 Shahoo Menbari شاهو منبری 1003194753284600464 1003194753284600464 No Department of Pathobiology, School of Public Health, Tehran University of Medical Sciences, Tehran گروه پاتوبیولوژی، دانشکده بهداشت، دانشگاه علوم پزشکی تهران Mohammadreza Pourmand محمدرضا پورمند mpourmand@tums.ac.ir 1003194753284600465 1003194753284600465 Yes Department of Pathobiology, School of Public Health, Tehran University of Medical Sciences, Tehran گروه پاتوبیولوژی، دانشکده بهداشت، دانشگاه علوم پزشکی تهران Mohhamad Hassan Shirazi محمدحسن شیرازی 1003194753284600466 1003194753284600466 No Department of Pathobiology, School of Public Health, Tehran University of Medical Sciences, Tehran گروه پاتوبیولوژی، دانشکده بهداشت، دانشگاه علوم پزشکی تهران Nadia Mardani نادیا مردانی 1003194753284600467 1003194753284600467 No Department of Pathobiology, School of Public Health, Tehran University of Medical Sciences, Tehran گروه پاتوبیولوژی، دانشکده بهداشت، دانشگاه علوم پزشکی تهران