TY - JOUR JF - Iran-J-Med-Microbiol JO - Iran J Med Microbiol VL - 13 IS - 1 PY - 2019 Y1 - 2019/5/01 TI - Determination of PCR-ELISA Diagnostic Value in Comparison With Classical Methods and PCR to Detect Resistance to Methacillin TT - تعیین ارزش تشخیصی PCR-ELISA نسبت به روش‌های کلاسیک و PCR برای شناسایی سویه‌های استافیلوکوکوس اورئوس مقاوم به متی‌سیلین N2 - زمینه و هدف: شیوع بالای ایزوله‌های استافیلوکوکوس اورئوس که به آنتی‌بیوتیک متی‌سیلین مقاوم هستند و همچنین ایجاد مقاومت چند دارویی در این باکتری، درمان عفونت‌های ناشی از این باکتری را با مشکل مواجه کرده است. به همین خاطر شناسایی سویه‌های MRSA با روش‌های سریع و دقیق ضروری است. PCR-ELISA روش مولکولی دقیقی است که برای شناسایی باکتری‌های مختلفی استفاده شده است. هدف از این تحقیق شناسایی باکتری استافیلوکوکوس اورئوس مقاوم به متی‌سیلین با روش PCR-ELISA است. مواد و روش کار: ابتدا پرایمرهای اختصاصی مربوط به ژن mecA طراحی شد. سپس از dNTP نشان‌دارشده به همراه دیگوکسی ژنین برای تکثیر ژن mecA استفاده شد. محصولات نشان‌دارشده به کف چاهک‌های واجد استراپتویدین متصل و با آنتی‌بادی کانژوگه ضدنشان DIG شناسایی شد. همچنین از پروب DNA اختصاصی نشان‌دارشده با بیوتین برای ژن mecA استفاده و در نهایت حساسیت و اختصاصیت روش تعیین شد. برای این منظور مقاومت به متی‌سیلین در ۷۰ جدایه بالینی با روش انتشار دیسک، آگار دایلوشن و PCR-ELISA ارزیابی شد. یافته‌ها: با استفاده از پرایمرهای اختصاصی، ژن mecA باکتری استافیلوکوکوس اورئوس تکثیر شد که نتیجه آن یک قطعه به طول ۳۱۰ جفت باز بود. نتایج حاصل از PCR-ELISA نشان داد این تکنیک هیچ واکنش متقاطعی با باکتری‌های کلبسیلا پنومونیه، باسیلوس سوبتلیس و اشریشیاکلی به عنوان کنترل ندارد و همچنین میزان حساسیت آن ۰/۵ نانوگرم ارزیابی شد. فراوانی جدایه‌های بالینی مقاوم به متی‌سیلین با روش انتشار دیسک، آگار دایلوشن و PCR-ELISA به ترتیب ۶۰، ۵۸/۵ و ۶۰ درصد بود. نتیجه‌گیری: تکنیک PCR-ELISA به عنوان روشی حساس و دقیق به منظور شناسایی عوامل بیماری‌زا با استفاده از ژن اختصاصی آنها شناخته شده است. این روش می‌تواند به عنوان روش جایگزین مناسبی برای تکنیک‌های زمان‌بر، با حساسیت کمتر و هزینه بیشتر همچون Real-time PCR و تست‌های بیوشیمیایی افتراقی که در آزمایشگاه‌ها استفاده می‌شوند، به کار رود. SP - 22 EP - 31 AU - Rezavand, Susan AU - Amani, Jafar AU - Akbari, Neda AU - Mohajerani, Hamid Reza AU - Nazarian, Shahram AU - Mahmoodzadeh Hosseini, Hamideh AU - Moosazadeh Moghaddam, Mehrdad AD - Applied Microbiology Research Center, Systems Biology and Poisonings Institute, Baqiyatallah University of Medical Sciences, Tehran, Iran KW - Staphylococcus aureus KW - Antibiotic resistance KW - PCR-ELISA KW - mecA gene UR - http://ijmm.ir/article-1-795-fa.html DO - 10.30699/ijmm.13.1.22 ER -