سال 13، شماره 2 - ( خرداد - تیر 1398 )
جلد 13 شماره 2 صفحات 150-142 |
برگشت به فهرست نسخه ها
Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
Beig M, Arabestani M R. Investigation of MexAB-OprM efflux pump gene expression in clinical isolates of pseudomonas aeruginosa isolated from Intensive Care Unit. Iran J Med Microbiol 2019; 13 (2) :142-150
URL: http://ijmm.ir/article-1-937-fa.html
URL: http://ijmm.ir/article-1-937-fa.html
بیگ معصومه، عربستانی محمد رضا. بررسی سطح بیان افلاکس پمپ MexAB-OprM در ایزوله‌های بالینی سودوموناس آئروژینوزا جدا شده از بخش مراقبت‌های ویژه. مجله میکروب شناسی پزشکی ایران. 1398; 13 (2) :142-150
1- گروه میکروبشناسی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی همدان، همدان، ایران
2- گروه میکروبشناسی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی همدان، همدان، ایران ، mohammad.arabestani@gmail.com
2- گروه میکروبشناسی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی همدان، همدان، ایران ، mohammad.arabestani@gmail.com
متن کامل [PDF 1102 kb]
(1866 دریافت)
| چکیده (HTML) (6377 مشاهده)
سودوموناس آئروژینوزا باکتری گرم منفی و پاتوژن فرصت‌طلب است که در سال‌های اخیر به عنوان یکی از مهمترین پاتوژن‌های عفونت‌های بیمارستان شناخته شده است. این باکتری توانائی ایجاد طیف وسیعی از بیماری‌ها از جمله عفونت‌های مجاری ادراری، سیستم تنفسی، پوست، عفونت بافت‌های نرم، باکتریمی، عفونت‌های سیستمیک و هم‌جنین عفونت‌های کشنده در افراد مبتلا به ضعف سیستم ایمنی و افراد سرطانی دارد (1). این باکتری دومین عامل شایع و عامل 21% عفونت‌های بیمارستانی به ویژه عفونت در بخش مراقبت‌های ویژه است. از جمله فاکتورهای خطر مهم در این بخش‌ها برای ابتلاء به عفونت، نامساعد بودن شرایط بیماران، بستری شدن طولانی مدت و استفاده از وسایل پزشکی از جمله کتترها و مصرف آنتی‌بیوتیک‌های وسیع‌الطیف در بیماران بستری در این بخش‌ها می‌باشد (4-2). بروز مقاومت آنتی‌بیوتیکی در بخش‌های مختلف بیمارستان به ویژه ICU مشکلات زیادی را برای درمان عفونت‌های باکتریائی ایجاد کرده است. اگر چه کرباپنم‌ها از جمله آنتی‌بیوتیک‌های مؤثر برای درمان عفونت‌های سودوموناس آئروژینوزا هستند، مقاومت به کرباپنم‌ها به ویژه در بخش ICU به یک نگرانی در سراسر جهان تبدیل شده است که موجب افزایش میزان مرگ و میر در این بخش می‌شود (5). به طور کلی مقاومت سودوموناس آئروژینوزا به آنتی‌بیوتیک‌های گروه کارباپنم به علت ترکیبی از چندین عامل از جمله نفوذپذیری پایین پورین‌های غشا خارجی (OprD)، وجود AmpC کروموزومی، حضورآنزیم‌های هیدرولیز کننده کارباپنم و افزایش بیان سیستم‌های افلاکس می‌باشد. سیستم‌های افلاکس پمپ نقش مهمی در مقاومت آنتی بیوتیکی ایزوله‌های سودوموناس آئروژینوزا به آنتی‌بیوتیک‌های مختلف دارند (6). سودوموناس آئروژینوزا دارای پتانسیل بیان 12 نوع پمپ افلاکس چند دارویی به نام Mex می‌باشد. سیستم افلاکس Mex متعلق به خانواده RND است. پنج پمپ به نام‌های MexCD-oprj،MexAB-OprM، MexJK-OprM، MexXY-OprM MexEF-oprN مهمترین پمپ‌های افلاکس این خانواده هستند (7).
MexAB-OprM تنها پمپ ترشحی است که در تمامی ایزوله‌های سودوموناس آئروژینوزا یافت شده و موجب مقاومت ذاتی این باکتری‌ها به آنتی بیوتیک‌ها می‌گردد (8). ارتاپنم، مروپنم و دوریپنم سوبسترای سیستم افلاکس MexAB-OprM، هستند. لذا افزایش بیان سیستم افلاکس پمپ MexAB-OprM نقش مهمی در مقاومت آنتی‌بیوتیکی ایزوله‌های سودوموناس آئروژینوزا به آنتی‌بیوتیک‌های بتالاکتام و به ویژه کارباپنم‌ها را دارد (9). بنابراین شناسایی مکانیسم‌های دخیل در مقاومت به کرباپنم‌ها می‌تواند در کنترل، مدیریت و درمان به موقع و مناسب عفونت‌های ایجاد شده توسط سودوموناس آئروژینوزا مؤثر باشد. لذا هدف از این مطالعه ارزیابی سطح بیان ژن‌های افلاکس پمپ MexAB-OprM در ایزوله‌های بالینی سودوموناس آئروژینوزا جدا شده از بخش ICU می‌باشد.
جداسازی و شناسایی ایزوله‌های سودوموناس آئروژینوزا
در طی دوره‌ی 7 ماهه از آبان 96 تا اردیبهشت 97 ایزوله‌های باکتریایی سودوموناس آئروژینوزا از بیماران بستری در بخش ICU بیمارستان‌های بعثت، بهشتی و سینا شهر همدان جمع‌آوری شدند. سپس ایزوله‌های باکتریایی به آزمایشگاه میکروب شناسی دانشکده پزشکی، منتقل شدند. جهت تأیید ایزوله‌های سودوموناس آئروژینوزا جمع‌آوری شده، از تست‌های بیوشیمیایی مختلف شامل رشد در محیط مک‌کانکی آگار، تست اکسیداز، کاتالاز، واکنش در محیط TSI، تست OF، بررسی تحرک، رشد در محیط ستریماید آگار و رشد در دمای 42 درجه سلسیوس هینتون آگار استفاده شد (10). در نهایت برای تأیید ایزوله‌های سودوموناس آئروژینوزا PCR برای ژن acsA انجام گرفت (11).
تست حساسیت آنتی‌بیوتیکی
مقاومت آنتی‌بیوتیکی ایزوله‌های سودوموناس آئروژینوزا، به روش استاندارد دیسک دیفیوژن و مطابق با روش Clinical and Laboratory Standards Institute ((CLSI 2018 انجام گرفت (12). دیسک‌های آنتی‌بیوتیکی از شرکت MAST انگلستان خریداری شدند و شامل پیپراسیلین (μg100)، پیپراسیلین/تازوباکتام (μg 100/10)، سفتازیدیم (μg30)، سفتریاکسون (μg 30)، آزترونام (μg30)، ایمیپنم (μg10)، مروپنم (μg10)، دوریپنم (μg10)، آمیکاسین (μg30)، سیپروفلوکساسین (μg 5) و تتراسایکلین (μg30) بودند. از سودوموناس آئروژینوزا ATCC 27853 به عنوان سویهٔ کنترل استفاده شد.
تعیین حداقل غلظت مهاری (MIC) ایمیپنم:
در این روش حداقل غلظت مهاری برای ایمیپنم با استفاده از نوار E-test (شرکت MAST انگلستان) انجام شد (13).
استخراج ژنوم و انجام روش PCR
استخراج DNA به روش بویلینگ انجام شد (14). آزمـون PCR برای ژن‌های MexA، MexB، OprM، و ژن acsA به عنوان Housekeeping gene انجام شد (جدول 1). سویه سودوموناس آئروژینوزا ATCC 27853 به عنوان کنترل مثبت استفاده شد. در نهایت الکتروفـورز محصولات PCR بـر روی ژل آگـارز 1 درصـد انجام شد (15).
انتخاب ایزوله‌ها:
از میان 33 ایزوله جدا شده از بیماران بستری در بخش ICU، 20 ایزوله بالینی سودوموناس آئروژینوزا بر اساس نمونه‌گیری طبقه بندی شده (نوع نمونه‌های بالینی، حضور ژن‌های مختلف کارباپنماز و الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی، به عنوان مثال نمونه‌هایی با کاهش حساسیت به آنتی‌بیوتیک‌ها به ویژه کرباپنم) انتخاب شدند.
استخراج RNA و سنتز cDNA
استخراج RNA با استفاده از کیت استخراج RNA (,RiboEx شرکت, Gene All کره) انجام شد تا سطح بیان ژن‌های MexA، MexB، OprM و rpoD به عنوان یک ژن کنترل داخلی ایزوله‌های مختلف سودوموناس آئروژینوزا با استفاده از PCR Real Time تعیین شود. سنتز cDNA با استفاده از کیت سنتز cDNA (شرکت,Gene All کره) و پرایمر هگزامر (شرکت کیاژن- ایران) انجام شد. RNA استخراج شده تا زمان استفاده در دمای 20- درجه سلسیوس نگهداری شد (16).
بررسی سطح بیان ژن‌های مورد مطالعه با استفاده از Real-Time PCR
به منظور برسی کمی بیان، ژن‌های MexA، MexB، OprD و rpoD (به عنوان ژن کنترل داخلی) با استفاده از کیت شرکت Gene All، کره و پرایمرهای ذکر شده در جدول 1 انجام شد. مطابق پروتکـل، مـسترمیکس، پرایمرهـا و cDNA سنتز شده در حجم مناسـبی مخلـوط شـده و توسـط دسـتگاه Real-time PCR واکنش انجام گردیـد. سودوموناس آئروژینوزا ATCC 27853به عنوان کنترل مثبـت مـورد اسـتفاده قـرار گرفـت. بیــان ژن‌های MexA، MexB، OprM بــا بیــان ژن rpoD به عنــوان ژن house keeping مقایسه گردید. از فرمـول مرجـع نـسبی بیـان ((θΔCt بـرای تعیـین بیـان ژن مـورد نظـر استفاده گردیـد (17).
آنالیز آماری
آزمون آماری One way ANOVA بـرای مقایـسه تفـاوت معنی دار مقادیر به دست آمده از بیـان ژن‌های مورد در سویه استاندارد (که واجـد مقـدار 1 مـی‌باشـد) و ایزوله‌های بالینی مورد استفاده قرار گرفت. مقادیر کمتر از 0/05، بـه عنـوان معنـی‌دار در نظر گرفته شـد. در این مطالعه از نـرم افـزار آمـاری 16SPSS استفاده شد.
جمع‌آوری ایزوله‌های بالینی
در مجموع 33 نمونه سودوموناس آئروژینوزا از بیماران بستری در بخش ICU جمع‌آوری شدند.
الگوی حساسیت ضد میکروبی ایزوله‌ها: نتایج آزمایش‌های حساسیت ضد میکروبی نشان داد که بالاترین مقاومت به سفتریاکسون (63/63%، 21 = n) و کمترین مقاومت در برابر پیپراسیلین (33/33% 11n =) بود. (جدول 2). نتایج MIC ایمیپنم نشان داد که 14 (42/42%) ایزوله مقاوم و 19 (57/57%) ایزوله حساس به ایمیپنم بودند.
شکل 1. نتیجه الکتروفورز تکثیر محصولات ژن استاندارد acsA با طول 823 جفت باز. چاهک 1: مارکر فرمانتس با وزن مولکولی 1 کیلو باز، چاهک 2: از سمت چپ، باکتری استاندارد سودوموناس آئروژینوزا ATCC 27853 بعنوان کنترل مثبت، چاهک‌های شماره 3 الی 6: ایزوله‌های باکتریایی سودوموناس آئروژینوزا
شکل 2. بیان ژن MexA
شکل 3. بیان ژن MexB
شکل 4. بیان ژن OprM
سودوموناس آئروژینوزا از جمله پاتوژن‌های مهم در عفونت‌های بیمارستانی به ویژه در بخش ICU می‌باشد که به آنتی‌بیوتیک‌های مختلف از جمله کارباپنم‌ها مقاوم می‌باشد (22). شیوع ایزوله‌های سودوموناس آئروژینوزا مقاوم به چند دارو (MDR) در سال‌های اخیر در سراسر جهان افزایش یافته است (23). در این مطالعه میزان مقاومت نسبت به آنتی‌بیوتیک‌های ایمیپنم، مروپنم و دوریپنم به ترتیب 45/45%، 39/39% و 42/42% می‌باشد که مشابه با مطالعه Siasi و همکاران در تهران بود (24).
آنتی‌بیوتیک‌های کارباپنم خط اول درمان برای بیشتر عفونت‌های باکتریایی به‌خصوص سودوموناس آئروژینوزا می‌باشند، تأثیر این آنتی‌بیوتیک‌های مهم به‌دلیل گسترش باکتری‌های مقاوم به کارباپنم به ویژه در بخش ICU کاهش یافته است (25). بنابراین شناسایی سریع و دقیق ایزوله‌های سودوموناس آئروژینوزا مقاوم به کارباپنم‌ها و شناسایی مکانیسم‌های مقاومتی به این آنتی‌بیوتیک‌ها در بخش ICU برای درمان مناسب و پیشگیری از انتشار این ایزوله‌ها ضروری است (26). نتایج این مطالعه نشان می‌دهد که بیشترین میزان مقاومت آنتی‌بیوتیکی در برابر سفتریاکسون 63/63% و کمترین مقاومت در برابر پیپراسیلین 33/33% بود. همچنین از میان آنتی‌بیوتیک‌های کارباپنم بیشترین مقاومت نسبت به ایمیپنم 45/45% و کمترین مقاومت نسبت به مروپنم 39/39% می‌باشد. در مطالعه‌ای که توسط Mihani و همکاران که بر روی 100 ایزوله‌ی بالینی سودوموناس آئروژینوزا در اهواز انجام شد، مقاومت نسبت به آنتی‌بیوتیک‌های ایمیپنم و مروپنم به ترتیب 41% و 23% بود که کمی با مطالعه‌ی حاضر متفاوت بود که به ترتیب 45/45% و 39/39% بود (27). در مطالعه‌ای Fazeli و همکاران در اصفهان بر روی 66 ایزوله سودوموناس آئروژینوزا جدا شده از بخش ICU انجام دادند، 8/75% از ایزوله‌ها نسبت به آنتی‌بیوتیک سفتازیدیم و 72/7% از ایزوله‌ها نسبت به پیپراسیلین مقاومت داشتند (28) که میزان مقاومت در مطالعه ما نسبت به آنتی‌بیوتیک‌های فوق کمتر از مطالعه فاضلی بود که به ترتیب برابر با 45/4% و 33/3% می‌باشد که احتمالاً به دلایلی از جمله محدودیت در تعداد نمونه‌های مطالعه حاضر بود. در مطالعه‌ای که توسط Aminizadeh و همکاران در سال 2012 بر روی ایزوله‌های سودوموناس آئروژینوزا جدا شده از بخش ICU انجام شد بیشترین و کمترین میزان مقاومت به ترتیب نسبت به سفتازیدیم (87%) و ایمیپنم (6/5%) بود (29). در مطالعۀ حاضر بیشترین و کمترین میزان مقاومت به ترتیب نسبت به آنتی‌بیوتیک‌های سفتریاکسون و پیپراسیلین بود که احتمالاً به دلیل تفاوت در ایزوله‌های مورد بررسی دو مطالعه می‌باشد که الگوی مقاومت متفاوتی دارند. در مطالعه Bayani و همکاران در سال 2013 در بابل که بر روی 30 ایزوله سودوموناس آئروژینوزا جدا شده از بخش ICU انجام شد بشترین مقاومت نسبت به آمپی‌سیلین و آمپی‌سیلین-سولباکتام (53/3%) گزارش شد (30). در مطالعه Moniri و همکاران در کاشان که بر روی 69 ایزولۀ سودوموناس آئروژینوزا جدا شده از بخش ICU انجام شد بیشترین مقاومت نسبت به آنتی‌بیوتیک‌های آمپی‌سیلین، سفوکسیم و سفتی‌زوکسیم (100%) و کمترین میزان مقاومت نسبت به آمیکاسین (23/2%) گزارش شد. همچنین از بین آنتی‌بیوتیک‌های کارباپنم 47/6% و 39% ایزوله‌ها به ترتیب نسبت به ایمیپنم و مروپنم مقاوم بودند (31) که مقاومت نسبت به آنتی‌بیوتیک‌های ایمیپنم و مروپنم در مطالعۀ ما 45/45% و 33/33% بود که این میزان تا حدی مشابه با مطالعۀ فوق بود که احتمالاً به این دلیل باشد که ایزوله‌ها از بخش ICU بوده و دارای الگوی مقاومت مشابهی می‌باشند.
افلاکس پمپ‌ها به دلیل تنوع سوبسترایی در ایجاد مقاومت چند دارویی بسیار قابل توجه می‌باشند. در میان باکتری‌های گرم منفی سیستم افلاکس MexAB-OprM، یکی از افلاکس پمپ‌های با اهمیت دخیل در مقاومت‌های چند دارویی سودوموناس آئروژینوزا می‌باشد و تنها سیستم افلاکس پمپ ذاتی در این باکتری می‌باشد (32). در مطالعه حاضر افلاکس پمپ MexAB-OprM، از جمله مکانیسم‌های مقاومتی مهم در برابر آنتی‌بیوتیک‌های کارباپنم بود. افزایش بیان سیستم افلاکس پمپ در میان ایزوله‌های بالینی سودوموناس آئروژینوزا در گزارشات مختلف 57/9%-21/1% گزارش شده است (33). در این مطالعه افزایش بیان ژن‌های افلاکس پمپ MexAB-OprM ،20%، 25% و 20% گزارش شد که کمتر از مطالعه انجام شده توسط TubA Moderris و همکارانش در ترکیه در سال 2018 بود که 47/6% ایزوله‌ها افزایش بیان افلاکس MexAB-OprM را نشان دادند (34). همچنین درمطالعه‌ای که توسط Ji-Young Lee و همکارانش در کره در سال 2012 انجام شد، از میان 57 ایزوله مقاوم به کارباپنم، 32 (56/1%) ایزوله افزایش بیان ژن MexAB-OprM و 54 (94/7%) ایزوله‌ها کاهش بیان ژن OprD را نشان دادند (35). در مطالعۀ حاضر، افزایش بیان ژن‌های افلاکس پمپ MexAB-OprM کمتر از مطالعۀ مذکور بود که این تفاوت در بیان ژن MexAB-OprM احتمالاً به دلیل تفاوت در سویه‌های دو منطقه جغرافیایی مختلف و الگوی مختلف مقاومت آنتی‌بیوتیکی و به کار گیری مکانیسم‌های مقاومتی مختلف در میان سویه‌های مختلف است.
نتایج مطالعه حاضر نشان می‌دهد که ایزوله‌های سودوموناس آئروژینوزا مقاومت آنتی بیوتیکی بالایی در بخش مراقبت‌های ویژه بیمارستان‌ها دارند. در بیشتر ایزوله‌هائی که نسبت به آنتی‌بیوتیک‌های کارباپنم مختلف مقاومت داشتند افزایش بیان ژن‌های افلاکس پمپ MexAB-OprM مشاهده شد. به‌طوری‌که میزان مقاومت به آنتی‌بیوتیک‌های ایمیپنم،مروپنم و دوریپنم به ترتیب 45/45%، 39/39% و 42/42% بود و افزایش بیان ژن‌های MexA، MexB، OprM در مقایسه با سویه کنترل به ترتیب در 20% (4/20)، 25% (5/20) و 20% (4/20) از ایزوله‌ها مشاهده شد. بنابراین بین میزان مقاومت به آنتی‌بیوتیک‌های کارباپنم و افزایش بیان سیستم افلاکس پمپ MexAB-OprM ارتباط وجود دارد. لذا شناسایی مکانیسم‌های دخیل در ایجاد مقاومت در بین این ایزوله‌ها از جمله سیستم‌های افلاکس پمپ جهت به کار گیری راهکارهای درمانی مناسب جهت جلوگیری از انتشار چنین سویه‌های مقاومی ضروری به نظر می‌رسد.
این مقاله حاصل پایان نامه کارشناسی ارشد با شماره 9610126514 و کد اخلاقی IR.UMSHA.REC.1396.662 در سال 1396 می‌باشد. نویسندگان مراتب تشکر و قدردانی خود را از این معاونت محترم و پرسنل آزمایشگاه میکروب شناسی دانشگاه علوم پزشکی همدان به دلیل همکاری در پیشبرد این مطالعه، ابراز می‌دارند.
بین نویسندگان تعارض در منافع گزارش نشده است.
متن کامل: (2808 مشاهده)
مقدمه
سودوموناس آئروژینوزا باکتری گرم منفی و پاتوژن فرصت‌طلب است که در سال‌های اخیر به عنوان یکی از مهمترین پاتوژن‌های عفونت‌های بیمارستان شناخته شده است. این باکتری توانائی ایجاد طیف وسیعی از بیماری‌ها از جمله عفونت‌های مجاری ادراری، سیستم تنفسی، پوست، عفونت بافت‌های نرم، باکتریمی، عفونت‌های سیستمیک و هم‌جنین عفونت‌های کشنده در افراد مبتلا به ضعف سیستم ایمنی و افراد سرطانی دارد (1). این باکتری دومین عامل شایع و عامل 21% عفونت‌های بیمارستانی به ویژه عفونت در بخش مراقبت‌های ویژه است. از جمله فاکتورهای خطر مهم در این بخش‌ها برای ابتلاء به عفونت، نامساعد بودن شرایط بیماران، بستری شدن طولانی مدت و استفاده از وسایل پزشکی از جمله کتترها و مصرف آنتی‌بیوتیک‌های وسیع‌الطیف در بیماران بستری در این بخش‌ها می‌باشد (4-2). بروز مقاومت آنتی‌بیوتیکی در بخش‌های مختلف بیمارستان به ویژه ICU مشکلات زیادی را برای درمان عفونت‌های باکتریائی ایجاد کرده است. اگر چه کرباپنم‌ها از جمله آنتی‌بیوتیک‌های مؤثر برای درمان عفونت‌های سودوموناس آئروژینوزا هستند، مقاومت به کرباپنم‌ها به ویژه در بخش ICU به یک نگرانی در سراسر جهان تبدیل شده است که موجب افزایش میزان مرگ و میر در این بخش می‌شود (5). به طور کلی مقاومت سودوموناس آئروژینوزا به آنتی‌بیوتیک‌های گروه کارباپنم به علت ترکیبی از چندین عامل از جمله نفوذپذیری پایین پورین‌های غشا خارجی (OprD)، وجود AmpC کروموزومی، حضورآنزیم‌های هیدرولیز کننده کارباپنم و افزایش بیان سیستم‌های افلاکس می‌باشد. سیستم‌های افلاکس پمپ نقش مهمی در مقاومت آنتی بیوتیکی ایزوله‌های سودوموناس آئروژینوزا به آنتی‌بیوتیک‌های مختلف دارند (6). سودوموناس آئروژینوزا دارای پتانسیل بیان 12 نوع پمپ افلاکس چند دارویی به نام Mex می‌باشد. سیستم افلاکس Mex متعلق به خانواده RND است. پنج پمپ به نام‌های MexCD-oprj،MexAB-OprM، MexJK-OprM، MexXY-OprM MexEF-oprN مهمترین پمپ‌های افلاکس این خانواده هستند (7).
MexAB-OprM تنها پمپ ترشحی است که در تمامی ایزوله‌های سودوموناس آئروژینوزا یافت شده و موجب مقاومت ذاتی این باکتری‌ها به آنتی بیوتیک‌ها می‌گردد (8). ارتاپنم، مروپنم و دوریپنم سوبسترای سیستم افلاکس MexAB-OprM، هستند. لذا افزایش بیان سیستم افلاکس پمپ MexAB-OprM نقش مهمی در مقاومت آنتی‌بیوتیکی ایزوله‌های سودوموناس آئروژینوزا به آنتی‌بیوتیک‌های بتالاکتام و به ویژه کارباپنم‌ها را دارد (9). بنابراین شناسایی مکانیسم‌های دخیل در مقاومت به کرباپنم‌ها می‌تواند در کنترل، مدیریت و درمان به موقع و مناسب عفونت‌های ایجاد شده توسط سودوموناس آئروژینوزا مؤثر باشد. لذا هدف از این مطالعه ارزیابی سطح بیان ژن‌های افلاکس پمپ MexAB-OprM در ایزوله‌های بالینی سودوموناس آئروژینوزا جدا شده از بخش ICU می‌باشد.
مواد و روش ها
جداسازی و شناسایی ایزوله‌های سودوموناس آئروژینوزا
در طی دوره‌ی 7 ماهه از آبان 96 تا اردیبهشت 97 ایزوله‌های باکتریایی سودوموناس آئروژینوزا از بیماران بستری در بخش ICU بیمارستان‌های بعثت، بهشتی و سینا شهر همدان جمع‌آوری شدند. سپس ایزوله‌های باکتریایی به آزمایشگاه میکروب شناسی دانشکده پزشکی، منتقل شدند. جهت تأیید ایزوله‌های سودوموناس آئروژینوزا جمع‌آوری شده، از تست‌های بیوشیمیایی مختلف شامل رشد در محیط مک‌کانکی آگار، تست اکسیداز، کاتالاز، واکنش در محیط TSI، تست OF، بررسی تحرک، رشد در محیط ستریماید آگار و رشد در دمای 42 درجه سلسیوس هینتون آگار استفاده شد (10). در نهایت برای تأیید ایزوله‌های سودوموناس آئروژینوزا PCR برای ژن acsA انجام گرفت (11).
تست حساسیت آنتی‌بیوتیکی
مقاومت آنتی‌بیوتیکی ایزوله‌های سودوموناس آئروژینوزا، به روش استاندارد دیسک دیفیوژن و مطابق با روش Clinical and Laboratory Standards Institute ((CLSI 2018 انجام گرفت (12). دیسک‌های آنتی‌بیوتیکی از شرکت MAST انگلستان خریداری شدند و شامل پیپراسیلین (μg100)، پیپراسیلین/تازوباکتام (μg 100/10)، سفتازیدیم (μg30)، سفتریاکسون (μg 30)، آزترونام (μg30)، ایمیپنم (μg10)، مروپنم (μg10)، دوریپنم (μg10)، آمیکاسین (μg30)، سیپروفلوکساسین (μg 5) و تتراسایکلین (μg30) بودند. از سودوموناس آئروژینوزا ATCC 27853 به عنوان سویهٔ کنترل استفاده شد.
تعیین حداقل غلظت مهاری (MIC) ایمیپنم:
در این روش حداقل غلظت مهاری برای ایمیپنم با استفاده از نوار E-test (شرکت MAST انگلستان) انجام شد (13).
استخراج ژنوم و انجام روش PCR
استخراج DNA به روش بویلینگ انجام شد (14). آزمـون PCR برای ژن‌های MexA، MexB، OprM، و ژن acsA به عنوان Housekeeping gene انجام شد (جدول 1). سویه سودوموناس آئروژینوزا ATCC 27853 به عنوان کنترل مثبت استفاده شد. در نهایت الکتروفـورز محصولات PCR بـر روی ژل آگـارز 1 درصـد انجام شد (15).
انتخاب ایزوله‌ها:
از میان 33 ایزوله جدا شده از بیماران بستری در بخش ICU، 20 ایزوله بالینی سودوموناس آئروژینوزا بر اساس نمونه‌گیری طبقه بندی شده (نوع نمونه‌های بالینی، حضور ژن‌های مختلف کارباپنماز و الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی، به عنوان مثال نمونه‌هایی با کاهش حساسیت به آنتی‌بیوتیک‌ها به ویژه کرباپنم) انتخاب شدند.
استخراج RNA و سنتز cDNA
استخراج RNA با استفاده از کیت استخراج RNA (,RiboEx شرکت, Gene All کره) انجام شد تا سطح بیان ژن‌های MexA، MexB، OprM و rpoD به عنوان یک ژن کنترل داخلی ایزوله‌های مختلف سودوموناس آئروژینوزا با استفاده از PCR Real Time تعیین شود. سنتز cDNA با استفاده از کیت سنتز cDNA (شرکت,Gene All کره) و پرایمر هگزامر (شرکت کیاژن- ایران) انجام شد. RNA استخراج شده تا زمان استفاده در دمای 20- درجه سلسیوس نگهداری شد (16).
بررسی سطح بیان ژن‌های مورد مطالعه با استفاده از Real-Time PCR
به منظور برسی کمی بیان، ژن‌های MexA، MexB، OprD و rpoD (به عنوان ژن کنترل داخلی) با استفاده از کیت شرکت Gene All، کره و پرایمرهای ذکر شده در جدول 1 انجام شد. مطابق پروتکـل، مـسترمیکس، پرایمرهـا و cDNA سنتز شده در حجم مناسـبی مخلـوط شـده و توسـط دسـتگاه Real-time PCR واکنش انجام گردیـد. سودوموناس آئروژینوزا ATCC 27853به عنوان کنترل مثبـت مـورد اسـتفاده قـرار گرفـت. بیــان ژن‌های MexA، MexB، OprM بــا بیــان ژن rpoD به عنــوان ژن house keeping مقایسه گردید. از فرمـول مرجـع نـسبی بیـان ((θΔCt بـرای تعیـین بیـان ژن مـورد نظـر استفاده گردیـد (17).
آنالیز آماری
آزمون آماری One way ANOVA بـرای مقایـسه تفـاوت معنی دار مقادیر به دست آمده از بیـان ژن‌های مورد در سویه استاندارد (که واجـد مقـدار 1 مـی‌باشـد) و ایزوله‌های بالینی مورد استفاده قرار گرفت. مقادیر کمتر از 0/05، بـه عنـوان معنـی‌دار در نظر گرفته شـد. در این مطالعه از نـرم افـزار آمـاری 16SPSS استفاده شد.
جدول 1. پرایمرهای مورد استفاده در Real- Time PCR و PCR
یافته ها
جمع‌آوری ایزوله‌های بالینی
در مجموع 33 نمونه سودوموناس آئروژینوزا از بیماران بستری در بخش ICU جمع‌آوری شدند.
الگوی حساسیت ضد میکروبی ایزوله‌ها: نتایج آزمایش‌های حساسیت ضد میکروبی نشان داد که بالاترین مقاومت به سفتریاکسون (63/63%، 21 = n) و کمترین مقاومت در برابر پیپراسیلین (33/33% 11n =) بود. (جدول 2). نتایج MIC ایمیپنم نشان داد که 14 (42/42%) ایزوله مقاوم و 19 (57/57%) ایزوله حساس به ایمیپنم بودند.
جدول 2. نتایج تست حساسیت آنتی‌بیوتیکی به روش دیسک دیفیوژن
نتایج آزمون PCR و qRT-PCR
نتایج آزمون PCR ژن acsA به عنوان Housekeeping gene جهت تأیید سویه‌های سودوموناس آئروژینوزا نشان داد که این ژن در تمامی ایزوله‌های های باکتری سودوموناس آئروژینوزا وجود دارد (شکل 1). همچنین ژن داخلـی rpoD به عنـوان ژن کنتـرل داخلـی در تمام ایزوله‌ها وجود داشت کـه نـشان دهنـده صـحت انجـام واکـنش PCR بود. همچنین نتایج PCR نشان داد که ژن‌های افلاکس پمپ (MexA, MexB و OprM) در تمام ایزوله‌های مورد بررسی وجود داشت. هـم‌چنـین نتایج آزمون بیان ژن حـاکی از آن بـود که از میان 20 ایزولهٔ بالینی سودوموناس آئروژینوزا جدا شده از بخش ICU، افزایش بیان ژن‌های OprM,MexB, MexA به ترتیب در 4 (20%)، 5 (25%) و 4 (20%) ایزوله مشاهده شد (شکل 4-2). منحنی افقی نشان دهندهٔ ایزوله‌های بالینی و کنترل و منحنی عمودی نشان‌دهندهٔ میزان بیان ژن‌های مورد مطالعه می‌باشد.
نتایج آزمون PCR ژن acsA به عنوان Housekeeping gene جهت تأیید سویه‌های سودوموناس آئروژینوزا نشان داد که این ژن در تمامی ایزوله‌های های باکتری سودوموناس آئروژینوزا وجود دارد (شکل 1). همچنین ژن داخلـی rpoD به عنـوان ژن کنتـرل داخلـی در تمام ایزوله‌ها وجود داشت کـه نـشان دهنـده صـحت انجـام واکـنش PCR بود. همچنین نتایج PCR نشان داد که ژن‌های افلاکس پمپ (MexA, MexB و OprM) در تمام ایزوله‌های مورد بررسی وجود داشت. هـم‌چنـین نتایج آزمون بیان ژن حـاکی از آن بـود که از میان 20 ایزولهٔ بالینی سودوموناس آئروژینوزا جدا شده از بخش ICU، افزایش بیان ژن‌های OprM,MexB, MexA به ترتیب در 4 (20%)، 5 (25%) و 4 (20%) ایزوله مشاهده شد (شکل 4-2). منحنی افقی نشان دهندهٔ ایزوله‌های بالینی و کنترل و منحنی عمودی نشان‌دهندهٔ میزان بیان ژن‌های مورد مطالعه می‌باشد.
شکل 1. نتیجه الکتروفورز تکثیر محصولات ژن استاندارد acsA با طول 823 جفت باز. چاهک 1: مارکر فرمانتس با وزن مولکولی 1 کیلو باز، چاهک 2: از سمت چپ، باکتری استاندارد سودوموناس آئروژینوزا ATCC 27853 بعنوان کنترل مثبت، چاهک‌های شماره 3 الی 6: ایزوله‌های باکتریایی سودوموناس آئروژینوزا
شکل 2. بیان ژن MexA
شکل 3. بیان ژن MexB
شکل 4. بیان ژن OprM
بحث
سودوموناس آئروژینوزا از جمله پاتوژن‌های مهم در عفونت‌های بیمارستانی به ویژه در بخش ICU می‌باشد که به آنتی‌بیوتیک‌های مختلف از جمله کارباپنم‌ها مقاوم می‌باشد (22). شیوع ایزوله‌های سودوموناس آئروژینوزا مقاوم به چند دارو (MDR) در سال‌های اخیر در سراسر جهان افزایش یافته است (23). در این مطالعه میزان مقاومت نسبت به آنتی‌بیوتیک‌های ایمیپنم، مروپنم و دوریپنم به ترتیب 45/45%، 39/39% و 42/42% می‌باشد که مشابه با مطالعه Siasi و همکاران در تهران بود (24).
آنتی‌بیوتیک‌های کارباپنم خط اول درمان برای بیشتر عفونت‌های باکتریایی به‌خصوص سودوموناس آئروژینوزا می‌باشند، تأثیر این آنتی‌بیوتیک‌های مهم به‌دلیل گسترش باکتری‌های مقاوم به کارباپنم به ویژه در بخش ICU کاهش یافته است (25). بنابراین شناسایی سریع و دقیق ایزوله‌های سودوموناس آئروژینوزا مقاوم به کارباپنم‌ها و شناسایی مکانیسم‌های مقاومتی به این آنتی‌بیوتیک‌ها در بخش ICU برای درمان مناسب و پیشگیری از انتشار این ایزوله‌ها ضروری است (26). نتایج این مطالعه نشان می‌دهد که بیشترین میزان مقاومت آنتی‌بیوتیکی در برابر سفتریاکسون 63/63% و کمترین مقاومت در برابر پیپراسیلین 33/33% بود. همچنین از میان آنتی‌بیوتیک‌های کارباپنم بیشترین مقاومت نسبت به ایمیپنم 45/45% و کمترین مقاومت نسبت به مروپنم 39/39% می‌باشد. در مطالعه‌ای که توسط Mihani و همکاران که بر روی 100 ایزوله‌ی بالینی سودوموناس آئروژینوزا در اهواز انجام شد، مقاومت نسبت به آنتی‌بیوتیک‌های ایمیپنم و مروپنم به ترتیب 41% و 23% بود که کمی با مطالعه‌ی حاضر متفاوت بود که به ترتیب 45/45% و 39/39% بود (27). در مطالعه‌ای Fazeli و همکاران در اصفهان بر روی 66 ایزوله سودوموناس آئروژینوزا جدا شده از بخش ICU انجام دادند، 8/75% از ایزوله‌ها نسبت به آنتی‌بیوتیک سفتازیدیم و 72/7% از ایزوله‌ها نسبت به پیپراسیلین مقاومت داشتند (28) که میزان مقاومت در مطالعه ما نسبت به آنتی‌بیوتیک‌های فوق کمتر از مطالعه فاضلی بود که به ترتیب برابر با 45/4% و 33/3% می‌باشد که احتمالاً به دلایلی از جمله محدودیت در تعداد نمونه‌های مطالعه حاضر بود. در مطالعه‌ای که توسط Aminizadeh و همکاران در سال 2012 بر روی ایزوله‌های سودوموناس آئروژینوزا جدا شده از بخش ICU انجام شد بیشترین و کمترین میزان مقاومت به ترتیب نسبت به سفتازیدیم (87%) و ایمیپنم (6/5%) بود (29). در مطالعۀ حاضر بیشترین و کمترین میزان مقاومت به ترتیب نسبت به آنتی‌بیوتیک‌های سفتریاکسون و پیپراسیلین بود که احتمالاً به دلیل تفاوت در ایزوله‌های مورد بررسی دو مطالعه می‌باشد که الگوی مقاومت متفاوتی دارند. در مطالعه Bayani و همکاران در سال 2013 در بابل که بر روی 30 ایزوله سودوموناس آئروژینوزا جدا شده از بخش ICU انجام شد بشترین مقاومت نسبت به آمپی‌سیلین و آمپی‌سیلین-سولباکتام (53/3%) گزارش شد (30). در مطالعه Moniri و همکاران در کاشان که بر روی 69 ایزولۀ سودوموناس آئروژینوزا جدا شده از بخش ICU انجام شد بیشترین مقاومت نسبت به آنتی‌بیوتیک‌های آمپی‌سیلین، سفوکسیم و سفتی‌زوکسیم (100%) و کمترین میزان مقاومت نسبت به آمیکاسین (23/2%) گزارش شد. همچنین از بین آنتی‌بیوتیک‌های کارباپنم 47/6% و 39% ایزوله‌ها به ترتیب نسبت به ایمیپنم و مروپنم مقاوم بودند (31) که مقاومت نسبت به آنتی‌بیوتیک‌های ایمیپنم و مروپنم در مطالعۀ ما 45/45% و 33/33% بود که این میزان تا حدی مشابه با مطالعۀ فوق بود که احتمالاً به این دلیل باشد که ایزوله‌ها از بخش ICU بوده و دارای الگوی مقاومت مشابهی می‌باشند.
افلاکس پمپ‌ها به دلیل تنوع سوبسترایی در ایجاد مقاومت چند دارویی بسیار قابل توجه می‌باشند. در میان باکتری‌های گرم منفی سیستم افلاکس MexAB-OprM، یکی از افلاکس پمپ‌های با اهمیت دخیل در مقاومت‌های چند دارویی سودوموناس آئروژینوزا می‌باشد و تنها سیستم افلاکس پمپ ذاتی در این باکتری می‌باشد (32). در مطالعه حاضر افلاکس پمپ MexAB-OprM، از جمله مکانیسم‌های مقاومتی مهم در برابر آنتی‌بیوتیک‌های کارباپنم بود. افزایش بیان سیستم افلاکس پمپ در میان ایزوله‌های بالینی سودوموناس آئروژینوزا در گزارشات مختلف 57/9%-21/1% گزارش شده است (33). در این مطالعه افزایش بیان ژن‌های افلاکس پمپ MexAB-OprM ،20%، 25% و 20% گزارش شد که کمتر از مطالعه انجام شده توسط TubA Moderris و همکارانش در ترکیه در سال 2018 بود که 47/6% ایزوله‌ها افزایش بیان افلاکس MexAB-OprM را نشان دادند (34). همچنین درمطالعه‌ای که توسط Ji-Young Lee و همکارانش در کره در سال 2012 انجام شد، از میان 57 ایزوله مقاوم به کارباپنم، 32 (56/1%) ایزوله افزایش بیان ژن MexAB-OprM و 54 (94/7%) ایزوله‌ها کاهش بیان ژن OprD را نشان دادند (35). در مطالعۀ حاضر، افزایش بیان ژن‌های افلاکس پمپ MexAB-OprM کمتر از مطالعۀ مذکور بود که این تفاوت در بیان ژن MexAB-OprM احتمالاً به دلیل تفاوت در سویه‌های دو منطقه جغرافیایی مختلف و الگوی مختلف مقاومت آنتی‌بیوتیکی و به کار گیری مکانیسم‌های مقاومتی مختلف در میان سویه‌های مختلف است.
نتیجه گیری
نتایج مطالعه حاضر نشان می‌دهد که ایزوله‌های سودوموناس آئروژینوزا مقاومت آنتی بیوتیکی بالایی در بخش مراقبت‌های ویژه بیمارستان‌ها دارند. در بیشتر ایزوله‌هائی که نسبت به آنتی‌بیوتیک‌های کارباپنم مختلف مقاومت داشتند افزایش بیان ژن‌های افلاکس پمپ MexAB-OprM مشاهده شد. به‌طوری‌که میزان مقاومت به آنتی‌بیوتیک‌های ایمیپنم،مروپنم و دوریپنم به ترتیب 45/45%، 39/39% و 42/42% بود و افزایش بیان ژن‌های MexA، MexB، OprM در مقایسه با سویه کنترل به ترتیب در 20% (4/20)، 25% (5/20) و 20% (4/20) از ایزوله‌ها مشاهده شد. بنابراین بین میزان مقاومت به آنتی‌بیوتیک‌های کارباپنم و افزایش بیان سیستم افلاکس پمپ MexAB-OprM ارتباط وجود دارد. لذا شناسایی مکانیسم‌های دخیل در ایجاد مقاومت در بین این ایزوله‌ها از جمله سیستم‌های افلاکس پمپ جهت به کار گیری راهکارهای درمانی مناسب جهت جلوگیری از انتشار چنین سویه‌های مقاومی ضروری به نظر می‌رسد.
سپاسگزاری
این مقاله حاصل پایان نامه کارشناسی ارشد با شماره 9610126514 و کد اخلاقی IR.UMSHA.REC.1396.662 در سال 1396 می‌باشد. نویسندگان مراتب تشکر و قدردانی خود را از این معاونت محترم و پرسنل آزمایشگاه میکروب شناسی دانشگاه علوم پزشکی همدان به دلیل همکاری در پیشبرد این مطالعه، ابراز می‌دارند.
تعارض در منافع
بین نویسندگان تعارض در منافع گزارش نشده است.
نوع مطالعه: مقاله پژوهشی |
موضوع مقاله:
باکتری شناسی پزشکی
دریافت: 1398/3/4 | پذیرش: 1398/6/2 | انتشار الکترونیک: 1398/6/25
دریافت: 1398/3/4 | پذیرش: 1398/6/2 | انتشار الکترونیک: 1398/6/25
فهرست منابع
1. Tam VH, Chang KT, Abdelraouf K, Brioso CG, Ameka M, McCaskey LA, et al. Prevalence, resistant mechanisms, and susceptibility of multidrugresistant bloodstream isolates of Pseudomonas aeruginosa. Antimicrob Agents Chemother 2010; 54(3):1160-4. [DOI:10.1128/AAC.01446-09] [PMID] [PMCID]
2. Bonten MJ, Bergmans DC, Ambergen AW, De Leeuw PW, Van der Geest S, Stobberingh EE, et al Risk factors for pneumonia, and colonization of respiratory tract and stomach in mechanically ventilated ICU patients. Am J Respir Crit Care Med1996; 154(5):1339-46. [DOI:10.1164/ajrccm.154.5.8912745] [PMID]
3. Agodi Agodi A, Barchitta M, Cipresso R, Giaquinta L, Romeo MA, Denaro C. Pseudomonas aeruginosa carriage, colonization, and infection in ICU patients. Intensive Care Med 2007; 33(7):1155- 61. [DOI:10.1007/s00134-007-0671-6] [PMID]
4. Thuong M, Arvaniti K, Ruimy R, de la Salmonière P, Scanvic-Hameg A, Lucet JC, et al. Epidemiology of Pseudomonas aeruginosa and risk factors for carriage acquisition in an intensive care unit. J Hosp Infect 2003; 53(4):274-82. [DOI:10.1053/jhin.2002.1370] [PMID]
5. Kaye KS, Pogue JMJPTJoHP, Therapy D. Infections caused by resistant gram‐negative bacteria: epidemiology and management. Pharmacotherapy 2015;35(10):949-62. [DOI:10.1002/phar.1636] [PMID]
6. Rojo-Bezares B, Cavalié L, Dubois D, Oswald E, Torres C, Sáenz YJJomm. Characterization of carbapenem resistance mechanisms and integrons in Pseudomonas aeruginosa strains from blood samples in a French hospital. J Med Microbiol.2016;65(4):311-9. [DOI:10.1099/jmm.0.000225] [PMID]
7. Dreier J, Ruggerone PJFim. Interaction of antibacterial compounds with RND efflux pumps in Pseudomonas aeruginosa. Front Microbiol. 2015;6:660. [DOI:10.3389/fmicb.2015.00660] [PMID] [PMCID]
8. Tian Z-X, Yi X-X, Cho A, O'Gara F, Wang Y-PJPp. CpxR activates MexAB-OprM efflux pump expression and enhances antibiotic resistance in both laboratory and clinical nalB-type isolates of Pseudomonas aeruginosa. PLOS. 2016;12(10):e1005932. [DOI:10.1371/journal.ppat.1005932] [PMID] [PMCID]
9. Pan Y-p, Xu Y-h, Wang Z-x, Fang Y-p, Shen J-lJAom. Overexpression of MexAB-OprM efflux pump in carbapenem-resistant Pseudomonas aeruginosa. Arch Microbiol. 2016;198(6):565-71. [DOI:10.1007/s00203-016-1215-7] [PMID]
10. Gaby W, Hadley CJJob. Practical laboratory test for the identification of Pseudomonas aeruginosa.J bacteriol 1957;74(3):356.
11. Annear D, Black J, Govender S. Multilocus sequence typing of carbapenem resistant Pseudomonas aeruginosa isolated from patients presenting at port Elizabeth hospitals, south Africa. Afr J Infect Dis. 2017;11(2):68-74. [DOI:10.21010/ajid.v11i2.9] [PMID] [PMCID]
12. Clinical and Laboratory Standards Institute. 2018. Performance standards for antimicrobial susceptibility testing, 28th ed. CLSI supplement M100S. CLSI, PA. 38-40.
13. Mustafa MH, Chalhoub H, Denis O, Deplano A, Vergison A, Rodriguez-Villalobos H, et al. Antimicrobial Susceptibility of Pseudomonas aeruginosa Isolated from Cystic Fibrosis Patients in Northern Europe. Antimicrobial agents chemother. 2016;60(11):6735-41 [DOI:10.1128/AAC.01046-16] [PMID] [PMCID]
14. Clarke l, Millar BC and Moore JC. Extraction of genemic DNA from pseudomonas aeroginosa: a comparison of three methods. Br j Biomed. 2003; 60(1):34-5. [DOI:10.1080/09674845.2003.11978040]
15. Tang Y, Li B, Dai J, Dai J, Wang X, Si J, et al. Genotyping of pseudomonas aeruginosa type III secretion system using magnetic enrichment multiplex polymerase chain reaction and chemiluminescence. J Biomed Nanotechnol. 2016;12(4):762-9. [DOI:10.1166/jbn.2016.2222] [PMID]
16. Heera R, Sivachandran P, Chinni SV, Mason J, Croft L, Ravichandran M, et al. Efficient extraction of small and large RNAs in bacteria for excellent total RNA sequencing and comprehensive transcriptome analysis. BMC Res Notes. 2015;8(1):754. [DOI:10.1186/s13104-015-1726-3] [PMID] [PMCID]
17. Arabestani MR, Rajabpour M, Yousefi Mashouf R, Alikhani MY, Mousavi SM. Expression of efflux pump MexAB-OprM and OprD of Pseudomonas aeruginosa strains isolated from clinical samples using qRT-PCR. Arch Iran Med. 2015;18(2):102-8.
18. Quale J, Bratu S, Gupta J, Landman D. Interplay of efflux system, ampC, and oprD expression in carbapenem resistance of Pseudomonas aeruginosa clinical isolates. Antimicrob Agents Chemother. 2006;50(5):1633-41. [DOI:10.1128/AAC.50.5.1633-1641.2006] [PMID] [PMCID]
19. Su F, Wang J. Berberine inhibits the MexXY-OprM efflux pump to reverse imipenem resistance in a clinical carbapenem-resistant Pseudomonas aeruginosa isolate in a planktonic state. Exp Ther Med. 2018;15(1):467-72. [DOI:10.3892/etm.2017.5431]
20. Azimi A, Naserpour T, Bazmi F, Peymani A, Aslanimehr M, Saadat S. Evaluation of oprD Gene Expression in Carbapenem-Resistant Pseudomonas aeruginosa Strains Isolated From Severe Burn Patients With Secondary Infection. Biotech. Health. Sci. 2015. [DOI:10.17795/bhs30748]
21. Gardner JG, Grundy FJ, Henkin TM, Escalante-Semerena JCJJob. Control of acetyl-coenzyme A synthetase (AcsA) activity by acetylation/deacetylation without NAD+ involvement in Bacillus subtilis. ASM. 2006;188(15):5460-8.
https://doi.org/10.1128/JB.01181-06 [DOI:10.1128/JB.00215-06] [PMCID]
22. Varaiya A, Kulkarni N, Kulkarni M, Bhalekar P, Dogra JJIJoMR. Incidence of metallo beta lactamase producing Pseudomonas aeruginosa in ICU patients. Indian J Med Res. 2008;127(4). [DOI:10.4103/0377-4929.41683] [PMID]
23. Plant AJ, Dunn A, Porter RJJEroa-it. Ceftolozane-tazobactam resistance induced in vivo during the treatment of MDR Pseudomonas aeruginosa pneumonia. Expert Rev Anti Infect Ther 2018;16(5):367-8. [DOI:10.1080/14787210.2018.1473079] [PMID]
24. Siasi E, Rafiei Tabatabaii R, MoslehiMehr F. Isolation of bla_vim gene in Antibiotic resistant Pseudomonas aeruginosa from hospitals. New Cellularand Molecular Biotechnology Journal. 2018;8(29):97-106
25. Britt NS, Ritchie DJ, Kollef MH, Burnham C-AD, Durkin MJ, Hampton NB, et al. Importance of site of infection and antibiotic selection in the treatment of carbapenem-resistant Pseudomonas aeruginosa sepsis. Antimicrob Agents Chemother. 2018;62(4):e02400-17. [DOI:10.1128/AAC.02400-17] [PMID] [PMCID]
26. Buehrle DJ, Shields RK, Clarke LG, Potoski BA, Clancy CJ, Nguyen MHJAa, et al. Carbapenem-resistant Pseudomonas aeruginosa bacteremia: risk factors for mortality and microbiologic treatment failure. J Hosp Infect. 2017;61(1):e01243-16. [DOI:10.1128/AAC.01243-16] [PMID] [PMCID]
27. Mihani F, Khosravi A. Isolation of Pseudomonas aeruginosastrains producing metallo beta lactamases from infections in burned patients and identification of blaIMP and blaVIMgenes by PCR %J Iranian Journal of Medical Microbiology. 2007;1(1):23-31.
28. Fazeli H, Havaei SA, Solgi H, Shokri D, Motallebirad T. Pattern of Antibiotic Resistance in Pesudomonas Aeruginosa Isolated from Intensive Care Unit, Isfahan, Iran. J Isfahan Med Sch 2013; 31(232): 433-8
29. Aminizadeh Z, Kashi MS. Prevalence of multi-drug resistance and pandrug resistance among multiple gram-negative species: experience in one teaching hospital, Tehran, Iran. Int Res J Microbiol 2011; 2:90-5.
30. Bayani M, Siadati S, Rajabnia R, Taher AA. Drug Resistance of Pseudomonas aeruginosa and Enterobacter cloacae Isolated from ICU, Babol, Northern Iran. Int J Mol Cell Med 2013; 2(4):204-9.
31. Moniri R, Mosayebi Z, Movahedian AH, Mousavi GA. Emergence of multidrug resistant Pseudomonas aeruginosa isolates in neonatal septicemia. J Infect Dis Antimicrob Agents 2005; 22:39-44.
32. Papadopoulos CJ, Carson CF, Chang BJ, Riley TV. Role of the MexAB-OprM efflux pump of Pseudomonas aeruginosa in tolerance to tea tree (Melaleuca alternifolia) oil and its monoterpene components terpinen-4-ol, 1,8-cineole, and alpha-terpineol. Appl Environ Microbiol. 2008;74(6):1932-5. [DOI:10.1128/AEM.02334-07] [PMID] [PMCID]
33. Amin NE, Giske CG, Jalal S, Keijser B, Kronvall G, Wretlind BJA. Carbapenem resistance mechanisms in Pseudomonas aeruginosa: alterations of porin OprD and efflux proteins do not fully explain resistance patterns observed in clinical isolates. APMIS. 2005;113(3):187-96. [DOI:10.1111/j.1600-0463.2005.apm1130306.x] [PMID]
34. Muderris T, Durmaz R, Ozdem B, Dal T, Unaldı O, Aydogan S, et al. Role of efflux pump and OprD porin expression in carbapenem resistance of Pseudomonas aeruginosa clinical isolates. JIDC. 2018;12(01):001-8. [DOI:10.3855/jidc.9486]
35. Lee K, Park AJ, Kim MY, Lee HJ, Cho J-H, Kang JO, et al. Metallo-β-lactamase-producing Pseudomonas spp. in Korea: high prevalence of isolates with VIM-2 type and emergence of isolates with IMP-1 type. Yonsei Med J.2009;50(3):335-9. [DOI:10.3349/ymj.2009.50.3.335] [PMID] [PMCID]
ارسال پیام به نویسنده مسئول
| بازنشر اطلاعات | |
 |
این مقاله تحت شرایط Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License قابل بازنشر است. |
