TY - JOUR T1 - Optimal Conditions for Extraction and Purification of Penicillinase Enzyme TT - شرایط بهینه در استخراج و خالص سازی آنزیم پنی سیلیناز JF - Iran-J-Med-Microbiol JO - Iran-J-Med-Microbiol VL - 15 IS - 6 UR - http://ijmm.ir/article-1-1474-fa.html Y1 - 2021 SP - 684 EP - 691 KW - Bacillus licheniformis KW - Optimum conditions KW - Penicillinase KW - Purification N2 - زمینه و اهداف: مطالعه حاضر با هدف بررسی شرایط بهینه برای استخراج و خالص سازی آنزیم پنی سیلیناز انجام شد. منبع آنزیم، با کتری ۶۳۴۶Bacillus licheniformis بدست آمده سازمان پژوهش­ های علمی­- صنعتی ایران بود. مواد و روش کار: باکتری B. licheniformisدر محیطی حاوی نمک های معدنی، ترکیبات نیتروژن دار و منابع کربنی کشت داده شد. بعد از برداشت و آماده سازی سوسپانسیون باکتری، تخریب دیواره سلولی باکتری به روش تلفیقی از لیزوزیم و اولتراسونیکاسیون ضعیف جهت تهیه عصاره خام سلولی، صورت گرفت. سپس با روش کروماتوگرافی و الکتروفورز مقدار آنزیم تعیین شد. علاوه بر این، بهترین دمای رشد و بهترین زمان انکوباسیون بر اساس میزان جذب نمونه‌ها در طول موج ۲۴۰ نانومتر، میزان فعالیت آنزیمی ، بهینه‌سازی شدت هوادهی، بهینه سازی زمان تولید آنزیم و pH بهینه مشخص شد. یافته ها: در هر لیتر کشت حدود ۸ گرم سلول بازیابی شد. pH بهینه ۶/۵ تعیین گردید. ارزیابی پایداری حرارتی آنزیم در زمان‌های مختلف نشان داد که، آنزیم برای بیش از ۱ ساعت در دمای ۲۰ تا ۴۵ درجه سانتی‌گراد پایدار است، در حالی که در ۶۰ درجه سانتی‌گراد در ۱۰ دقیقه غیرفعال می‌شود. همچنین بهترین زمان انکوباسیون برای باکتری ۹ ساعت در دمای ۳۰ درجه سانتی گراد است. همچنین از لحاظ شدت هوا­دهی بالاترین میزان تولید آنزیم در ارلن­ های ۲۵۰ میلی­ لیتری با حجم ۵۰ میلی­ لیتر محیط کشت، در دورRPM ۲۰۰، به دست آمد. میزان تولید آنزیم در این شرایط به unit/ml ۲۳۹۴ رسید، هوا دهی بیشتر باعث اثر مهار کنندگی اکسیژن و کاهش فعالیت آنزیم تولید شده، گردید. نتیجه‌گیری: باکتری B. licheniformis میکروارگانیسم مناسبی برای استخراج آنریم پنی سیلیناز است. M3 10.30699/ijmm.15.6.684 ER -