سال 13، شماره 1 - ( فروردین - اردیهبشت 1398 )
جلد 13 شماره 1 صفحات 31-22 |
برگشت به فهرست نسخه ها
سوسن رضاوند1 
، جعفر امانی 2، ندا اکبری1 ، حمید رضا مهاجرانی1 ، شهرام نظریان3 ، حمیده محمود زاده حسینی4 ، مهرداد موسی زاده مقدم5
، جعفر امانی 2، ندا اکبری1 ، حمید رضا مهاجرانی1 ، شهرام نظریان3 ، حمیده محمود زاده حسینی4 ، مهرداد موسی زاده مقدم5
1- گروه زیست‌شناسی، دانشکده علوم ژایه، واحد اراک، دانشگاه آزاد اسلامی، اراک، ایران
2- مرکز تحقیقات میکروبیولوژی کاربردی، انستیتو سیستم بیولوژی و مسمومیت‌ها، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله (عج)، تهران، ایران ، jafar.amani@gmail.com
3- گروه زیست‌شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه امام حسین(ع)، تهران ، ایران
4- مرکز تحقیقات میکروبیولوژی کاربردی، انستیتو سیستم بیولوژی و مسمومیت‌ها، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله (عج)، تهران، ایران
5- مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی کاربردی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله (عج)، تهران، ایران
2- مرکز تحقیقات میکروبیولوژی کاربردی، انستیتو سیستم بیولوژی و مسمومیت‌ها، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله (عج)، تهران، ایران ، jafar.amani@gmail.com
3- گروه زیست‌شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه امام حسین(ع)، تهران ، ایران
4- مرکز تحقیقات میکروبیولوژی کاربردی، انستیتو سیستم بیولوژی و مسمومیت‌ها، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله (عج)، تهران، ایران
5- مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی کاربردی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله (عج)، تهران، ایران
چکیده: (6679 مشاهده)
زمینه و هدف: شیوع بالای ایزوله‌های استافیلوکوکوس اورئوس که به آنتی‌بیوتیک متی‌سیلین مقاوم هستند و همچنین ایجاد مقاومت چند دارویی در این باکتری، درمان عفونت‌های ناشی از این باکتری را با مشکل مواجه کرده است. به همین خاطر شناسایی سویه‌های MRSA با روش‌های سریع و دقیق ضروری است. PCR-ELISA روش مولکولی دقیقی است که برای شناسایی باکتری‌های مختلفی استفاده شده است. هدف از این تحقیق شناسایی باکتری استافیلوکوکوس اورئوس مقاوم به متی‌سیلین با روش PCR-ELISA است.
مواد و روش کار: ابتدا پرایمرهای اختصاصی مربوط به ژن mecA طراحی شد. سپس از dNTP نشان‌دارشده به همراه دیگوکسی ژنین برای تکثیر ژن mecA استفاده شد. محصولات نشان‌دارشده به کف چاهک‌های واجد استراپتویدین متصل و با آنتی‌بادی کانژوگه ضدنشان DIG شناسایی شد. همچنین از پروب DNA اختصاصی نشان‌دارشده با بیوتین برای ژن mecA استفاده و در نهایت حساسیت و اختصاصیت روش تعیین شد. برای این منظور مقاومت به متی‌سیلین در ۷۰ جدایه بالینی با روش انتشار دیسک، آگار دایلوشن و PCR-ELISA ارزیابی شد.
یافته‌ها: با استفاده از پرایمرهای اختصاصی، ژن mecA باکتری استافیلوکوکوس اورئوس تکثیر شد که نتیجه آن یک قطعه به طول ۳۱۰ جفت باز بود. نتایج حاصل از PCR-ELISA نشان داد این تکنیک هیچ واکنش متقاطعی با باکتری‌های کلبسیلا پنومونیه، باسیلوس سوبتلیس و اشریشیاکلی به عنوان کنترل ندارد و همچنین میزان حساسیت آن ۰/۵ نانوگرم ارزیابی شد. فراوانی جدایه‌های بالینی مقاوم به متی‌سیلین با روش انتشار دیسک، آگار دایلوشن و PCR-ELISA به ترتیب ۶۰، ۵۸/۵ و ۶۰ درصد بود.
نتیجه‌گیری: تکنیک PCR-ELISA به عنوان روشی حساس و دقیق به منظور شناسایی عوامل بیماری‌زا با استفاده از ژن اختصاصی آنها شناخته شده است. این روش می‌تواند به عنوان روش جایگزین مناسبی برای تکنیک‌های زمان‌بر، با حساسیت کمتر و هزینه بیشتر همچون Real-time PCR و تست‌های بیوشیمیایی افتراقی که در آزمایشگاه‌ها استفاده می‌شوند، به کار رود.
مواد و روش کار: ابتدا پرایمرهای اختصاصی مربوط به ژن mecA طراحی شد. سپس از dNTP نشان‌دارشده به همراه دیگوکسی ژنین برای تکثیر ژن mecA استفاده شد. محصولات نشان‌دارشده به کف چاهک‌های واجد استراپتویدین متصل و با آنتی‌بادی کانژوگه ضدنشان DIG شناسایی شد. همچنین از پروب DNA اختصاصی نشان‌دارشده با بیوتین برای ژن mecA استفاده و در نهایت حساسیت و اختصاصیت روش تعیین شد. برای این منظور مقاومت به متی‌سیلین در ۷۰ جدایه بالینی با روش انتشار دیسک، آگار دایلوشن و PCR-ELISA ارزیابی شد.
یافته‌ها: با استفاده از پرایمرهای اختصاصی، ژن mecA باکتری استافیلوکوکوس اورئوس تکثیر شد که نتیجه آن یک قطعه به طول ۳۱۰ جفت باز بود. نتایج حاصل از PCR-ELISA نشان داد این تکنیک هیچ واکنش متقاطعی با باکتری‌های کلبسیلا پنومونیه، باسیلوس سوبتلیس و اشریشیاکلی به عنوان کنترل ندارد و همچنین میزان حساسیت آن ۰/۵ نانوگرم ارزیابی شد. فراوانی جدایه‌های بالینی مقاوم به متی‌سیلین با روش انتشار دیسک، آگار دایلوشن و PCR-ELISA به ترتیب ۶۰، ۵۸/۵ و ۶۰ درصد بود.
نتیجه‌گیری: تکنیک PCR-ELISA به عنوان روشی حساس و دقیق به منظور شناسایی عوامل بیماری‌زا با استفاده از ژن اختصاصی آنها شناخته شده است. این روش می‌تواند به عنوان روش جایگزین مناسبی برای تکنیک‌های زمان‌بر، با حساسیت کمتر و هزینه بیشتر همچون Real-time PCR و تست‌های بیوشیمیایی افتراقی که در آزمایشگاه‌ها استفاده می‌شوند، به کار رود.
نوع مطالعه: مقاله پژوهشی |
موضوع مقاله:
میکروب شناسی مولکولی
دریافت: 1396/9/28 | پذیرش: 1398/4/1 | انتشار الکترونیک: 1398/4/31
دریافت: 1396/9/28 | پذیرش: 1398/4/1 | انتشار الکترونیک: 1398/4/31
فهرست منابع
1. Nazari MR, Sekawi Z, Sadeghifard N, Raftari M, Ghafourian S. Methicillin-Resistant Staphylococcus Aureus: A Systematic Review. Rev Med Microbiol. 2015; 26(1):1-7. [DOI:10.1097/MRM.0000000000000023]
2. Laupland KB, Lyytikäinen O, Søgaard M, Kennedy KJ, Knudsen JD, Ostergaard C, et al .The Changing Epidemiology of Staphylococcus Aureus Bloodstream Infection: A Multinational Population-Based Surveillance Study. Clin Microbiol Infect. 2013; 19:465-471.
https://doi.org/10.1111/j.1469-0691.2012.03903.x [DOI:10.1111/1469-0691.12144] [PMID]
3. Tong SY, Davis JS, Eichenberger E, Holland TL, Fowler VG Jr. Staphylococcus Aureus Infections: Epidemiology, Pathophysiology, Clinical Manifestations, and Management. Clin Microbiol Rev. 2015; 28:603-661. [DOI:10.1128/CMR.00134-14] [PMID] [PMCID]
4. Chen CJ, Huang YC. New Epidemiology of Staphylococcus Aureus Infection in Asia. Clin Microbiol Infect. 2014; 20(7):605-623. [DOI:10.1111/1469-0691.12705] [PMID]
5. Hiramatsu K, Ito T, Tsubakishita S, Sasaki T, Takeuchi F, Morimoto Y, et al. Genomic Basis for Methicillin Resistance in Staphylococcus Aureus. Infect Chemother. 2013; 45:117-136. [DOI:10.3947/ic.2013.45.2.117] [PMID] [PMCID]
6. Purrello SM, Garau J, Giamarellos E, Mazzei T, Pea F, Soriano A, et al. Methicillin-Resistant Staphylococcus Aureus Infections: A Review of the Currently Available Treatment Options. J Glob Antimicrob Resist. 2016; 7:178-186. [DOI:10.1016/j.jgar.2016.07.010] [PMID]
7. Tan TY, Corden S, Barnes R, Cookson B. Rapid Identification of Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus from Positive Blood Cultures by Real-Time Fluorescence PCR. J Clin Microbiol. 2001; 39(12):4529-4531. [DOI:10.1128/JCM.39.12.4529-4531.2001] [PMID] [PMCID]
8. Martineau F, Picard FJ, Roy PH, Ouellette M, Bergeron MG. Species-Specific and Ubiquitous-DNA-Based Assays for Rapid Identification of Staphylococcus Aureus. J Clin Microbiol. 1998; 36: 618-623.
9. Chapin K , Musgnug M. Evaluation of Three Rapid Methods for the Direct Identification of Staphylococcus Aureus From Positive Blood Cultures. J Clin Microbiol. 2003; 41: 4324-4327. [DOI:10.1128/JCM.41.9.4324-4327.2003] [PMID] [PMCID]
10. Hamula CL, Zhang H, Li F, Wang Z, Le XC, Li XF. Selection and Analytical Applications of Aptamers Binding Microbial Pathogens. Trends Analyt Chem. 2011; 30: 1587-1597. [DOI:10.1016/j.trac.2011.08.006]
11. Lee JO, So HM, Jeon EK, Chang H, Won K, Kim YH. Aptamers as Molecular Recognition Elements for Electrical Nanobiosensors. Anal Bioanal Chem. 2008; 390: 1023-1032. [DOI:10.1007/s00216-007-1643-y] [PMID] [PMCID]
12. Sue MJ, Yeap SK, Omar AR, Tan SW. Application of PCR-ELISA in Molecular Diagnosis. BioMed Res Int. 2014; 2014. [DOI:10.1155/2014/653014] [PMID] [PMCID]
13. Havaei SA, Halaji M, Vidovic S, Dillon Jo-AR, Karbalaei M, Ghanbari F, et al. Prevalence and Genotyping of Methicillin-Resistant and-Susceptible Staphylococcus Aureus Strains Isolated From Patients in a University Hospital, Isfahan, Iran. Jundishapur J Microbiol. 2017; 10: e13571. [DOI:10.5812/jjm.13571]
14. Hamdan-Partida A, Sainz-Espuñes T, Bustos-MartínezJ. Characterization and Persistence of Staphylococcus Aureus Strains Isolated From the Anterior Nares and Throats of Healthy Carriers in a Mexican Community. J Clin Microbiol. 2010; 48: 1701-1705. [DOI:10.1128/JCM.01929-09] [PMID] [PMCID]
15. Zhang K, McClure JA, Elsayed S, LouieT, Conly JM. Novel Multiplex PCR Assay for Characterization and Concomitant Subtyping of Staphylococcal Cassette Chromosome Mec Types I to V in Methicillin-Resistant Staphylococcus Aureus. J Clin Microbiol. 2005; 43: 5026-33. [DOI:10.1128/JCM.43.10.5026-5033.2005] [PMID] [PMCID]
16. Wolk DM, Blyn LB, Hall TA, Sampath R, Ranken R, Ivy C,et al. Pathogen Profiling: Rapid Molecular Characterization of Staphylococcus Aureus by PCR/Electrospray Ionization-Mass Spectrometry and Correlation With Phenotype. J Clin Microbiol. 2009; 4737-3129. [DOI:10.1128/JCM.00709-09] [PMID] [PMCID]
17. Graveland H, Wagenaar JA, Heesterbeek H, Mevius D, Van Duijkeren E, Heederik D. Methicillin Resistant Staphylococcus Aureus ST398 in Veal Calf Farming: Human MRSA Carriage Related With Animal Antimicrobial Usage and Farm Hygiene. PLoS One. 2010; 5(6): e10990. [DOI:10.1371/journal.pone.0010990] [PMID] [PMCID]
18. Ružauskas M, Couto N, Šiugždinienė R, Belas A, Klimienė I, Virgailis M, et al. Occurrence and Characterization of Livestock-Associated Methicillin-Resistant Staphylococcus Aureus. Veterinarija ir Zootechnika. 2014; 66.
19. Najar PS, Azimian A, Mostafaei M, Siadat SD. Identification of Methicillin-Resistant Staphylococcus Aureus by Disk Diffusion Method, Determination of MIC and PCR for MecA Gene. Pathobiol Res. 2009; 12:61-69.
20. Gilligan K, Shipley M, Stiles B, Hadfield TL, Ibrahim MS. Identification of Staphylococcus Aureus Enterotoxins A and B Genes by PCR-ELISA. Mol Cell Probes. 2000; 14:71-78. [DOI:10.1006/mcpr.2000.0286] [PMID]
| بازنشر اطلاعات | |
 |
این مقاله تحت شرایط Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License قابل بازنشر است. |