fa ارزیابی تست تشخیص سریع توکسوپلاسموز به روش ایمونوکروماتوگرافی با استفاده از نانو ذرات طلا و آنتی‌ژن نوترکیب gra7 انگل شناسی پزشکی Medical Parasitology مقاله پژوهشی Original Research Article <strong><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:9.0pt;">زمینه و اهداف: </span></span></strong><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:9.0pt;">دشواری تشخیص عفونت با انگل توکسوپلاسما موجب شده این بیماری به‌عنوان چالشی در سلامت انسان مطرح باشد. از آنجا که پروتئین </span></span><em><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">gra7</span></span></em><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:9.0pt;"> می‌تواند کاندیدای مناسبی برای تشخیص این بیماری در فاز حاد باشد، مطالعۀ حاضر با هدف تولید آن در سیستم باکتریایی و استفاده در روش تشخیص سریع مبتنی بر ایمونوکروماتوگرافی انجام گرفت.</span></span><strong><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:9.0pt;"></span></span></strong><br> <strong><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:9.0pt;">مواد و روش کار: </span></span></strong><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:9.0pt;">پس از تکثیر انگل و استخراج </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">DNA</span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:9.0pt;">، ژن </span></span><em><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">gra7</span></span></em> &nbsp;<span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:9.0pt;">با کمک پرایمرهای اختصاصی </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">PCR</span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:9.0pt;"> و در داخل وکتور بیانی </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">pET-32a (+)</span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:9.0pt;"> کلون گردید</span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">.</span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:9.0pt;"> سپس پلاسمید مورد نظر به میزبان نهایی (</span></span><em><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">E.coli Rosetta DE3</span></span></em><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:9.0pt;">) وارد و بیان شد. پروتئین از سلول باکتریایی لیز شده با ستون کروماتوگرافی رزینی </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">Ni-NTA</span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:9.0pt;"> تخلیص شد.&nbsp; آنتی هیومن آنتی‌بادی </span></span>&nbsp;<span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:9.0pt;">متصل به نانوذرات طلا و خط تست و خط کنترل بروی به ترتیب لایه کونژگه و کاغذ نیتروسلولز پاشیده شد و سپس تمامی لایه های آماده شده بروی هم مونتاژ شد و تست نواری مونتاژ شده با استفاده از سرم بیماران و افراد سالم ارزیابی گردید.</span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:9.0pt;"></span></span><br> <strong><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:9.0pt;">یافته‌ها</span></span></strong><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:9.0pt;">:</span></span> <span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:9.0pt;">نتایج الکتروفورز و وسترن بلاتینگ نشان‌دهندۀ بیان مناسب و استخراج موفقیت‌آمیز پروتئین </span></span><em><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">gra7</span></span></em><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:9.0pt;"> در سیستم پروکاریوتی بود.حساسیت و اختصاصیت تست استریپ در این مطالعه به ترتیب 100 درصد و 96/7 درصد تعیین شد. مدت زمان پایداری کیت در دمای</span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">&deg;C </span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:9.0pt;">37 نیز معادل 16 هفته محاسبه شد.</span></span><br> <strong><span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:9.0pt;">نتیجه‌گیری:</span></span></span></strong> <span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:9.0pt;">انتخاب آنتی‌ژن مناسب براساس شاخصه‌های مهم سلولی و بالینی انگل همراه با بهره‌گیری از نتایج آزمون‌های قبلی منجر به ساخت و ارزیابی موفقیت‌آمیز تست تشخیص سریع توکسوپلاسموز گردید.</span></span></span> <strong>Background: </strong>&nbsp;One of the most important complications of toxoplasmosis is its early diagnosis. It seems that GRA7 protein can be a good candidate for detection of the acute phase in Toxoplasmosis. Accordingly, the present study aimed to diagnose toxoplasmosis via a newly immunochromatographic test using recombinant antigen <em>gra7</em>.<br> <strong>Methods: </strong>&nbsp;The parasite was cultured in mice and then were used for DNA extraction. The <em>gra7</em> gene was amplified by PCR and cloned into the pET-32a (+) plasmid. Thereafter, the recombinant vector was transferred into the <em>Escherichia coli Rosetta </em>strain and <em>gra7</em> was detected via SDS-PAGE and western blotting. The bacterial lysate was used to purify the protein by Ni-NTA affinity chromatography .Anti-human gold conjugated antibody, test line and control line were injected to conjugate pad and nitrocellulose membrane, respectively, and all the layer were assembled. By using serum of patients and healthy individuals, manufactured kits were evaluated.<br> <strong>Results: </strong>&nbsp;Our results indicated that the selected gene was correctly cloned and the protein of interest was produced and purified. The test revealed sensitivity and specificity of 100 and 96.7 percent, respectively. The kit was also shown to be stable over 16 weeks in 37&deg;C.<br> <strong>Conclusion: </strong>&nbsp;The choice of antigen based on cellular and clinical features of the parasite, as well as the use of previous outcomes yielded to develop a rapid diagnostic test for toxoplasmosis.<br> &nbsp; توکسوپلاسموز,آنتی ژن GRA7,تست تشخیص سریع,نانوذرات طلا Toxoplasmosis, Immunochromatoga, gra7 antigen, RPD, Gold nanoparticles 101 115 http://ijmm.ir/browse.php?a_code=A-10-1314-1&slc_lang=fa&sid=1 Hassan Morovati حسن مروتی h.morovati@rvsri.ac.ir 100319475328460014813 100319475328460014813 No Department of Quality Control, Razi Vaccine and Serum Research Institute, Agricultural Research, Education and Extension Organization (AREEO), Karaj, Iran بخش کنترل کیفی ٍ موسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی ٍ سازمان تحقیقات، ترویج و آموزش کشاورزی، کرج، ایران Seyyed javad Seyyedtabaei سید جواد سیدطبایی seyyed_tabaei@yahoo.co.in 100319475328460014814 100319475328460014814 No Department of Parasitology and Mycology, Faculty of Medicine, Shahid Beheshti University of Medical Sciences, Tehran, Iran گروه انگل شناسی و قارچ شناسی،دانشکده پزشکی،دانشگاه علوم پزشکی شهید بهشتی،تهران ، ایران Mehrdad Gholamzad مهرداد غلامزاد mgholamzad@iautmu.ac.ir 100319475328460014815 100319475328460014815 Yes Department of Microbiology and Immunology, Faculty of Medicine, Tehran Medical Sciences, Islamic Azad University, Tehran, IRAN گروه میکروب شناسی و ا یمنی شناسی، دانشکده پزشکی،علوم پزشکی تهران، دانشگاه آزاد اسلامی،تهران، ایران